CC BY
14
Vestnik of OmskSAU, 2022, no. 2(46) VETERINARY AND ZOOTECHNY
Научная статья
УДК 619:616.34:636.4
DOI 10.48136/2222-0364 2022 2 115
Энтеробиоценоз поросят с симптомокомплексом диареи Т.И. Лоренгельн, Е.О. Шабанова
Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина, Омск, Россия
Аннотация. Цель исследований - изучение энтеробиоценоза желудочно-кишечного тракта поросят с симптомокомплексом диареи и определение чувствительности выделенной микрофлоры к антибактериальным препаратам. Объектом исследования являлись поросята (возраст от рождения до двух месяцев) крупной белой породы и ландрас с диарейным симптомокомплексом. Материалом для исследований служили пробы фекалий, полученные стерильным тупфером из прямой кишки. Исследования проводились общепринятыми микробиологическими методами. В результате установлено, что ведущая роль в энтеробиоценозе желудочно-кишечного тракта поросят с диарейным симптомокомплексом принадлежит энтеробактериям. Микробные ассоциации микроорганизмов выделены из 38 проб (76%) фекалий, полученных от больных поросят. Среди выделенных культур преобладали Escherichia coli (О26, О8, О33) и Proteus vulgaris как в монокультуре, так и в различных сочетаниях с другими условно-патогенными микроорганизмами. Ассоциации микроорганизмов были представлены: Escherichia coli + Proteus vulgaris (28,9%), Escherichia coli + Enterobacter aerogenes (23,7%), Escherichia coli + Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis + Enterococcus fecalis и Klebsiella pneumoniae + Citrobacter freundii (10,5% каждая) и Escherichia coli + Enterococcus fecalis (7,9%). Реже изолировали сочетания, представленные тремя видами условно-патогенных микроорганизмов: Proteus mirabilis + Klebsiella pneumonia + Citrobacter freundii и Escherichia coli + Proteus vulgaris + Enterococcus fecalis 5,3% и 2,6% соответственно. В монокультуре преобладала Escherichia coli среди других видов микроорганизмов, частота ее выделения - 41,7%. Кроме кишечной палочки, в монокультуре изолировали Proteus vulgaris (25%), Klebsiella pneumoniae (25%) и Citrobacter freundii (8,3%). Большинство изолированных микроорганизмов проявили высокую чувствительность к антибактериальным препаратам из групп цефалоспоринов и фторхинолонов.
Ключевые слова: энтеробиоценоз, желудочно-кишечный тракт, поросята, симптомокомплекс диареи
Original article
Entrobiocenosis of piglets with diarrhea symptom complex T.I. LorengeF, E.O. Shabanova
Omsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin, Omsk, Russia
Abstract. The purpose of the research is to study the enterobiocenosis of the gastrointestinal tract of piglets with diarrheal symptom complex and to determine the sensitivity of the isolated microflora to antibacterial drugs. The objects of the study were piglets from birth to 2 months of Large White breed and Landrace with a diarrheal symptom complex. Fecal samples obtained from the rectum with a sterile swab served as material for the research. The studies were carried out by conventional microbiological methods. As a result of the research, it was found that the leading role in the enterobiocenosis of the gastrointestinal tract of piglets with diarrheal symptom complex belongs to enterobacteria. Microbial associations of microorganisms were isolated from 38 samples (76%) of faeces obtained from sick piglets. Among the isolated cultures, Escherichia coli (O26, O8, O33) and Proteus vulgaris prevailed, both in monoculture and in various combinations with other conditionally pathogenic microorganisms. Associations of microorganisms were represented by: Escherichia coli + Proteus vulgaris (28.9%), Escherichia coli + Enterobacter aerogenes (23.7%), Escherichia coli + Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis + Enterococcus fecalis and Klebsiella pneumoniae + Citrobacter freundii (10.5% each) and Escherichia coli + Enterococcus fecalis (7.9%). Combinations represented by three types of opportunistic micro-
© Лоренгель Т.И., Шабанова Е.О., 2022
Vestnik of OmskSAU, 2022, no. 2(46) VETERINARY AND ZOOTECHNY
organisms were least identified: Proteus mirabilis + Klebsiella pneumonia + Citrobacter freundii and Escherichia coli + Proteus vulgaris + Enterococcus fecalis 5.3% and 2.6%, respectively. In the monoculture, Escherichia coli prevailed over other types of microorganisms; the frequency of its isolation was 41.7%. In addition to E. coli, Proteus vulgaris (25%), Klebsiella pneumoniae (25%) and Citrobacter freundii (8.3%) were isolated in monoculture. Most of the isolated microorganisms showed high sensitivity to antibacterial drugs from the groups of ce-phalosporins and fluoruquinolones.
Keywords: enterobiocenosis, gastrointestinal tract, piglets, diarrheal symptom complex
Введение
Массовые желудочно-кишечные заболевания поросят, проявляющиеся диарей-ным симптомокомплексом, - значительная проблема, причиняющая большой экономический ущерб крупным промышленным свиноводческим комплексам. Основная гибель поросят приходится на первые две-три недели жизни и 15-20 дней после отъема [1]. Смертность молодняка от заболеваний, проявляющихся диареей, варьирует от 41,3 до 81,9% [2]. От условий кормления и содержания животных зависит возникновение кишечных патологий, особую роль играют молозивный период и состояние здоровья свиноматки, а также воздействие патогенных агентов, циркулирующих в популяции животных [3].
Этиологическая структура возбудителей желудочно-кишечных болезней поросят представлена условно-патогенными микроорганизмами, все чаще встречающимися в виде различных и весьма разнообразных ассоциаций. Повышение роли условно-патогенной микрофлоры обусловлено влиянием различных факторов, в результате она приобретает агрессивность и способность, проникая в организм животного, вызывать патологические изменения в органах и тканях [4; 5]. Наиболее частые сочлены энтеро-биоценоза - представители энтеробактерий, энтерококков и стафилококков [6]. Они широко распространены в окружающей среде и представляют нормофлору тела животного [7].
Сложная этиологическая структура желудочно-кишечных болезней поросят с симптомокомплексом диареи, быстрое распространение и массовый характер затрудняют раннюю диагностику этой патологии [8; 9]. Для обеспечения высокого лечебного эффекта и предотвращения циркуляции в свиноводческих хозяйствах антибиотикоре-зистентных штаммов микроорганизмов необходимо не только своевременное выделение возбудителя и подтверждение его патогенности, но и установление спектра чувствительности к антибактериальным препаратам [10].
В связи с вышеизложенным цель исследования - изучение энтеробиоценоза желудочно-кишечного тракта поросят с симптомокомплексом диареи и определение чувствительности выделенной микрофлоры к антибактериальным препаратам.
Материалы и методы
Объектом исследования являлись поросята (n = 50) в возрасте от рождения до двух месяцев крупной белой породы и ландрас с диарейным симптомокомплексом. Материалом для исследований служили пробы фекалий, полученные стерильным тупфе-ром из прямой кишки. Пробы помещали в транспортную среду и в сумке-холодильнике доставляли в лабораторию.
Выделение и идентификацию изолированных культур микроорганизмов проводили в соответствии с методическими указаниями: «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных» (Минсельхоз России № 13-5-02/1043 2004 г.); «Методические указания по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями», (Минсельхозпрод России № 13-7-2/1759, 1999 г.) и «Методические указания по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных» (Минсельхоз России № 13-7-2/2117, 2000 г.).
Vestnik of OmskSAU, 2022, no. 2(46) VETERINARY AND ZOOTECHNY
Серотипировали выделенные культуры E. coli согласно «Наставлению по применению агглютинирующих О-коли-сывороток» (1980 г.).
Патогенность выделенных культур микроорганизмов определяли при посеве на кровяной агар и постановке биопробы на лабораторных животных, которым внутри-брюшинно вводили 0,5 мл бактериальной суспензии в концентрации 0,5* 109 м.т./мл. Культуру считали патогенной при гибели двух и более лабораторных животных в течение трех суток после заражения. Контрольным животным вводили 0,5 мл стерильного 0,9%-ного физиологического раствора, срок наблюдения - 5 сут.
Определение чувствительности выделенных микроорганизмов к химиотерапевти-ческим препаратам проводили диско-диффузионным методом с использованием агара Гивенталя-Ведьминой (АГВ) и стандартных бумажных дисков, пропитанных антимикробными препаратами, руководствуясь клиническими рекомендациями по определению чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (Москва, 2015) и в соответствии с МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам».
Результаты исследований
У поросят с симптомокомплексом диареи клинические признаки варьировали. У большинства больных животных (82%) температура была в пределах физиологической нормы (38,5-39,5°С). Отмечали усиление перистальтики кишечника, сопровождалось это частой дефекацией, фекалии были желтого или желтовато-белого цвета, жидкой консистенции с пузырьками газа или без них. У некоторых поросят (18%) регистрировали более тяжелое течение: угнетение, отказ от корма, повышение температуры (40,541 °С); фекалии желтого цвета, пенистые, с комочками свернувшегося молока.
В результате проведенных бактериологических исследований установлено: ассоциации микроорганизмов, представленные двумя, тремя видами, превалируют над монокультурой. Микробные ассоциации выделены из 38 проб (76%) фекалий, полученных от больных поросят. Всего выделено восемь разных сочетаний микроорганизмов. Так, ассоциация микроорганизмов Escherichia coli + Proteus vulgaris изолирована из 11 проб фекалий (28,9%), Escherichia coli + Enterobacter aerogenes - из 9 (23,7%), такие ассоциации, как Escherichia coli + Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis + Enterococcus fecalis и Klebsiella pneumoniae + Citrobacter freundii, выделены из четырех проб каждая (10,5%) и Escherichia coli + Enterococcus fecalis - из трех (7,9%). Реже всего изолировали сочетания, представленные тремя видами условно-патогенных микроорганизмов: Proteus mirabilis + Klebsiella pneumonia + Citrobacter freundii и Escherichia coli + Proteus vulgaris + Enterococcus fecalis 5,3% и 2,6% соответственно (табл. 1).
Таблица 1
Ассоциации микроорганизмов, выделенные из фекалий поросят с симптомокомплексом диареи
№ п/п Ассоциация микроорганизмов Количество изолированных ассоциаций микроорганизмов Частота выделения, %
1 Escherichia coli + Proteus vulgaris 11 28,9
2 Escherichia coli + Enterobacter aerogenes 9 23,7
3 Escherichia coli + Klebsiella pneumoniae 4 10,5
4 Proteus mirabilis + Enterococcus fecalis 4 10,5
5 Klebsiella pneumoniae + Citrobacter freundii 4 10,5
6 Escherichia coli + Enterococcus fecalis 3 7,9
7 Proteus mirabilis + Klebsiella pneumonia + Citrobacter freundii 2 5,3
8 Escherichia coli + Proteus vulgaris + Enterococcus fecalis 1 2,6
Vestnik of Omsk SAU, 2022, no. 2(46) VETERINARY AND ZOOTECHNY
В монокультуре преобладала Escherichia coli среди других видов микроорганизмов, частота ее выделения - 41,7%. Кроме кишечной палочки, основные этиологические факторы диареи у поросят - Proteus vulgaris (25%), Klebsiella pneumoniae (25%) и Citrobacter freundii (8,3%) (табл. 2).
Таблица 2
Микроорганизмы, выделенные из фекалий поросят с симптомокомплексом диареи, в монокультуре
№ п/п Микроорганизмы Количество изолированных микроорганизмов Частота выделения, %
1 Escherichia coli 5 41,7
2 Proteus vulgaris 3 25
3 Klebsiella pneumoniae 3 25
4 Citrobacter freundii 1 8,3
Анализируя полученные данные можно сделать вывод: в энтеробиоценозе желудочно-кишечного тракта поросят с симптомокомплексом диареи ведущая роль принадлежит кишечной палочке и протею как в монокультуре, так и в ассоциации с другими условно-патогенными микроорганизмами. В большинстве случаев от поросят выделяли ассоциации микроорганизмов, представленные двумя видами; три ассоциации включали по три вида микроорганизмов. Такие микроорганизмы, как Enterobacter aerogenes, Enterococcus fecalis и Proteus mirabilis, выделены у поросят реже остальных и только в виде ассоциаций с другими энтеробактериями (табл. 3).
Таблица 3
Энтеробиоценоз желудочно-кишечного тракта поросят с симптомокомплексом диареи
Вид микроорганизма Кол-во выделенных культур Частота выделения, % Всего мик роорганизмов
в монокультуре в ассоциации
кол-во % кол-во %
Escherichia coli 33 36,3 5 15,1 28 84,9
Proteus vulgaris 15 16,5 3 20,0 12 80,0
Klebsiella pneumoniae 13 14,3 3 23,0 10 67,0
Enterobacter aerogenes 9 9,9 - - 9 100,0
Enterococcus fecalis 8 8,8 - - 8 100,0
Citrobacter freundii 7 7,7 1 14,3 6 85,7
Proteus mirabilis 6 6,5 - - 6 100,0
Всего 91 - 12 - 79
Энтеропатогенные культуры кишечной палочки серотипированы и по своей антигенной структуре представлены серовариантами: О26 (15 культур), О8 (11 культур) и О33 (7 культур).
Для изучения патогенных свойств отобраны семь культур микроорганизмов: Escherichia coli, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes, Enterococcus fecalis, Citrobacter freundii и Proteus mirabilis.
При патолого-анатомическом вскрытии трупов мышей, зараженных культурой E. coli, обнаружены кровоизлияния в подкожной клетчатке и кишечнике, увеличение печени и селезенки, острое расширение сердца, абсцессы в месте введения суспензии и в паренхиматозных органах.
У погибших лабораторных мышей, зараженных Proteus vulgaris и Proteus mirabilis, отмечены кровоизлияния в подкожной клетчатке и кишечнике, наличие крови в брюшной полости, увеличение селезенки, единичные абсцессы в кишечнике и почках.
Vestnik of Omsk SAU, 2022, no. 2(46) VETERINARY AND ZOOTECHNY
При вскрытии трупов мышей, зараженных культурой Klebsiella pneumoniae, в печени, легких и кишечнике обнаружены единичные абсцессы. Также отмечены расширение сердца, увеличение селезенки и дистрофия печени.
У мышей, зараженных Enterobacter aerogenes, при вскрытии выявлены кровоизлияния в подкожной клетчатке и под эпикардом, абсцессы в стенке кишечника, печени, в легких и селезенке.
При патолого-анатомическом вскрытии трупов мышей, зараженных культурой Enterococcus fecalis, обнаружены серозный перитонит, дистрофия печени, увеличение селезенки и почек.
У лабораторных животных, зараженных Citrobacter freundii, регистрировали кровоизлияния в кишечнике в месте введения суспензии, в стенке кишечника и печени -абсцессы.
Все изолированные культуры Escherichia coli, Enterobacter aerogenes и Klebsiella pneumoniae при посеве на кровяной агар вызывали гемолиз эритроцитов. Proteus vulgaris и Citrobacter freundii, выделенные в монокультуре, также обладали гемолитической активностью.
Определяли чувствительность изолированных микроорганизмов к антибактериальным препаратам, принадлежащим восьми различным фармакологическим группам: цефалоспорины (цефазолин), фторхинолоны (энрофлоксацин), нитрофураны (фуразо-лидон), аминогликозиды (стрептомицин), тетрациклины (доксициклин), сульфаниламиды (сульфадимезин), макролиды (тилозин) и препараты пенициллинового ряда (амоксициллин).
В результате проведенных исследований установлено: большинство (98,9%) выделенных культур энтеробактерий чувствительны к энрофлоксацину и цефазолину. Высокую активность показали и препараты пенициллинового ряда (амоксициллин) и нитрофураны (фуразолидон), чувствительность изолированных культур микроорганизмов к ним составила 72,4% и 78,2% соответственно.
Все изоляты (100%) Proteus vulgaris и Proteus mirabilis проявили устойчивость к тилозину, большинство выделенных энтерококков (69,9%) резистентны к тетрациклину, а Citrobacter freundii - к стрептомицину (71%). Также выявлена высокая устойчивость (80%) у большинства представителей семейства Enterobacteriacea к сульфадимезину.
Заключение
По проведенным исследованииям установлена ведущая роль энтеробактерий в эн-теробиоценозе желудочно-кишечного тракта поросят с диарейным симптомокомплек-сом. Среди выделенных культур микроорганизмов преобладают Escherichia coli (О26, О8, О33) и Proteus vulgaris, как в монокультуре, так и в различных сочетаниях с другими условно-патогенными микроорганизмами. Кроме того, микробные ассоциации превалируют над монокультурами. Большинство изолированных микроорганизмов проявляли высокую чувствительность к антибактериальным препаратам из групп цефалоспо-ринов и фторхинолонов.
Список источников
1. Субботин В.В. Желудочно-кишечные болезни поросят с симптомокомплексом диареи: причины, профилактика и терапия // Ветеринария и кормление. 2005. № 3. С. 12-13.
References
1. Subbotin V.V. Gastrointestinal diseases of piglets with diarrhea symptoms: causes, prevention and therapy. Veterinarija i kormlenie = Veterinary medicine and feeding. 2005;(3):12-13. (In Russ.).
Vestnik of Omsk SAU, 2022, no. 2(46)
2. Савельева Л.Н., Куделко А.А., Бондарчук М.Л. К вопросу о желудочно-кишечных расстройствах у поросят и ущербе, наносимом свиноводству Забайкальского края // Международный научно-исследовательский журнал. 2016. № 11-2(53). С. 161-165.
3. Дансарунова О.С. Роль микрофлоры желудочно-кишечного тракта животных в возникновении эндогенных бактериальных инфекций и их коррекция : специальность 06.02.02 «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» : дис. на соискание ученой степени канд. вет. наук / Дансарунова Ольга Сергеевна ; Бурятская государственная сельскохозяйственная академия. Улан-Удэ. 2017. 175 с.
4. Плешакова В.И., Налепова М.Ю. Микрофлора желудочно-кишечного тракта свиней в норме и с клиническими признаками диареи // Свинина : материалы Всерос. науч.-практ. конф. и XIII Межвузовского координац. совета. Пос. Персиановский: Донской ГАУ. 2004. С. 137-140.
5. Денисов А.В., Степанов А.А. Этиологические особенности желудочно-кишечных болезней молодняка свиней в условиях промышленного комплекса // Инновации в АПК: проблемы и перспективы. 2016. № 1(9). С. 92-96.
6. Zholdasbekova A.Y., Biyashev K.V., Biya-shev B.K Prevalence of enteric infection pathogens in young cattle in Kazakhstan // Modern science. 2018. С. 20-21.
7. Сиплевич Т.Г., Плешакова В.И. Микрофлора желудочно-кишечного тракта поросят при применении кормовых добавок // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2017. № 2. С. 66-71.
8. Шабанова Е.О., Лоренгель Т.И. Новые подходы к лечению и профилактике диарейного симптомокомплекса поросят // Актуальные проблемы ветеринарной науки и практики : материалы нац. науч. -практ. онлайн-конф. факультета ветеринарной медицины ИВМиБ ФГБОУ ВО Омский ГАУ. Омск. 2020. С. 106-109.
9. Шабанова Е.О., Лоренгель Т.И., Плешакова В.И. Применение пробиотических препаратов «Фенерджик-про» и «Пиг протектор» для профилактики желудочно-кишечных болезней поросят // Пермский аграрный вестник. 2019. № 4(28). С. 146-152.
10. Щепеткина С.В. Решение проблемы ан-тибиотикорезистентности в условиях производства // Сельскохозяйственные вести. 2016. № 2. С. 55-57.
Для цитирования: Лоренгель Т.И., Шабанова Е.О. Энтеробиоценоз поросят с симптомо-комплексом диареи // Вестник Омского ГАУ. 2022. № 2 (46). С. 115-121. DOI 10.48136/22220364 2022 2 115.
VETERINARY AND ZOOTECHNY
2. Savel'eva L.N., Kudelko A.A., Bondar-chuk M.L. On the issue of gastrointestinal disorders in piglets and the damage caused to pig breeding in the Trans-Baikal Territory. Mezhdunarodnyj nauchno-issledovatel'skij zhurnal = International Research Journal. 2016;(11-2):161-165. (In Russ.).
3. Dansarunova O.S. The role of the microflora of the gastrointestinal tract of animals in the occurrence of endogenous bacterial infections and their correction : specialty 06.02.02 "Veterinary microbiology, virology, epizootology, mycology with mycotoxicolo-gy and immunology" : dissertation for the degree of Candidate of Veterinary Sciences.Burjatskaja gosu-darstvennaja sel'skohozjajstvennaja akademija. Ulan-Udje = Buryat State Agricultural Academy. Ulan-Ude. 2017.175. (In Russ.).
4. Pleshakova V.I., Nalepova M.Ju. The microflora of the gastrointestinal tract of pigs is normal and with clinical signs of diarrhea.Svinina : materialy Vse-ros. nauch.-prakt. konf. i XIII Mezhvuzovskogo koor-dinac. soveta. Pos. Persianovskij : Donskoj GAU. 2004.137-140. (In Russ.).
5. Denisov A.V., Stepanov A.A. Etiological features of gastrointestinal diseases of young pigs in an industrial complex. Innovacii v APK: problemy i pers-pektivy. 2016.(1(9)): 92-96.(In Russ.).
6. Zholdasbekova A.Y., Biyashev K.V., Biyashev B.K. Prevalence of enteric infection pathogens in young cattle in Kazakhstan. Modern science. 2018; 20-21.
7. Siplevich T.G., Pleshakova V.I. Microflora of the gastrointestinal tract of piglets when using feed additives.Veterinarija sel'skohozjajstvennyh zhivot-nyh. 2017;(2):66-71. (In Russ.).
8. Shabanova E.O., Lorengel T.I. New approaches to the treatment and prevention of diarrheal symptoms of piglets.Aktual'nye problemy veterinarnoj nauki i praktiki : materialy nacional'noj nauchno-prakticheskoj onlajn-konferencii fakul'teta veterinarnoj mediciny IVMiB FGBOU VO Omskij GAU. Omsk.2020; 106-109. (In Russ.).
9. Shabanova E.O., Lorengel' T.I., Pleshakova V.I. The use of probiotic drugs "Fenergik-pro" and "Pig protector" for the prevention of gastrointestinal diseases of piglets. Permskij agrarnyj vestnik = Perm Agrarian Journal. 2019;(4(28)):146-152. (In Russ.).
10. Shhepjotkina S.V. Solving the problem of antibiotic resistance in production conditions. Sel'skohozjajstvennye vesti. 2016;(2):55-57. (In Russ.).
For citation: Lorengel T.I., Shabanova E.O. En-trobiocenosis of piglets with diarrhea symptom complex. Vestnik of Omsk SAU. 2022;2(46):115-121, DOI 10.48136/2222-0364 2022 2 115.
Vestnik of Omsk SAU, 2022, no. 2(46)
Информация об авторах
Лоренгель Татьяна Иосифовна, канд. вет. наук, доц., [email protected];
Шабанова Екатерина Олеговна, аспирант, eo. [email protected].
Статья поступила в редакцию 28.03.2022.
VETERINARY AND ZOOTECHNY
Information about the authors
Lorengel Tatiana I., Cand. of Vet. Sci., Ass. Prof., [email protected];
Shabanova Ekaterina O., Postgraduate student, [email protected].
The article was submitted 28.03.2022.
