CC BY
24
ВЕТЕРИНАРНАЯ МЕДИЦИНА
УДК 619:618.14-002:615.7
Фармако-токсикологические свойства и эффективность применения озонированной эмульсии при остром эндометрите у коров
Игорь Геннадьевич Конопельцев, доктор вет. наук,, профессор, Елена Сергеевна Муравина, аспирант,,
Александр Федорович Сапожников, кандидат вет.. наук, доцент ФГБОУ ВПО Вятская ГСХА, г. Киров, Россия
E-mail: [email protected]
В статье представлены данные о фармако-токсикологических свойствах озонированной эмульсии и о новом способе терапии больных острым эндометритом коров с её использованием. Предлагаемый способ терапии позволяет повысить эффективность проводимых лечебных мероприятий и сократить у коров период от отела до оплодотворения.
Ключевые слова: фармако-токсикологические свойства, озонированная эмульсия, терапия, эндометрит, коровы
Одним из сдерживающих факторов динамичного развития сельскохозяйственных предприятий, занимающихся разведением скота молочных пород, является высокая заболеваемость коров послеродовым острым эндометритом [1]. Эффективные меры борьбы с данной акушерской патологией позволяют свести до минимума количество животных в хозяйстве с хроническим и субклиническим эндометритом и, как следствие, снизить в стаде число коров с патологией яичников. Кроме того, рекомендуемые средства для лечения животных в обязательном порядке подвергаются фармако-токсикологи-ческой оценке и их применение не должно приводить к снижению качества животноводческой продукции. Поэтому современная ветеринарная медицина характеризуется постоянным поиском и внедрением в практику экологически безопасных, дешевых и высокоэффективных способов и средств лечения коров, больных острым эндометритом. К ним можно отнести и озони-дотерапию [2].
Цель исследований - оценить фарма-ко-токсикологические свойства и терапевтическую эффективность озонированной эмульсии при послеродовом остром эндометрите у коров.
Материал и методы. О свойствах озонированной эмульсии (при оптимальном содержании озонидов) судили по острой и
хронической токсичности на белых мышах массой тела 20-25 г, раздражающему действию, проявлению гиперчувствительности немедленного и замедленного типов на морских свинках массой тела 250-280 г [3, 4, 5].
Для определения острой токсичности озонированную эмульсию разводили стерильным физиологическим раствором с шагом 2 (0,02; 0,04; 0,08; 0,16; 0,32 и 0,5 мл). Каждое разведение гомогенизировали до получения однородной масляной эмульсии и вводили внутрибрюшинно 5 белым мышам (п = 30). Максимальная из введенных доз при этом составила 0,5 мл, что равнялось 20 лечебным дозам. Объем лечебной дозы рассчитывали исходя из планируемой средней лечебной дозы (75,0 мл) для коров при остром эндометрите с учётом коэффициентов отношения массы и площади поверхности тела животных. После введения данного средства за мышами наблюдали в течение 7 суток, регистрируя проявления интоксикации (изменение поведенческих, температурных реакций, снижение массы тела) и их гибель. Белым мышам (п = 10) контрольной группы внутрибрюшинно вводился физиологический раствор в объеме по 0,5 мл. По прошествии 24 часов и через 7 суток от момента введения эмульсии и физраствора натрия хлорида часть животных из каждой группы усыпляли эфирным наркозом для оценки патологоанатомической и гистологи-
ческой картины. С этой же целью все павшие в ходе опыта животные подвергались вскрытию.
Для определения хронической токсичности озонированную эмульсию вводили внутрибрюшинно одной группе белых мышей (п = 10) в количестве 0,02 мл совместно с 0,48 мл физраствора, а другой (п = 10) - в количестве 0,04 мл совместно с 0,46 мл физраствора. Препарат вводили пятикратно с интервалом между инъекциями в одни сутки. Животным контрольной группы (п = 10) в те же сроки в объеме 0,5 мл внут-рибрюшинно вводили физиологический раствор. Наблюдение за лабораторными животными осуществляли в течение всего срока введения препаратов, а также на протяжении 7 суток от момента последней инъекции, регистрируя при этом возможные проявления интоксикации. Через 24 часа и 7 суток от момента последнего введения данных растворов часть животных усыпляли хлороформом для оценки патоморфологи-ческой картины.
Для оценки местного действия озонированную эмульсию назначали группе белых мышей (п = 7) внутримышечно пятикратно, с интервалом в одни сутки, объем эмульсии для однократного введения составил 0,02 мл (одна лечебная доза). Контрольной группе животных (п = 7) в таком же объеме и в те же сроки инъекцировали физиологический раствор.
Определение гиперчувствительности немедленного типа проводили методом воспроизведения анафилаксии у морских свинок (п = 15). Для этого животных предварительно сенсибилизировали путем трехкратного введения озонированной эмульсии с интервалом между инъекциями в одни сутки. Первая сенсибилизирующая инъекция проводилась подкожно, две последующие -внутримышечно. Количество эмульсии для однократного введения составляло 0,12 мл. Через две недели после заключительной сенсибилизирующей инъекции животным внутрибрюшинно вводили разрешающую дозу эмульсии (0,25 мл), после чего за ними наблюдали в течение 30 минут. Тяжесть шока оценивали по следующей шкале: А -взъерошивание шерсти, почесывание лапами морды; Б - периодическое чихание, пониже-
ние температуры; В - спастический кашле-вой синдром, падение на бок; Г - резкое нарушение дыхания, судороги, гибель в течение 5.. .7 минут; Д - реакция отсутствует.
Индекс синдрома в группе вычисляли по формуле Вейгла [5]:
И =
(А х 1) + (Б х 2) + (В х 3) + (Г х 4)
А + Б + В + Г + Д В качестве положительного контроля использовались животные (п = 10), подготовленные к шоку сенсибилизацией нормальной лошадиной сывороткой, введенной подкожно двукратно, в количестве 0,1 мл за две недели до разрешающей внутрисердеч-ной инъекции этого препарата в количестве 0,2 мл. Животным группы отрицательного контроля (п = 10) вместо предварительных сенсибилизирующих инъекций по такой же схеме вводился физиологический раствор.
Гиперчувствительность замедленного типа характеризовали по изменению массы конечности животных. Для этого белых мышей (п = 10) сенсибилизировали внутрибрю-шинно двукратно, с интервалом в одни сутки одной лечебной дозой озонированной эмульсии (0,02 мл). Спустя 5 суток после заключительной сенсибилизирующей инъекции в подушечку одной задней лапы вводили 0,05 мл озонированной эмульсии, другой - такой же объем физиологического раствора. Через сутки животных усыпляли хлороформом, задние лапы ампутировали по уровню пяточного сустава и проводили их взвешивание. По разнице массы лап оценивали уровень воспалительной реакции (отека). Индекс отека рассчитывали по формуле [5]:
И = х100%,
Вк
где Во - масса опытной лапы; Вк - масса контрольной лапы.
В качестве контроля в данном эксперименте были использованы животные, которым вводился физиологический раствор.
Научно-производственный опыт по оценке терапевтической эффективности озонированной эмульсии провели в период 2010-2012 гг. на животноводческом комплексе ЗАО «Агрофирма «Дороничи» Кировской области на коровах черно-пестрой голштини-зированной породы с молочной продуктивно-
стью 5,1-8 тыс. кг (в среднем 6,3 тыс. кг). После постановки диагноза на послеродовой острый гнойно-катаральный эндометрит больных коров по принципу аналогов разделили на подопытных и контрольных.
Всех животных лечили по следующей схеме: 1-й день - 2%-ный раствор синэстрола 2,0 мл, ультравит - 15 мл, селемаг - 25 мл, пресакральная блокада по С.Г. Исаеву с использованием 1%-ного раствора новокаина -100 мл; 3-й день - окситоцин 40 ЕД, пресакральная блокада по С.Г Исаеву; 5-й день -окситоцин 40 ЕД; 7-й день - ультравит 15 мл и окситоцин 40 ЕД. Дополнительно коровам подопытной группы с учётом размеров рогов матки и количества в них экссудата внутри-маточно назначали озонированную эмульсию в количестве: в первый день лечения 125 мл или 100 мл, в третий - 100 или 75 мл, в пятый - 75 или 50 мл, в седьмой - 50 или 25 мл с интервалом 48 часов до клинического выздоровления, а животным контрольной группы - Эндометромаг в тех же дозах и с тем же интервалом.
Кровь у подопытных животных исследовали до начала лечения, при наступлении клинического выздоровления и спустя 10 дней после исчезновения признаков воспаления слизистой оболочки матки. Для сравнительного анализа использовали кровь клинически здоровых коров по окончанию послеродового периода (30-35 дней). В сыворотке крови определяли общий белок рефрактометрическим методом, белковые фракции - нефелометрическим методом по Оллу и Маккорду в модификации С.А. Кар-пюка [6], общие иммуноглобулины с применением (б/в, х.ч.), циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) по П.В. Бара-
новскому и В.С. Данильшину [7], активность щелочной фосфатазы - коммерческим набором фирмы "Vital". Состояние процессов пероксидации липидов (ПОЛ) в сыворотке крови оценивали по изменению концентраций малонового диальдегида (МДА), церуло-плазмина и SH-групп [8].
Результаты и их обсуждение. При определении острой токсичности озонированной эмульсии на белых мышах в течение периода наблюдения у отдельных животных, составляющих опытную группу, которым вводилось изучаемое средство в максимальных дозах, регистрировались отказ от пищи, снижение двигательной активности, взъерошивание волосяного покрова. Величина ЛД50 при внутрибрюшинном введении составила 0,562 мл, что превышает расчетную терапевтическую дозу более чем в 10 раз. Вскрытие животных опытной и контрольной групп, усыпленных в контрольные сроки, не выявило у них патологии внутренних органов.
При определении хронической токсичности озонированной эмульсии на белых мышах в течение срока наблюдения гибели животных, а также других патологических проявлений, зарегистрировано не было. При вскрытии животных признаков дистрофии, воспаления и гемодинамических нарушений не отмечено. Гистологическое исследование секционного материала также не выявило патологических изменений внутренних органов.
За время наблюдения признаков местного воспалительного и раздражающего действия препарата установлено не было.
Определение гиперчувствительности немедленного типа проводили методом воспроизведения анафилаксии у морских свинок (табл. 1)
Таблица 1
Проявления анафилаксии у морских свинок
Показатель Кол-во животных Количество животных с проявлениями анафилаксии Индекс синдрома в группе
А Б В Г Д
Озонированная эмульсия 15 0 0 0 0 15 0
Лошадиная сыворотка 10 1 4 3 2 0 2,6
Физраствор 10 0 0 0 0 10 0
В результате данного исследования было доказано, что озонированная эмульсия не оказывает анафилактогенного действия на морских свинок.
Кроме того, в эксперименте установили, что индекс отека в обеих группах практически был одинаков, что свидетельствует о том, что озонированная эмульсия не вызывает реакций гиперчувствительности замедленного типа (табл. 2).
Результаты по оценке терапевтической эффективности озонированной эмульсии, в составе комплексной схемы применения фармакологических средств, при послеродовом остром гнойно-катаральном эндометрите у коров после нормальных родов показаны в таблице 3.
Несмотря на то, что клиническое выздоровление всех животных констатировали в обеих группах, в среднем для лечения одной коровы озонированной эмульсии было израсходовано на 168 мл меньше, чем Эндо-метромага, а также коэффициент оплодотворения коров подопытной группы составил 1,52, а животных контрольной группы - 1,9, что указывает на большее количество затраченных доз спермы на их оплодотворение. Различие в периоде бесплодия между животными подопытной и контрольной групп составило 24 дня, что позволяет более интенсивно использовать продуктивный и репродуктивный генетический потенциал коров, лечившихся с применением озонированной эмульсии.
Таблица 2
Проявления гиперчувствительности замедленного типа у белых мышей
Препарат Средняя масса лапы, мг Индекс отека
для сенсибилизирующей инъекции опытной контрольной в группе, %
Озонированная эмульсия 148,6 ±11,7 145,8 ±14,1 1,92
Физиологический раствор 145,4±9,9 142,7±12,8 1,89
Таблица 3
Лечебная эффективность озонированной эмульсии при послеродовом остром эндометрите у коров (п = 21)
Показатель Озонированная эмульсия Эндометромаг
Выздоровело, коров/% 21/100 21/100
Количество внутриматочных введений 6,6±0,3* 8,9±0,5
Израсходовано препарата в среднем на корову, мл 307,5± 23,9* 476,2±37,1
Оплодотворилось в течение года, коров/% 21/100 21/100
Оплодотворилось после 1 -го осеменения, коров/% 11/52,3 7/33,3
Коэффициент оплодотворения 1,52±0,13* 1,9±0,11
Количество дней бесплодия 51,6±3,9* 75,8±5,4
* Р< 0,05... 0,001 по отношению к Эндометромагу
Клиническое выздоровление коров, леченных с использованием озонированной эмульсии, по отношению к исходным значениям сопровождалось достоверным (Р<0,05...0,001) повышением в крови им-
муноглобулинов (на 31,9%), циркулирующих иммунных комплексов крупных размеров (С3) (на 55,7%) и снижением концентрации малонового диальдегида (на 25,9%). Через 10 дней после клинического выздо-
ровления у животных восстанавливалось равновесие в накоплении и нейтрализации продуктов ПОЛ (выровнялся уровень МДА при заметной активизации церулоплазмина и SH-групп), а также отмечалось затухание процессов антителогенеза и образования циркулирующих иммунных комплексов крупного размера со средними значениями их инфекционности (С4/С3 = 2,2), что указывает на элиминацию антигена. По отношению к не заболевшим острым эндометритом животным в сыворотке крови был достоверно (Р<0,05...0,001) ниже уровень общего белка (на 10%), ЦИКов С3 (на 72,8%) и отношение С4/С3 (на 33%).
Выводы. Озонированная эмульсия в лечебной дозе является нетоксичной и низко реактогенной, величина ЛД50 при внутри-брюшинном введении превышает расчетную терапевтическую дозу более чем в 10 раз, а ее применение не сопровождается признаками местного воспалительного и раздражающего действия, она не обладает анафи-лактогенным действием и не вызывает реакций гиперчувствительности замедленного типа. Применение озонированной эмульсии при комплексной терапии коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, позволяет сократить срок болезни и период бесплодия, что обеспечивает оптимизацию воспроизводительной способности и гарантирует получение качественной животноводческой продукции.
Список литературы
1. Шабунин С.В., Нежданов А.Г., Шабу-нин С.В. Системное решение проблемы сохранения воспроизводительной способности и продуктивного долголетия молочного скота // Современные проблемы ветеринарного акушерства и биотехнологии воспроизведения животных: Мат. межд. науч.-практ. конф. Воронеж, 2012. С. 10-20.
2. Конопельцев И.Г. Озонотерапия и озонопрофилактика воспалительных заболеваний и функциональных расстройств матки у коров: Автореферат дис. ... д-ра вет. наук. Воронеж, 2004. 40 с.
3. Доклинические испытания новых медицинских иммунобиологических препаратов. Основные положения. Методические указания. РД 42-28-8-89. М., 1989. С. 28-36.
4. Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям. Методические указания. Мук 4.1/4.2.588-96. М., 1996. 128 с.
5. Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов. Санитарные правила СП 3.3.2.561-96. М., 1996. С. 8-54.
6. Карпюк С.А. Определение белковых фракций сыворотки крови экспресс методом // Лабораторное дело. 1962. № 7. С. 363-367.
7. Барановский П.В., Данильшин В.С. Определение циркулирующих иммунных комплексов // Лабораторное дело. 1983. № 5. С. 62-63.
8. Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике. М., 2002. Т 2. 71 с.
Pharmaco-toxicological property and efficiency of use of ozoned emulsion at endometritis at cows
Konopeltsev I., Muravina E., Sapozhnikov A.
The information about the pharmaco-toxicological property and efficiency of treatment at sharp post-natal endometritis at cows are presented. The new method of therapy of cows is proposed allows to raise efficiency of conducted actions and shorten period from calved to fertizations.
Key word: pharmaco-toxicological property, ozonired emulsion, endometritis, therapy, cow
