CC BY
48
каждом образце при проведении электрофореза в дальнейшем мембраны реинкубировались с антителами к GAPDH (глицеральдегидфосфат-дегидрогеназа) (1:10000, Trevigen Inc.).
Результаты. Было определено достоверное снижение экспрессии ПБР при всех исследуемых типах злокачественных новообразований по сравнению с нормальной кожей, регистрируемое как снижение числа ПБР+ клеток при базально-клеточной карциноме и меланоме кожи и как снижение интенсивности окраски ПБР+ клеток при плоскоклеточном раке кожи. В эксперименте на культурах клеток в малиг-низированных кератиноцитах и меланоцитах при иммуноцитохимическом исследовании определялось достоверное снижение числа ПБР+ клеток по сравнению с нормальными кератиноцитами и меланоцитами.
При иммуноблоттинге было определено преобладание полимерных форм рецептора в клетках плоскоклеточного рака кожи по сравнению с нормальными кератиноцитами. Воздействие ультрафиолетовым излучением вызывало разнонаправленный эффект в нормальных и малиг-низированных кератиноцитах: облучение в дозе 480Дж/м2 индуцировало снижение экспрессии ПБР в нормальных кератиноцитах и увеличение экспрессии рецептора в клетках плоскоклеточ-
ного рака кожи. В клетках меланомы кожи ПБР с помощью иммуноблоттинга выявлялся в виде мономера и полимеров с молекулярным весом 36 кДа, 54 кДа и 90 кДа. При ультрафиолетовом облучении в дозе 120Дж/м1 происходило исчезновение мономера ПБР, но появлялись полимеры рецептора с молекулярным весом 54 кДа и 90 кДа. Помимо этого, происходило увеличение уровня димера ПБР. Ультрафиолетовое облучение в дозе 240Дж/м1 также вызывало исчезновение мономера ПБР и увеличение уровня димера ПБР. Повышение дозы ультрафиолетового облучения до 480Дж/м1 вело к появлению мономера ПБР, снижению уровня димера и исчезновению полимеров рецептора с молекулярным весом 54 кДа и 90 кДа. Изменение соотношения мономер: полимеры ПБР напрямую коррелировало с интенсивностью клеточной пролиферации в клетках меланомы, определяемое по уровню включения бромодезоксиуридина, а также по уровню экспрессии PCNA.
Выводы. Проведенное исследование позволяет резюмировать, что при злокачественных новообразованиях кожи происходит изменение уровня экспрессии ПБР в коже. Ультрафиолетовое излучение вызывает ПБР-опосредованное изменение уровня клеточной пролиферации в клетках кожи.
ЭКСПРЕССИЯ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗ И ИХ ЭНДОГЕННЫХ ИНГИБИТОРОВ ПРИ РАКЕ ГОРТАНИ
О.В. Савенкова, Е.В. Клишо
ГУ «НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН», г. Томск
Актуальность. Исследование экспрессии металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов при плоскоклеточном раке в эпителиальных структурах гортани, имеющих разное гистологическое строение, а также в стромальных элементах опухоли имеет важное значение при прогнозировании течения заболевания.
Цель исследования. Определить экспрессию металлопротеиназ 1, 2, 9 и ингибиторов металлопротеиназ 1, 2 в различных опухолевых структурах и стромальных элементах при раке гортани.
Материал и методы. Проводилось иммуно-гистохимическое исследование операционного материала от 32 пациентов с раком гортани в возрасте от 43 до 75 лет (средний возраст - 60,2 года). Все пациенты получали предоперационную химиолучевую терапию. Исследовались: металлопротеиназа 9 (ММП9), металлопроте-иназа 1 (ММП1), тканевой ингибитор метал-лопротеиназы 1 (ТИМП1), металлопротеиназа 2 (ММП2), тканевой ингибитор металлопро-теиназы 2 (ТИМП2). Экспрессия маркеров в опухоли изучалась в шести типах опухолевых
структур. 1-й тип - структуры с ороговением в центре (формирующие «жемчужины»), 2-й -состоящий из клеток шиповатого типа, 3-й - состоящий из базальных клеток - базалоидный тип, 4-й тип - низкодифференцированные структуры, 5-й тип - поверхностный многослойный плоский эпителий, 6-й - комплексы клеток. Для иммуногистохимического исследования использовались антитела фирмы «Новокастра» ММП9, ММП1, ТИМП1, ММП2, ТИМП2. Инкубацию с первыми антителами проводили 60 мин при температуре 25 С°. Использовали систему визуализации фирмы «Dako» LSAB2 System - HRP. в качестве хромогена - ДАБ, препараты докрашивали гематоксилином. Экспрессия маркеров определялась как слабая, средняя (умеренная) и выраженная. Результаты обработаны с помощью t-критерия Стьюдента.
Результаты. При исследовании тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 в эпителиальных клетках опухоли отмечалась средняя и выраженная экспрессия маркера. Причем в клетках базального слоя опухолевых структур 1, 2 и 3-го типов отмечалась неоднородная реакция - в части клеток была низкая экспрессия или присутствовали клетки с негативной реакцией. В большинстве остальных опухолевых клеток экспрессия была выраженной. Как правило, такая же экспрессия определялась в клетках, формирующих «жемчужины», в структурах 1-го типа. Экспрессия ТИМП1 в клетках стромы (фиброциты, лейкоциты и т.д.) была также достаточно выраженной (отмечалась средняя и выраженная экспрессия). При сравнении экспрессии ТИМП1 в различных типах опухолевых структур достоверная разница отмечалась между 1-м и 2-м типом структур (р= 0,009).
В ткани опухоли ММП9 экспрессировалась гетерогенно, от отрицательной реакции до выраженной (в 2 случаях). Отмечались случаи, когда маркер определялся только в некоторых клетках опухолевых структур. Причем эти клетки со слабой или умеренной экспрессией могли располагаться беспорядочно по всей структуре. Клетки стромы, как инфильтрирующие ее лейкоциты,
так и фибробласты, в основном давали среднюю и выраженную реакцию, но присутствовал пул отрицательных лейкоцитов. При сравнении различных типов структур между собой значимые различия получены между 2-м типом структур и комплексами клеток (р=0,004). Вероятно, экспрессия ММП9 в 4-м типе опухолевых структур связана с метастазированием в регионарные лимфоузлы (р=0,06).
В 24 случаях наблюдалась негативная реакция на ММП2 в ткани опухоли, слабая экспрессия отмечалась только у 8 пациентов. Следует отметить, что в небольших комплексах клеток, отдельно лежащих в строме (6-й тип опухолевых структур), экспрессия маркера (в 5 из 8 случаев) была умеренная и слабая, в то время как остальная опухолевая ткань оказалась полностью негативна. Основная масса клеток стромы (лейкоциты, фибробласты и тд.) экспрессировали маркер умеренно и слабо. Подобная экспрессия прослеживалась и при исследовании ТИМП2. Только в 7 случаях отмечалась слабая реакция в опухолевой ткани, остальные случаи были негативны. Экспрессия ТИМП2 клетками стромы была подобна экспрессии ММП2. При сравнении экспрессии ТИМП2 в различных типах структур достоверные различия определены между 2-м типом структур и комплексами клеток (р=0,019), а также наблюдается тенденция к различию между 1-м типом опухолевых структур и комплексами клеток (р=0,0509). Зависимость между экспрессией металлопротеиназ и их эндогенных ингибиторов и стадией заболевания Т не выявлена, но наблюдается некоторая тенденция: при увеличении стадии отмечается высокая экспрессия ТИМП1 в клетках первого типа опухолевых структур (р=0,07).
Выводы. Экспрессия исследуемых металло-протеиназ 1, 2, 9 и их эндогенных ингибиторов 1, 2 в опухолевых структурах находится в зависимости от вида эпителиальных клеток, входящих в состав опухолевых структур, что требует дальнейшего изучения прогностической значимости этого феномена.
