CC BY
220
© В. А. Михайлова,
О. М. Овчинникова, С. А. Сельков,
О. Н. Аржанова, Д. И. Соколов
ФГБУ «НИИАГ им. Д. О. Отта» СЗО РАМН
эндотелиальные клетки
и их микрочастицы в периферической крови при физиологической
беременности и при гестозе
УДК: 618.2+618.3-008.6]-07
■ Целью работы являлась оценка фенотипических характеристик свободно циркулирующих эндотелиальных клеток и микрочастиц эндотелиального происхождения в периферической крови при физиологической беременности
и при беременности, осложненной гестозом. У женщин при физиологической беременности и при гестозе в периферической крови присутствует одинаковое количество свободно циркулирующих эндотелиальных клеток и микрочастиц эндотелиального происхождения.
Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ ГК №02.740.11.0711 и грантов Президента РФ № НШ-3594.2010.7, МД-150.2011.7.
■ Ключевые слова: эндотелиальные клетки; микрочастицы; беременность; гестоз.
Введение
Присутствие свободных эндотелиальных клеток в периферической крови установлено более 30 лет назад в работах Bouvier C. A. Наличие в циркуляции свободных эндотелиальных клеток описано как у здоровых доноров, так и у пациентов с различными формами сердечнососудистых патологий, аутоиммунными и инфекционными заболеваниями. В настоящее время обсуждается диагностическое значение определения эндотелиальных клеток в периферической крови для ранней диагностики заболеваний сердечно-сосудистой системы и заболеваний, связанных с повреждением эндотелия (инфекционные, аутоиммунные заболевания) [7]. Также в периферической крови присутствуют предшественники эндотелиальных клеток. Наличие этих клеток в циркуляции представляет интерес с точки зрения возможности их применения в терапевтических целях, например, для лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы. Однако выделение и типирование предшественников эндотелиальных клеток и зрелых эндотелиальных клеток представляет определенную сложность. Выделение эндотелиальных клеток и их предшественников по функциональным характеристикам довольно спорно, так как подобными свойствами (способностью к репарации сосудистой стенки и формированию сосудо-подобных структур) обладают также моноцито-подобные CD14+ клетки и CD34+ клетки, выделенные из периферической крови [10]. Ранее для идентификации дескавмированных эндотелиальных клеток применяли метод фазово-контрастной микроскопии, при этом параллельно проводили иммуноцитохимическое исследование клеток на предмет экспрессии ими молекул адгезии CD31 (PECAM-1) [1]. По данным исследований, свободные эн-дотелиальные клетки периферической крови, находящиеся в покоящемся состоянии, обладают фенотипом CD45-CD31+ CD106- CD133-. Для активированных свободных эндотелиальных клеток характерен фенотип CD45- CD31+ CD106+ CD133- [11]. Иммуноцитохимические исследования позволили установить, что предшественники эндотелиальных клеток обладают фенотипом CD31+ CD34+ CD45-. В настоящее время наиболее часто используемые маркеры для определения предшественников эндотели-альных клеток — это сочетание CD34, CD133 и VEGFR2 (KDR) [10]. Клетки, экспрессирующие CD31, и не экспрес-сирующие CD34 и CD45 относят к зрелым эндотелиаль-ным клеткам [11].
При беременности в организме женщины происходят значительные изменения состояния сосудистого русла в области маточно-плацентарного ложа. В периферической крови
женщин с физиологическим течением беременности установлено присутствие предшественников эндотелиальных клеток [4], а также свободных эндотелиальных клеток [1]. У беременных с гестозом тяжелой степени в сочетании с сахарным диабетом I типа по сравнению со здоровыми беременными в периферической крови выявлено повышенное количество свободных эндотелиальных клеток [1]. Роль и фенотипи-ческие характеристики эндотелиальных клеток и их предшественников, присутствующих в циркуляции у беременных женщин, изучены недостаточно.
Необходимо отметить, что в периферической крови у здоровых людей установлено наличие микрочастиц (фрагментов клеток размером 0,05-1,0 мкм) эндотелиального происхождения, концентрация которых в кровотоке составляет в среднем 65000 частиц в 1 мл плазмы. При этом количество микрочастиц эндотелиальных клеток составляет около 10-15 % от всего количества микрочастиц, находящихся в циркуляции [6]. Установлено, что инкубация эндотелиаль-ных клеток в присутствии микрочастиц эндоте-лиального происхождения приводила к нарушению вазорелаксации, уменьшению продукции ими N0, а также повышению продукции эндо-телиальными клетками супероксид-аниона [6]. У женщин с физиологическим течением беременности в циркуляции повышено содержание микрочастиц эндотелиального происхождения по сравнению с небеременными женщинами. При развитии такой патологии как гестоз, циркулирующие микрочастицы повышают про-коагулянтный потенциал сыворотки крови. При этом общее количество циркулирующих микрочастиц при гестозе остается таким же, как и при физиологической беременности [4]. Таким образом, в настоящее время довольно подробно разбирается вопрос о содержании предшественников эндотелиальных клеток в периферической крови и их роли в развитии той или иной патологии. Значительно меньше внимания уделяется определению фенотипических и функциональных характеристик свободных эндотелиальных клеток и их микрочастиц при различных патологиях, связанных с повреждением эндотелия. Фенотипические характеристики свободных эн-дотелиальных клеток и микрочастиц эндотели-ального происхождения при беременности в настоящий момент изучены недостаточно. Целью настоящей работы была оценка фенотипиче-ских характеристик эндотелиальных клеток и микрочастиц эндотелиального происхождения при физиологической беременности и беременности, осложненной гестозом.
Материалы и методы
Анализ содержания эндотелиальных клеток в периферической крови был проведен у 73 женщин (21 небеременной женщины без признаков воспалительных процессов и иных признаков патологий на момент исследования, 23 беременных женщин с физиологическим течением беременности на сроке 38-39 недель, 29 беременных женщин с гестозом на сроке 38-39 недель). Анализ содержания микрочастиц эндотелиального происхождения был проведен у 65 женщин (21 небеременной женщины без признаков воспалительных процессов и иных признаков патологий на момент исследования, 20 беременных женщин с физиологическим течением беременности на сроке 38-39 недель, 24 беременных женщин с гестозом на сроке 38-39 недель). Возраст обследованных женщин находился в интервале от 17 до 48 лет и в среднем составил 29,8 ± 5,8 года. Критериями исключения являлись сахарный диабет I типа, многоводие, маловодие, урогениталь-ная инфекция, острая инфекция или обострение хронической инфекции, гипертоническая болезнь и заболевания системы кровообращения. Материалом для исследования являлась периферическая кровь пациенток. Для определения содержания свободных эндотелиальных клеток забор крови осуществлялся в пробирки с антикоагулянтом №2ЭДТА. Для определения содержания микрочастиц эндотелиального происхождения забор крови производили в пробирки с гепарином. Получено информированное согласие пациентов на обследование.
Для определения содержания свободных эндо-телиальных клеток периферическую кровь инкубировали в течение 15 минут с 0,83 % раствором NH4Cl для лизиса эритроцитов. Затем центрифугированием в течение 10 минут при 200g осаждали клетки периферической крови и производили окраску клеток антителами CD45, CD31 (BD, США), VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3 (RnD, США) в соответствии с указаниями производителя. Анализ флуоресценции проводили при помощи проточного цитофлюориметра FACS Canto II (BD, США). В координатах SSC — CD45 выделяли клетки CD45- и проецировали их на график с координатами CD31 — CD45 (рис. 1-в, 1-г). Затем в координатах CD31 — CD45 выделяли эндотелиальные клетки с фенотипом CD45-CD31+ и анализировали их на предмет экспрессии VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3.
Границы устанавливали на основании предшествующего измерения флюоресценции клеток, окрашенных изотипическими антителами (рис. 1-а, 1-б). Анализировали как относительное содержание эндотелиальных клеток, экс-
а) Двумерная гистограмма распределения клеток периферической крови в координатах SSC-PerCP; изотипический контроль
• •С'.ЪИЯК -v.-
Т г пгпг * I 1 п Г1гг|—г->чП-У|||—г г г тт||—г
лг7 дг ю5
С04Я*гСРА
в) Двумерная гистограмма распределения клеток периферической крови в координатах SSC-CD45 РегСР. Гейт Р1 содержит клетки с фенотипом CD45-
б) Двумерная гистограмма распределения клеток периферической крови в координатах FITC-PerCP; изотипический контроль.
«2
6
Ё
О
■ • • ■• ■•'. - : Г) Q2
04 1 Q3
г/
CD 45 PfiCP-A
if
г) Двумерная гистограмма распределения клеток периферической крови в координатах CD31 FITC — CD45 РегСР. Квадрант Q1 содержит свободные эндотелиальные клетки с фенотипом CD45-CD31+
Рис. 1. Графики последовательного гейтирования свободных эндотелиальных клеток в периферической крови
прессирующих исследуемые поверхностные молекулы, так и интенсивность их флюоресценции. Определение абсолютного количества свободных эндотелиальных клеток в периферической крови проводили в пробирках TruCount tubes (BD, США). Для оценки жизнеспособности часть эндотелиальных клеток, окрашенных CD31 и CD45, инкубировали в присутствии про-
пидия йодида в концентрации 1 мкг/мл в течение 10 минут при +4 °С и затем анализировали клетки на проточном цитофлюориметре.
Длявыявлениясодержаниямикрочастицэндоте-лиального происхождения в периферической крови использовали метод, описанный Gelderman М. Р. и 8так J. Периферическую кровь центрифугировали в течение 15 минут при 2600 g и +10 °С для из-
Рис. 2. Распределение микрочастиц клеток в координатах FSC-SSC. Гейт P1 содержит микрочастицы от 0,1 до 1,1 мкм
бавления от тромбоцитов. Затем полученную плазму, содержащую малое количество тромбоцитов, центрифугировали в течение 5 минут при 9900g и +10 °С. Полученную плазму, не содержащую тромбоцитов, центрифугировали при 19800g и +10 °С для осаждения микрочастиц. Затем микрочастицы ресуспендировали в растворе Хенкса без CaCl2 и повторно центрифугировали при 19800g и +10 °С. Полученные микрочастицы ресуспендировали в растворе Хенкса и 0,35 % бычьего сывороточного альбумина, после чего окрашивали микрочастицы антителами VEGFR1, VEGFR2 (RnD, США), CD34, CD31, CD41a (BD, США) в соответствии с указаниями производителя. Гейтирование микрочастиц производили в координантах прямого и бокового светорассеяния. Границы гейта, содержащего микрочастицы, устанавливали на основании предшествующего измерения калибровочных частиц заданного размера (0,1 мкм; 0,3 мкм; 1,1 мкм) (рис. 2). Затем оценивали экспрессию VEGFR1, VEGFR2, CD34, CD31, CD41a на микрочастицах. Границы устанавливали на основании предшествующего измерения флюоресценции микрочастиц, окрашенных изотипическими антителами. Анализировали относительное содержание микрочастиц эндотели-ального происхождения и интенсивность их флюоресценции. Определение абсолютного количества микрочастиц клеток в периферической крови проводили в пробирках TruCount tubes (BD, США). Статистический анализ проводили при помощи компьютерной программы AtteStat 12.1.7, используя непараметрический критерий Манна-Уитни.
Результаты
Установлено, что относительное количество свободных эндотелиальных клеток в периферической крови не различалось между обсле-
дованными группами женщин и составляло около 1 % от всех лейкоцитов. Абсолютное количество свободных эндотелиальных клеток в группе женщин с физиологической беременностью превышало количество этих клеток у здоровых небеременных женщин более чем 2 раза. Различий между группами женщин с физиологической беременностью и беременностью, осложненной гестозом, в абсолютном количестве эндотелиальных клеток в кровотоке не выявлено (табл. 1).
При оценке фенотипических характеристик свободных эндотелиальных клеток с фенотипом CD45-CD31+ установлено, что относительное количество клеток, парциально экспрессирую-щих VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3 и совместно экспрессирующих VEGFR1 и VEGFR2, VEGFR2 и VEGFR3 не различается между группами здоровых небеременных женщин и женщин с физиологической беременностью. Установлено, что абсолютное количество эндотелиальных клеток с фенотипом VEGFR1+ повышено у женщин с физиологической беременностью по сравнению со здоровыми небеременными женщинами (табл. 2). Различий между небеременными и здоровыми беременными женщинами в абсолютном количестве эндотелиальных клеток, экспрессирующих другие рецепторы к VEGF, не выявлено.
Отмечено, что у беременных с гестозом по сравнению с женщинами с физиологической беременностью снижено относительное количество эндотелиальных клеток, экспрессирующих VEGFR3 (табл. 2). Других различий по фенотипическим характеристикам свободных эндотелиальных клеток между беременными женщинами с гестозом и без этой патологии не установлено. Необходимо отметить, что у женщин во всех обследованных группах только 66-67 % клеток с фенотипом CD45- CD31+ экс-прессировали VEGFR1 (табл. 2), при этом интенсивность экспрессии рецепторов VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3 не различалась (табл. 3). Необходимо отметить, что при анализе содержания свободных эндотелиальных клеток в периферической крови проводилась оценка жизнеспособности этих клеток с помощью окраски пропидия йодидом. Установлено, что общее количество мертвых клеток в среднем составляло от 3,3 ± 0,3 % до 3,5 ± 0,3 % от всех проанализированных клеток периферической крови. При этом среди клеток с фенотипом CD45-CD31+ мертвых клеток не выявлено.
При анализе микрочастиц в периферической крови установлено, что у женщин с физиологическим течением беременности общее содер-
жание микрочастиц достоверно превышает их количество у здоровых небеременных женщин. Различий между группами беременных женщин с гестозом и без этой патологии выявлено не было (табл. 4). При анализе фенотипических характеристик микрочастиц периферической крови установлено, что у женщин при физиологической беременности по сравнению со здоровыми небеременными женщинами повышено абсолютное количество микрочастиц, экспрес-сирующих VEGFR1, VEGFR2, CD34 и CD31. При этом интенсивность экспрессии CD34 на микрочастицах была ниже у здоровых беременных женщин по сравнению с неберемен-
Содержание свободных эндотелиальных клеток в пер]
ными женщинами. Также в группе женщин с физиологической беременностью по сравнению с небеременными женщинами повышено абсолютное количество микрочастиц, на мембране которых одновременно присутствуют VEGFR1 и VEGFR2, CD31 и CD34, VEGFR1 и CD34, VEGFR2 и CD34 (табл. 5). В группе беременных женщин с гестозом по сравнению с группой женщин с физиологическим течением беременности установлена повышенная интенсивность экспрессии CD31 на микрочастицах периферической крови. Других различий между здоровыми беременными и беременными с гестозом выявлено не было (табл. 5).
Таблица 1
рической крови
Количество СБ45- СБ31+ клеток Количество свободных эндотелиальных клеток в периферической крови в группах:
Здоровые небеременные женщины (n=21) Женщины с физиологическим течением беременности (n=23) Женщины с гестозом (n=29)
Относительное количество, % 0,4 ± 0,05 0,8 ± 0,07 1,0 ± 0,1
Абсолютное количество, в 1 мл крови 7387±1014 16588 ± 2304* 19197 ± 2798
* — р < 0,01 (группа женщин с физиологическим течением беременности достоверно отличается от группы здоровых небеременных женщин)
Таблица 2
Экспрессия свободными эндотелиальными клетками рецепторов к VEGF
Свободные эндотелиальные Показатели экспрессии рецепторов к VEGF свободными эндотелиальными клетками в периферической крови в группах:
клетки с фенотипом CD45- CD31+ Здоровые небеременные женщины (n = 21) Женщины с физиологическим течением беременности (n = 23) Женщины с гестозом (n=29)
Относительное Абсолютное Относительное Абсолютное Относительное Абсолютное
количество, % количество, в 1 мл крови количество, % количество, в 1 мл крови количество, %о количество, в 1 мл крови
VEGF R1+ 66,4 ± 2,1 5505 ± 922 67,4 ± 2,0 11245±1660* 66,7 ± 1,8 12662 ± 1791
VEGF R2+ 4,0 ± 0,8 348 ± 67 2,5 ± 0,5 386±107 2,8 ± 0,5 559 ± 140
VEGFR3+ 15,5 ± 2,1 1545 ± 264 11,0 ± 1,2 1734 ± 415 7,7 ± 1,0® 1511±362
VEGFR1+VEGFR2+ 1,3 ± 0,3 160 ± 44 1,0 ± 0,3 184 ± 78 1,7 ± 0,4 238 ± 58
VEGFR2+VEGFR3+ 2,2 ± 0,5 202 ± 43 1,3 ± 0,2 186 ± 53 1,2 ± 0,2 223 ± 49
* — р < 0,01 (группа женщин с физиологическим течением беременности достоверно отличается от группы здоровых небеременных женщин); г — р < 0,05 (группа женщин с гестозом достоверно отличается от группы женщин с физиологическим течением беременности)
Таблица 3
Интенсивность экспрессии свободными эндотелиальными клетками рецепторов к VEGF
Свободные эндотелиальные клетки с фенотипом CD45- CD31+ Интенсивность экспрессии рецепторов к VEGF свободными эндотелиальными клетками в периферической крови в группах
Здоровые небеременные женщины (n=21) Женщины с физиологическим течением беременности (n=23) Женщины с гестозом (n=29)
VEGFR1+ 6003 ± 374 6677 ± 490 6496 ± 483
VEGFR2+ 1886±87 2343±211 1988 ± 88
VEGFR3+ 2308±90 2533 ± 142 2359±194
Таблица 4
Количество микрочастиц в 1 мл плазмы периферической крови
Показатель Здоровые небеременные женщины (n=21) Женщины с физиологическим течением беременности (n=20) Женщины с гестозом (n=24)
Абсолютное количество микрочастиц в 1 мл плазмы периферической крови в группах 1 410 293 ± 307 372 7 092 530 ± 1 488 468* 4 934 034 ± 1 105 835
* — р < 0,001 (группа женщин с физиологическим течением беременности достоверно отличается от группы здоровых небеременных женщин)
Таблица 5
Фенотипические характеристики микрочастиц клеток в периферической крови
Поверхностные маркеры Показатели экспрессии поверхностных маркеров на микрочастицах клеток в периферической крови в группах
Здоровые небеременные женщины (п = 21) Женщины с физиологическим течением беременности (п = 20) Женщины с гестозом (n = 24)
Абсолютное количество, в 1 мл Интенсивность флюоресценции, отн. ед. Абсолютное количество, в 1 мл Интенсивность флюоресценции, отн. ед. Абсолютное количество, в 1 мл Интенсивность флюоресценции, отн. ед.
VEGFR1 360363±87399 1098± 79 1539089±266286*** 903 ± 46 1091041±217786 1018± 72
VEGFR2 32153±9206 1367±110 95714±22781** 1154±111 97333 ± 27477 1116±81
CD34 73425±16987 1682±105 523424±153186*** 1316 ± 63** 953281±399743 1342±60
CD31 87867 ± 25347 602 ± 50 280930 ± 53363** 509 ± 40 189864±48396 622±45н
VEGFR1/VEGFR2 11608±3477 — 36699 ± 9071* — 39155±10095 —
CD31/ CD34 7118 ± 1729 — 18763±3411** — 12436±2542 —
VEGFR1/CD34 23525±5341 — 112789±28770** — 119023±31091 —
VEGFR2/CD34 2735 ± 661 — 8110±1779* — 5603±950 —
VEGFR1/VEGFR2/CD34 1062 ± 271 — 2310±702 — 1502 ± 264 —
VEGFR1/VEGFR2/CD31 1473±353 — 2839 ± 668 — 2436±514 —
*— р < 0,05, ** — р < 0,01, *** — р < 0,001 (группа женщин с физиологическим течением беременности достоверно отличается от группы здоровых небеременных женщин), г — р < 0,05 (группа женщин с гестозом достоверно отличается от группы женщин с физиологическим течением беременности)
Обсуждение
Появление предшественников эндотелиальных клеток в периферической крови связывают с процессами восстановления поврежденных участков сосудистого русла. Свободные эндотелиальные клетки, присутствующие в кровотоке, могут являться отражением подобных повреждений. Ранее установлено, что свободные эндотелиальные клетки присутствуют в периферической крови при физиологической беременности, и их количество увеличивается при гестозе, осложненном сахарным диабетом I типа [1]. Нами установлено, что при физиологическом течении беременности и при гестозе, не осложненном диабетом I типа, абсолютное количество эндотелиальных клеток одинаково. Таким образом, наши данные частично согласуются с данными других исследователей и подтверждают, что в периферической крови при беременности присутствует повышенное количество свободных эндотелиальных клеток. При физиологической беременности и беременности, осложненной ге-стозом, свободные эндотелиальные клетки могут появляться в периферической крови в результате гемодинамического воздействия на сосуды из-за активной перфузии маточно-плацентарного ложа.
Подобное воздействие на эндотелиальные клетки может приводить к запуску каскада внутриклеточных реакций, приводящих к продукции активных радикалов кислорода и развитию эндотелиальной дисфункции [8]. Высокая пролиферативная активность эндотелиальных клеток [2] и наличие предше -ственников эндотелиальных клеток в циркуляции при физиологической беременности [4], вероятно, способствуют восстановлению сосудистого русла и препятствуют развитию эндотелиальной дисфункции при физиологической беременности. Присутствие свободных эндотелиальных клеток в периферической крови при физиологической беременности также отражает процессы ангиогенеза, развивающиеся на всем протяжении беременности. При гестозе установлена сниженная проли-феративная активность эндотелиальных клеток [2]. Также при гестозе наблюдается уменьшение количества предшественников эндотелиальных клеток [5], что можно расценивать как нарушение механизмов восстановления эндотелия при гесто-зе. Таким образом, присутствие свободных эндоте-лиальных клеток в периферической крови при физиологической беременности и при гестозе может быть следствием одинаковых процессов. Однако
нарушение компенсаторных механизмов для поддержания функционального состояния эндотелия при гестозе может способствовать развитию эндо-телиальной дисфункции.
Одним из показателей состояния эндотелия сосудов может являться наличие микрочастиц эндотелиальных клеток в периферической крови. Однако определенную сложность представляет фенотипирование и определение происхождения микрочастиц. Так, например, предшественники эндотелиальных клеток наряду с их традиционными маркерами СD34 и CD133 экспрессируют CD31, VEGFR1 и VEGFR2. В то время как для активированных свободных эндотелиальных клеток характерен фенотип CD45- CD31+ CD106+ CD133- [11]. Поэтому источниками микрочастиц с фенотипом VEGFR1+ VEGFR2+, CD31+CD34+, VEGFR1+CD34+ и VEGFR2+CD34+ могут являться как эндотелиальные клетки, так и предшественники эндотелиальных клеток. Однако принимая во внимание, что количество предшественников эндо-телиальных клеток в периферической крови крайне мало (1 клетка на 10000 событий), можно предполагать, что микрочастицы VEGFR1+VEGFR2+, CD31+CD34+, VEGFR1+CD34+ и VEGFR2+CD34+ обладают эндотелиальным происхождением. Источником микрочастиц эндотелиального происхождения могут быть не только эндотелиальные клетки сосудов, но и свободные эндотелиальные клетки. Так, нами установлено, что у женщин во всех обследованных группах только 66-67 % свободных эндотелиальных клеток экспрессировали VEGFR1, при этом у женщин при беременности количество микрочастиц VEGFR1+ было повышено по сравнению с небеременными женщинами. Установленное нами повышенное количество микрочастиц эндотелиального происхождения у женщин с физиологической беременностью по сравнению с небеременными женщинами, вероятно, является следствием поддержания состояния сосудов матки и децидуальной ткани в третьем триместре беременности. У здоровых беременных по сравнению с небеременными женщинами мы установили повышенное содержание микрочастиц, положительных только по одному из представленных маркеров — VEGFR1+, VEGFR2+, CD34+, CD31+. Все перечисленные виды микрочастиц могут иметь эндотелиальное происхождение. Помимо эн-дотелиальных клеток экспрессия VEGFR1 и CD31 характерна для моноцитов. Экспрессия VEGFR1 и VEGFR2 характерна для цитотрофобласта [12]. Можно предполагать, что повышенное количество микрочастиц VEGFR1+, VEGFR2+, CD34+, CD31+ при физиологической беременности является следствием апоптоза моноцитов и клеток трофобласта, наблюдающегося в норме на всех сроках беремен-
ности. В настоящее время обсуждается сигнальная функция микрочастиц клеток. С этой точки зрения микрочастицы являются своего рода мембранными контейнерами, содержащими в составе своей мембраны и внутри себя различные сигнальные молекулы [9]. Тогда увеличение количества микрочастиц предположительно плацентарного происхождения в периферической крови при беременности может означать интенсификацию взаимодействий клеток, опосредованных наличием дополнительной сигнальной сети в организме. Наряду с микрочастицами VEGFR1+ ткань плаценты секретирует растворимый вариант рецептора VEGFR1, который является антиангиогенным фактором и регулирует нормальное развитие и стабилизацию сосудистого русла децидуальной ткани и ткани плаценты [3]. Микрочастицы, экспрессирующие VEGFR1+, также могут обладать антиангиогенными свойствами и способствовать стабилизации сосудистого русла децидуальной ткани и ткани плаценты по регуляторному принципу обратной связи. У женщин с гестозом по сравнению со здоровыми беременными в периферической крови содержится одинаковое количество микрочастиц эндотели-ального происхождения с фенотипом VEGFR1+, VEGFR2+, VEGFR1+VEGFR2+, VEGFR1+CD34+ и VEGFR2+CD34+. Перечисленные типы микрочастиц, вероятно, способны связывать VEGF и PlGF и снижать ангиогенные эффекты этих факторов. Так как при гестозе повышена секреция sVEGFR1 тканью плаценты [3], а содержание микрочастиц с фенотипом VEGFR1+ VEGFR2+, VEGFR1+CD34+ и VEGFR2+CD34+ остается на том же уровне, что и при физиологической беременности, возможно возникновение дефицита ангиогенных факторов в области маточно-плацентарного ложа. Развивающийся при этом воспалительный процесс в ткани плаценты и повышенная продукция анти-ангиогенных факторов может способствовать развитию системной эндотелиальной дисфункции и манифестации клинических проявлений гестоза.
Таким образом, при физиологической беременности и при гестозе в периферической крови присутствуют свободные эндотелиальные клетки, их появление, вероятно, является следствием повреждения сосудистого русла в результате активной перфузии маточно-плацентарного ложа. Ослабление механизмов восстановления эндотелия при гестозе может способствовать развитию эндо-телиальной дисфункции. Наличие в периферической крови микрочастиц эндотелиального происхождения при физиологической беременности и при гестозе отражает гемодинамические изменения фето-плацентарного комплекса в третьем триметре беременности. Представляется важным в дальнейшем оценить функциональные характеристики
микрочастиц, присутствующих в периферической крови, так как механизм образования микрочастиц может быть связан не только с гибелью клеток, но и быть физиологическим процессом осуществления межклеточной коммуникации.
Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ ГК №02.740.11.0711 и грантов Президента РФ № НШ-3594.2010.7, МД-150.2011.7
Литература
1. Диагностическая ценность определения десквамирован-ных эндотелиальных клеток в крови / Петрищев Н.Н. [и др.] // Клиническая лабораторная диагностика. — 2001. — №1. — С.50-52.
2. Нарушение пролиферативной активности эндотелиальных клеток при гестозе / Степанова О.И. [и др.] // Медицинский академический журнал. — 2010. — Т.10, №5. — С.219.
3. Сравнительная оценка концентрации sVEGF-R1 и sVE-cadherin в сыворотке крови беременных и их продукции тканью плаценты / Степанова О.И. [и др.] // Молекулярная медицина. — 2010. — №2. — С.43-47.
4. Circulating microparticles: a marker of procoagulant state in normal pregnancy and pregnancy complicated by preeclampsia or intrauterine growth restriction / Bretelle F. [et al.] // Thromb Haemost. — 2003. — Vol.89. — P.486-492.
5. Decrease and senescence of endothelial progenitor cells in patients with preeclampsia / Sugawara J. [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. — 2005. — Vol.90, N 9. — P.5329-5332.
6. Endothelium-derived microparticles impair endothelial function in vitro / Brodsky S. V. [et al.] // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. — 2004. — Vol. 286. — P. H1910—H1915.
7. Erdbruegger U., HaubitezM., WoywodtA. Circulating endothelial cells: a novel marker of endothelial damage // Clinica Chimica Acta. — 2006. — Vol. 373. — P. 17-26.
8. LuD., Kassab G. S. Role of shear stress and stretch in vascular mechanobiology // J. R. Soc. Interface. — 2011. — Vol.8. — P.1379-1385.
■ Адреса авторов для переписки-
Михайлова Валентина Анатольевна — научный сотрудник лаборатории иммунологии ФГБУ «НИИАГ им. Д. О. Отта» СЗО РАМН
Овчинникова Ольга Михайловна — студентка Санкт-Петербургского Государственного Университета
Сельков Сергей Алексеевич — д. м. н., профессор, заведующий лабораторией иммунологии ФГБУ «НИИАГ им. Д. О. Отта» СЗО РАМН
Аржанова Ольга Николаевна — д. м. н., профессор, заведующая дородовым отделением ФГБУ «НИИАГ им. Д. О. Отта» СЗО РАМН
Соколов Дмитрий Игоревич — д. б. н., ведущий научный сотрудник лаборатории иммунологии ФГБУ «НИИАГ им. Д. О. Отта» СЗО РАМН
199034, г. Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д.3. E-mail: [email protected]
9. Mause S., Weber C. Microparticles as transfer and signaling modules // Circulation research. — 2010. — Vol.107. — P.1047-1057.
10. Steinmetz M., Nickenig G., Werner N. Endothelial-Regenerating Cells. An Expanding Universe // Hypertension. — 2010. — Vol. 55. — P.593-599.
11. Stromal Vascular Progenitors in adult human adipose tissue / Zimmerlin L. [et al.] // J. Int. Society Advancement Cytometry. — 2010. — Vol. 77A. — P. 22-30.
12. Vascular endothelial growth factor ligands and receptors that regulate human cytotrophoblast survival are dysregulated in severe preeclampsia and hemolysis, elevated liver enzymes, and low platelets syndrome / Zhou Y. [et al.] // Am. J. Pathol. — 2002. — Vol.160, N 4. — P.1405-1423.
Статья представлена Э. К. Айламазяном, ФГБУ «НИИАГ им. Д. О. Отта» СЗО РАМН, Санкт-Петербург
ENDOTHELIAL CELLS AND ITS MICROPARTICLES IN PERIPHERAL BLOOD IN CASE OF HEALTHY PREGNANCY AND PREECLAMPSIA
Mikhaylova ,V. A., Ovchinnikova O. M., Selkov S. A., Arghanova O. N., Sokolov D. I.
■ Summary: The aim of the study was the assessment of phenotype of endothelial cells and its microparticles in circulation in case of healthy pregnancy and preeclampsia. The amount of circulating endothelial cells and microparticles is the same in case of healthy pregnancy and preeclampsia. This study was supported by grants HM-3594.2010.7, TK №02.740.11.0711, M£-150.2011.7.
■ Key words: endothelial cells; microparticles; pregnancy; preeclampsia.
Mikhaylova Valentina Anatolevna — researcher of laboratory of immunology of Scientific Institute of Obstetrics and Gynecology named after D. O. Ott
Ovchinnikova Olga Mikhaylovna — student of Saint-Petersburg State University
Selkov Sergey Alekseevich — PhD, MD, chief of laboratory of immunology of Scientific Institute of Obstetrics and Gynecology named after D. O. Ott
Arghanova Olga Nikolaevna — PhD, MD, chief of Obstetrics Department of Scientific Institute of Obstetrics and Gynecology named after D. O. Ott
Sokolov Dmitriy Igorevich — PhD, chief researcher of laboratory of immunology of Scientific Institute of Obstetrics and Gynecology named after D. O. Ott
199034 Russia, St. Petersburg, Mendeleyevskaya Line, 3. E-mail: [email protected]
