CC BY
4
отбором проб в эвакуированные сосуды наливают 5—10 мл ледяной уксусной кислоты, которой смачивают стенки сосуда. Отобранную в бу тыль или газовую пипетку пробу несколько раз встряхивают в течение 10—15 минут, омывая равномерно стенки ледяной уксусной кислотой.
Из отобранной пробы берут для анализа 2 мл в колориметрическую ^пробирку с притертой пробкой (диаметр пробирок 10 мм, высота
100 мм). Затем приготовляют стандартную шкалу, для
Г чего заранее готовят раствор исследуемого масла1
(турбинного, веретенного, машинного) в ледяной уксусной кислоте, 1 мл которого содержит 2 мг масла. Из этого раствора разбавлением в 10 раз готовят рабочий раствор, содержащий 0,2 мг масла в 1 мл. Рабочий раствор разливают в ряд колориметрических пробирок с притертой пробкой: в первую пробирку— 0,25 мл, во вторую — 0,5 мл, в третью — 1 мл, в четвертую—1,5 мл, в пятую—2 мл, в нулевую пробирку приливают 2 мл ледяной уксусной кислоты.
Объем жидкости во всех пробирках шкалы доводят ледяной уксусной кислотой до 2 мл. Затем приливают в каждую пробирку шкалы и пробы по 2 мл дистиллированной воды и интенсивно встряхивают. Получается стандартная шкала с содержанием от 0,05 до 0,4 мг масла.
Через 5 минут сравнивают интенсивность мутности в пробах со стандартной шкалой. Приготовленная таким способом шкала устойчива в течение 2—3 суток. Нефелометрирование можно вести визуально и на фотоколориметре.
При совместном присутствии в воздухе бензина, керосина и уайтспирта метод н"е специфичен, так как эти нефтепродукты в водных растворах уксусной кислоты тоже образуют устойчивые эмульсии. Проверка предлагаемого метода на производстве дала удовлетворительные результаты.
ЛИТЕРАТУРА
Алексеева М. В. и др. Определение вредных веществ в воздухе производственных помещений. М., 1954, стр. 241. — Быховская М. С., Гинзбург С. Л., Хализова О. Д. Практическое руководство по промышленно-санитарной химии. М„ 1954, стр. 127. — Ворохобин И. Г., Екимова Н. И. В кн.: Динамические и микрохимические методы анализа воздуха промышленных предприятий. Л., 1937, т. 12. кн. 2, стр. 108. — Запольский В. В., Ворохобин И. Г. Там же. Л., 1934, т. 7. в. 8, стр. 110. — Туров И. Ф. В кн.: Новости медицины. М., 1952, стр. 19.
Поглотитель с двумя пористыми пластинками для поглощения аэрозоля смазочных масел из воздуха.
Поступила 25/11 1959 I
т!г. -л- тйг
ЭКСПРЕССНЫЙ МЕТОД ИДЕНТИФИКАЦИИ ГРУППЫ КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ, ВЫДЕЛЕННОЙ ИЗ ВОДЫ
Е. И. Карасюк
Из санитарно-эпидемиологического отдела Денгизской районной объединенной больницы Гурьевской области
Предлагаемый экспрессный метод позволяет произвести идентификацию всех подгрупп кишечной палочки по ГОСТ в короткий срок. Первый этап санитарно-бактериологического анализа воды прово-
1 Масло берут с обследуемого производства.
дился методом «отпечатков» мембранных ультрафильтров на розоловой среде, содержащей 3—5% лактозы.
«Отпечатки» производились так. По окончании фильтрации фильтр матовой поверхностью накладывали на розоловый агар рядом с краем чашки, избегая попадания пузырьков воздуха между ними и средой, на 10—15 минут, затем приподнимали и накладывали на 10—15 секунд на следующие места равномерно по ©сей чашке. При перенесении на следующее место 'необходимо захватить^фильтр ва край пинцетом с гладкими браншами и сразу не снимать, а осторожно приподнимать, пока он не оторвется от среды почти полностью, затем опустить его на этом месте 2—3 раза. Этим обеспечивается «отпечатывание». Закончив «отпечатывание», фильтр нужно перевернуть и «зеркальной» 'поверхностью наложить на среду в то место, где «отпечатка» нет.
После «отпечатывания» среду разбивают i«a 8 секторов при помощи стерильного металлического шаблона — крестовины (изготовленного из бритвенных лезвий) глубиной не более 0,1 мм.
Через 12—15 часов инкубации на агар в чашках с колониями всех посеянных разведений накладывали диски стерильной фильтровальной бумаги, соответствующие диаметру чашки размеченной и пронумерованной до стерилизации также на 8 секторов черным карандашом с двух сторон. Дно чашек также нумеруется.
Диски фильтровальной бумаги перед накладыванием на колонии смачивали в стерильной чашке стерильным щелочным раствором метилового красного в следующей прописи: метилового красного 0,01, углекислой соды (NaaCCh) 0,1, дистиллированной свежепрокипячен-ной воды 50 мл. Раствор ярко-желтого цвета. pH такого индикатора будет 6,3. В связи с этим колонии В. aerogenes и щелочеобразующие штаммы В. paracoli перекрашивать желтую индикаторную 'бумагу в розово-красный цвет не будут (отрицательная реакция с метиловым красным). В. coli commune, В. coli citrovorum и кислотообразующие штаммы paracoli А перекрашивают индикаторную бумагу в розозо-красный или розовый цвет через 5—10 секунд. Приготовление спиртового (красного) раствора индикатора излишне, так как при наклады вании пропитанной им фильтровальной бумаги на розоловую среду он перекрашивается в желтый цвет.
Более демонстративная картина получается со щелочным индика тором. Обычно верхние части всех выросших колоний на розоловом агаре при накладывании индикаторной фильтровальной бумаги впитываются ею, а на агаре остаются нижние части колоний.
Стерильным пинцетом осторожно захватывают и снимают индика торную бумагу, перевертывают ее и кладут на дно пустой чашки, затем прокаленным на спиртовке и остуженным черным карандашом очерчивают все колонии В. aerogenes кружочком и В. paracoli квадратиком, давших отрицательную реакцию с метиловым красным.
Из оставшихся на среде нижних частей колоний, давших отрицательную и положительную реакцию с метиловым красным, производили параллельно посев на среду Кларка, делая пометки (нумерацию) по секторам на среде, индикаторной бумаге и на пробирках, затем выращивали в термостате в течение 4 суток. По истечении 4 суток ставили реакцию с индикатором метиловым красным, приготовленным по обычной прописи, и щелочным, приготовленным по нашей прописи. Оказалось, что штаммы В. coli commune, В. coli citrovorum, В. paracoli, дающие положительную реакцию с метиловым красным, способны перекрасить щелочной раствор индикатора в красный, а штаммы В. aerogenes и щелочеобразующие В. paracoli перекрашивания не вызывали
Из этого видно, что можно применять для этой реакции не только кислый спиртовой раствор индикатора, но и щелочной раствор по нашей прописи.
При параллельном исследовании 1520 колоний на розоловой среде при помощи щелочной индикаторной бумаги (предлагаемый метод) и на среде Кларка нами были получены идентичные результаты; во всех случаях они совпали.
Из этого следует, что бактерии группы кишечной палочки разлагают глюкозу, лактозу и 'предопределяют конечную кислую или щелочную реакцию с метиловым красным на розоловой среде так же, как и на среде Кларка.
Кроме того, из колоний В. paracoli, оставшихся на розоловой среде, делали посев в лакмоидное молоко для идентификации по схеме проф. И. Е. Минкевича, и выращивание продолжали в течение 24 часов.
Исследование 162 колоний показало, что кислото- и щелочеобразо-вание на розоловой среде (положительная или отрицательная реакция на индикаторной бумаге с метиловым красным по нашей прописи) совпадало с к и ело то- или щелочеобразованием на лакмусовом молоке.
Это, по-видимому, получается потому, что лакмоид имеет интервал pH перехода цвета красный <--> синий в 'пределах 4,4—6,4, а, метиловый красный имеет интервал pH перехода цвета красный *--> желтый в пределах 4,2—6,3. Разница между Переходом цветов лишь в пределах pH 0,2—0,1, что существенно не отражается на определении реакции газовой смеси, образуемой микробами в молоке и розоловой среде, так как она начинается с pH 5 и выше.
Из этого видно, что применением индикаторной бумаги с метиловым красным (щелочной раствор) на розоловой среде штаммы paracoli А и В диагностируются так же, как и на лакмусовом молоке, но за 10—15 секунд (вместо суток).
Для дифференциации В. coli commune от В. coli citrovorum применяли также цитратный тест на чашках с 1 % водорастворимым индикатором бромтимоловым синим. Для этой цели на застывшую цитрат-ную среду наносили «отпечатки» 8 секторов стерильной крестовиной-шаблоном так же, как и на розоловую среду, затем вновь перевертывали и накладывали индикаторную фильтровальную бумагу колониями вниз на среду, соответственно каждому пронумерованному сектору на среде и бумаге.
В связи с тем, что посев на среду производился массивный (целые колонии), через 10—18 часов выращивания в термостате при 37° цитрат-ассимилирующие разновидности бактерий перекрашивали среду в яркий синий цвет (щелочение). При обычном посеве в пробирки перекрашивание среды наступает через сутки.
В. coli commune и цитратотрицательные В. paracoli на индикаторной бумаге или среде остаются в виде желтых и зеленоватых колоний.
Для оценки результатов индикаторную бумагу необходимо снять с цитратной среды, перевернуть, положить на дно чашки и посушить на воздухе 5—10 минут или в термостате, после этого сосчитать, в каких секторах и какими колониями перекрашена среда и учесть все титры подгрупп кишечной палочки по ГОСТ во всех разведениях.
Для определения бродильной способности каждой подгруппы кишечной палочки производили посев в глюкозо-пептонную среду (по ГОСТ) с поплавками из оставшихся на розоловой среде колоний и одновременно иглой в толщу неизмененного розолавого arapa в этой чашке недалеко от колоний. Затем входное отверстие в среде закрывалось расплавленной средой при помощи накаленной иглы.
Чашки и посев на ГПС помещали в термостат при температуре 42—43°, затем чашки просматривали через 20, 30 минут и каждый час. Оказалось, что газообразование на розоловой среде наступало у части колоний уже через 20 минут и позже, а у части — через 3 часа максимально.
На глкжозо-яептонной среде газообразование наступало из тех же колоний через 24 часа.
Результаты исследований обоими методами во всех случаях совпадали. Газообразование наблюдалось у 72% испытанных колоний.
Вывод
Предлагаемый экспрессный метод дает возможность идентифицировать все выросшие колонии на чашках во всех разведениях, определить все бактериальные титры, что является важным при изучении динамики загрязнения и самоочищения открытых водоемов, давности загрязнения артезианских скважин и эффективности хлорирования воды.
ЛИТЕРАТУРА
Андреева Г. В. Лаб. дело, 1959, № 2, стр. 40. — Карасю к Е. И. Гиг. и сан., 1958, № 9, стр. 84. — Минкевнч И. Е. Бактерии группы кишечной палочки как санитарно-показательные микроорганизмы. М., 1949.
Поступала 5/\ 195« г.
Тk Я Я
5 Гигиена и санитария, № 1
