CC BY
36
references
1. Krustic P.J., Wasserman E., Keizer P.N. et al. Radical reactions of C60. Science. 1991; 254: 1183-5.
2. Magoulas G.E., Garnelis T., Athanassopoulos C.M et al. Synthesis and antioxidative/anti-inflammatory activity of novel fullerene-polyamine conjugates. Tetrahedron. 2012; 68 (35): 7041-9.
3. Yudoh K., Karasawa R., Masuko K., Kato T. Water-soluble fullerene (C60) inhibits the development of arthritis in the rat model of arthritis. Int. J. Nanomed. 2009; 4: 217-25.
4. Bashkatova E.N., Andreev S.M., Shershakova N.N., Babakhin A.A., Shilovskiy I.P., Khaitov M.R. Study of modulating activity of C60 fullerene derivatives on hypersensitivity reaction. Fiziologiya i patologiya im-munnoy sistemy. 2012; (2): 17-7. (in Russian)
5. Baati T., Bourasset F., Gharbi N., Njim L., Abderrabba M., Kerkeni A. et al. The prolongation of the lifespan of rats by repeated oral administration of [60] fullerene. Biomaterials. 2012; 33: 4936-46.
6. Johnston H.J., Hutchison G.R., Frans M., Christensen F.M., Aschberger K., Stone V. The biological mechanisms and physicochemical characteristics responsible for driving fullerene toxicity. Toxicol. Sci. 2010; 114: 162-82.
7. Deguchi Sh., Mukai S.-A. Top-down preparation of dispersions of C60 nanoparticles in organic solvents. Chem. Lett. 2006; 35 (4): 396-7.
8. Andrievsky G.V., Kosevich M.V., Vovk O.M., Shelkovsky V.S., Vashcen-
ORIGINAL ARTICLE
ko L.A. On the production of an aqueous colloidal solution of fullerenes. J. Chem. Soc. 1995; (12): 1281-2.
9. Andreev S., Purgina D., Bashkatova E., Garshev A., Maerle A., Andreev I. et al. Study of fullerene aqueous dispersion prepared by novel dialysis method. Simple way to fullerene aqueous solution. Fullerenes, Nano-tubes Carbon Nanostruct. 2015; 23 (9): 792-800.
10. Shershakova N., Baraboshkina E., Andreev S., Purgina D., Struchkova I., Kamyshnikov O. et al. Anti-inflammatory effect of fullerene C60 in a mice model of atopic dermatitis. J. Nanobiotechnol. 2016; (14): 8. doi: 10.1186/s12951-016-0159-z.
11. Andreev S.M., Purgina D.D., Bashkatova E.N., Garshev A.V., Maerle A.V., Khaitov M.R. An effective way to obtain water nanodispersions C60. Rossiyskiye nanotekhnologii. 2014; (7-8): 11-7. (in Russian)
12. Dobrovolskaya M.A., Clogston J.D., Neun Barry W., Hall J.B., Patri A.K., McNeil S.E. Method for analysis of nanoparticle hemolytic properties in vitro. Nano Lett. 2008; (8): 2180-7.
13. Bosi S., Feruglio L., Da Ros T., Spalluto G., Gregoretti B., Terdoslavich M. et al. Hemolytic effects of water-soluble fullerene derivatives. J. Med. Chem. 2004; 47: 6711-5.
14. Shpakova N.M., Nipot O.S., Ishchenko I.O., Prilutska S.V., Bohutska K.I., Cherepanov V.V. et al. Effect of C60 fullerene on viscoelastic properties of human erythrocytes membrane. Fiziol. Zh. 2014; 60 (5): 82-8.
Поступила 03.02.16 Принята в печать 18.02.16
КЛИНИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016 УДК 615.371.015.46-053.2
Топтыгина А.П.1, Семикина Е.Л.2, Алешкин В.А.1
ЭКСПРЕССИЯ МАРКЕРОВ АКТИВАЦИИ НА ЛИМФОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ДЕТЕЙ, ПРИВИТЫХ И РЕВАКЦИНИРОВАННЫХ «ПРИОРИКСОМ»
1Лаборатория цитокинов ФБУН «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора, 125212, Москва; Централизованная клинико-диагностическая лаборатория, ФГБУ «Научный центр здоровья детей» Минздрава России, Москва
У 25 детей в возрасте от 1 года до 2 лет, привитых вакциной против вирусов кори, краснухи и эпидемического паротита «Приорикс» (группа 1), и 24 детей в возрасте от 6 до 7 лет, ревакцинированных той же вакциной (группа 2), методом проточной цитофлюорометрии оценивали экспрессию активационных маркеров на лимфоцитах периферической крови до введения вакцины и через 1 и 6 нед после. Через 7 дней после вакцинации в группе 1 отмечали значимое увеличение количества активированных хелперов (CD3+CD4+CD25+CD127hi) и лимфоцитов с фенотипом поздней активации CD3+HLA-DR+. При этом экспрессия CD38 и CD122 значимо повышалась на субпопуляции CD3+CD4+ и снижалась на цитотоксических лимфоцитах CD3+CD8+. Через 6 нед показатели возвращались к исходному уровню. В группе 2 также через неделю после прививки отмечали значимое повышение CD3+CD4+CD25+CD127hi и снижение экспрессии CD122 на CD3+CD4+, возвращающиеся к исходному уровню через 6 нед. Активация клеток врожденного иммунитета (NK-клеток) обнаруживалась через 1 нед после вакцинации независимо от типа иммунного ответа (первичный или вторичный). Полученные данные могут быть полезны для мониторинга иммунного ответа на вакцину у иммунокомпрометированных пациентов.
К л ю ч е в ы е с л о в а: вакцинация; маркеры активации; корь; краснуха; паротит.
Для цитирования: Топтыгина А.П., Семикина Е.Л., Алешкин В.А. Экспрессия маркеров активации на лимфоцитах периферической крови детей, привитых и ревакцинированных «Приориксом». Иммунология. 2016; 37 (4): 215-218. DOI: 10.18821/0206-4952-2016-37-4-215-218
Toptygina A.P.1, Semikina E.L.2, Aleshkin V.A.1
MARKERS OF ACTIVATION EXPRESSION ON THE BLOOD LYMPHOCYTES IN CHILDREN VACCINATED WITH PRIORIX
'G.N. Gabrichevsky Research Institute for Epidemiology and Microbiology, 125212, Moscow, Russia; 2Scientific Center of Children's Health, Moscow, Russia
Для корреспонденции: Топтыгина Анна Павловна, д-р мед. наук, E-mail: [email protected]
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
The expression of the activation surface markers (CD25, CD38, CD122, HLA-DR) was evaluated on the blood lymphocytes by flow cytometry in 25 children aged 1-2 years old, vaccinated with Priorix (group 1), and 24 children aged 6-7 years old, revaccinated with Priorix (group 2). The testing made before vaccine application, in a week and in 6 weeks after vaccination. In group 1 the significant elevation of the activated helpers (CD3+CD4+CD25+CD127hi) and late marker of activated T-lymphocytes (CD3+HLA-DR+) levels were founded in a week after vaccination. Expression of CD38 and CD122 markers was significant increased on the CD3+CD4+ lymphocytes and decreased on the cytotoxic CD3+CD8+lymphocytes 1 week after vaccination. These characteristics were recovered to the normal ranges within a 6 weeks after the vaccine inoculation. In group 2 the significant elevation of the CD3+CD4+CD25+CD127hilymphocytes and the reducing of CD122 expression on the CD3+CD4+ lymphocytes were detected in a 1 week after vaccination. NK-cells activations was observed in a week after vaccination independently of the type (primary or secondary) of immune response. It is possible that such investigations can be informative for immune response on the vaccination monitoring in immunocompromised patients.
Keywords: vaccination; activation markers; measles; rubella, mumps.
For citation: Toptygina A.P., Semikina E.L., Aleshkin V.A. Markers of activation expression on the blood lymphocytes in children vaccinated with Priorix. Immunologiya. 2016; 37 (4): 215-218. DOI: 10.18821/0206-4952-2016-37-4-215-218
For correspondence: Toptygina Anna Pavlovna, dr. med. ski., E-mail: [email protected]
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Funding. The study had no sponsorship.
Received 15.01.16 Accepted 18.02.16
Введение
Активационные маркеры обычно отсутствуют на поверхности покоящихся наивных клеток, экспрессируются через некоторое время на поверхности активированных лимфоцитов и, выполнив свою функцию, вновь исчезают. В большинстве работ исследование активационных маркеров проводят на моделях мышей [1], что позволяет исследовать динамику экспрессии различных молекул. Однако нет прямого параллелизма между мышами и человеком, особенно в продолжительности временных интервалов. У человека чаще используют стимуляцию лимфоцитов in vitro [2, 3] или лимфоциты больных людей [4]. Однако культивирование лимфоцитов in vitro не вполне физиологично, а стимуляция митогенами имеет свои особенности, поэтому нельзя исключить неспецифическую активацию каких-то молекул на поверхности лимфоцитов. Работа с лимфоцитами больных людей также имеет свои ограничения: люди гетерогенны по HLA-комплексу и другим генам иммунного ответа, а от этого зависит презентация антигена и последующая активация. Невозможно точно определить, когда именно началось заболевание, поскольку существует период его субклинического протекания (инкубационный период, продром и т. п.). Кроме того, каждый исследователь в зависимости от задач и интересов формирует панель изучаемых маркеров по своему вкусу. Возможно, стандартизация наборов исследуемых антигенов и использование многоцветных проточных цитометров сможет способствовать получению информации об активации различных, в том числе минорных субпопуляций лимфоцитов и других клеток иммунной системы [5]. Отчасти проблема осложняется еще тем, что активация лимфоцитов - очень динамичный процесс, экспрессия некоторых маркеров краткосрочна и измеряется часами. Мы считаем, что оценка состояния активации клеток in vivo привитых лишена многих описанных ранее недостатков и может дать ценную информацию о динамике активационного процесса при первичном иммунном ответе у впервые привитых и вторичном иммунном ответе на антиген у ревакцинированных.
Материал и методы
Первую группу обследованных составили 25 детей (12 мальчиков и 13 девочек) в возрасте от 1 года до 2 лет (средний возраст 1 год и 4 мес). Эти дети ранее не прививались против кори, краснухи и эпидемического паротита, не болели данными заболеваниями и
подлежали плановой вакцинации против подобных инфекций. Во 2-ю группу вошли 24 ребенка (11 мальчиков и 13 девочек) в возрасте от 6 до 7 лет (средний возраст 6 лет и 9 мес). Дети этой группы вакцинированы против кори, краснухи и эпидемического паротита в возрасте 1 года и подлежали ревакцинации согласно календарю прививок. Все дети были привиты вакциной «Приорикс» (GlaxoSmithKline, Бельгия), содержащей живые вакцинные штаммы вирусов кори, краснухи и эпидемического паротита. Работа одобрена этической комиссией Московского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского, родители подписывали информированное согласие на участие детей в программе исследований.
До вакцинации, через 7 дней и через 42-49 дней после нее проводили взятие крови из локтевой вены в количестве 4 мл в пробирки Vacutamer с напылением натриевой соли гепарина. Фракцию мононуклеаров выделяли методом градиентного центрифугирования. Мембранные CD-маркеры определяли методом проточной цитофлюорометрии в реакции прямой иммунофлюоресценции, реактивы и технология BD Bioscienses: цитометр FACSCalibur, программа сбора и обработки информации CeПQuest Выделение лимфоидного региона проводили с окрашиванием CD45/CD14 по графикам светорассеяния с контролем чистоты выделения лимфоцитов по экспрессии CD45 (95-98% CD45+-клеток в регионе). Для определения субпопуляций лимфоцитов использовали четырехцветные композиции из следующих поверхностных маркеров: CD3, CD4, CD8, CD19, CD16/56, CD25, CD38, CD122, CD127, HLA-DR. Анализ данных иммунофлюоресценции включал комплекс показателей. Оценивали общее количе-
Таблица 1
Уровни основных субпопуляций лимфоцитов в крови детей, привитых против кори, краснухи и эпидемического паротита (процент в лимфоидном гейте)
Субпопуляции Впервые привитые Ревакцинированные
до вакцинации через 1 нед через 6 нед до вакцинации через 1 нед через 6 нед
Лимфоциты 57,4±2,7 55,4±2,6 56,3±2,6 39,7±2,8 38,3±1,8 39,1±1,7
CD3+ 71,5±2,1 69,7±1,9 70,3±1,8 65,5±1,4 67,6±1,6 68,7±1,3
CD3+CD4+ 48,7±1,4 46,6±1,2 47,3±1,4 40,8±1,2 40,7±1,1 41,6±1,3
CD3+CD8+ 22,2±1,1 21,4±1,3 23,1±0,9 21,0±0,9 19,8±1,1 21,4±0,8
CD19+ 21,5±1,2 20,8±1,1 19,4±0,9 12,9±1,8 11,4±1,2 11,5±0,7
CD16+/56+ 13,5±0,8 14,3±1,3 15,2±1,0 14,5±1,2 15,2±1,7 13,8±1,1
ORIGINAL ARTICLE
Разделение субпопуляций Т^ и ТЬа^ по экспрессии на них CD127. а - разделение субпопуляций в лимфоидном гейте по экспрессии СБ25+ и СБ127+; (Я4), ТЬ (R3); б - распределение ТЬ и Treg при окрашивании СБ4 и СБ25 (зона разделения показана линией)
ство исследуемых субпопуляций (на лимфоидный регион), а также процент CD3+4+- или ОТ3+ОТ8+-лимфоцитов и распределение субпопуляций с различным иммунофенотипом среди этих клеток.
Полученные результаты обрабатывали методами вариационной статистики с вычислением средней арифметической и ее стандартной ошибки (М±Ж). О достоверности различий средних величин судили по критерию Стьюдента (/). Различия считали значимыми при р < 0,05. Статистическую обработку данных проводили с применением программы Microsoft Excel.
результаты и обсуждение
Вакцинация «Приориксом» не повлияла на уровни основных субпопуляций лимфоцитов в периферической крови (табл. 1) ни в 1-й, ни во 2-й группах. В то же время при исследовании активационных маркеров, экспрессированных на лимфоцитах этих субпопуляций, выявились интересные различия.
Одним из ранних маркеров активации субпопуляции СБ3+СБ4+ Т-хелперов является а-цепь рецептора к ГЬ-2 - СБ25. Однако этот рецептор постоянно экспрес-сирован на субпопуляции Т^. Различить активированные СБ3+СБ4+ (ТИас4) и можно по экспрессии а-цепи для другого цитокина - Ш-7 (СБ127). На рисунке представлены эти две субпопуляции. Для ТИас4 типичен фенотип СБ127111, а для Treg - фенотип СБ12710. Определение экс-
прессии СБ25 и СБ127 на СБ3+СБ4+-лимфоцитах позволяет четко разделить субпопуляции СВ25Ь1СБ12710 (Я4) - Treg и СБ25+СБ127Ь1 (Я3) - ТЬс4 (см. рисунок, а). На рисунке, б, показано, как разделяются активированные Т-хелперы и на графике СБ4+СБ25+: линия раздела проходит под углом к оси абсцисс (показано косой линией).
Распределение СБ3+СБ4+-лимфоцитов на субпопуляции представлено в табл. 2. Несмотря на то что общий уровень СБ4+СБ25+-лимфоцитов после вакцинации (или ревакцинации) имел тенденцию к повышению, и ТИас4 вели себя по-разному. Через семь дней после введения вакцины отмечали значимое увеличение процента ТИас4 Ф < 0,05), а через 6 нед относительное количество этих клеток возвращалось к исходному уровню. В то же время процентный уровень через 7 дней после вакцинации как у первично привитых, так и у ревакцинированных оставался неизменным, а через 6 нед достоверно (/> < 0,01) повышался как в младшей, так и в старшей группе. Обращает на себя внимание, что количество было исходно одинаковым у детей в возрасте 1-2 и 6-7 лет и осталось таковым после прививки. По-видимому, это связано с тем, что большую часть у здоровых детей составляют натуральные Т^, образуемые в тимусе, а индуци-бельные Т^, возникающие после антигенной стимуляции, составляют меньшую часть и постепенно элиминируются после завершения иммунного ответа.
Для СБ8+ Т-лимфоцитов типичным маркером активации считается СБ38. В табл. 3 представлены результаты определения экспрессии этого маркера. Из таблицы видно: как на СБ3+-, так и на СБ8+-лимфоцитах экспрессия маркера активации СБ38 не меняется у первично привитых и у ревакцинированных. Учитывая, что в пределах СБ3+- и СБ8+-популяций находится несколько субпопуляций, мы провели исследование некоторых из них. Выяснилось, что через 1 нед после прививки на субпопуляции цитотоксических лимфоцитов СБ3+СБ8+ маркер активации СБ38 был значимо снижен, а на субпопуляции СБ3+СБ4+ СБ38 - значимо повышен в группе впервые привитых детей. Также в группе впервые привитых через 1 нед после вакцинации отмечен значимо повышенный уровень лимфоцитов с фенотипом поздней активации СБ3+^А-БК+. Через 6 нед все указанные показатели не отличались от исходного уровня. В группе ревакциниро-ванных детей значимых изменений в экспрессии СБ38 и БЯЯ на исследованных субпопуляциях не выявлено.
Молекулу СБ122 (Р-цепь рецептора для Ш-2) также рассматривают в качестве одного из маркеров активации Т-лимфоцитов. Результаты оценки экспрессии СБ122 на различных субпопуляциях Т-лимфоцитов периферической крови впервые привитых и ревакцинированных детей представлены в табл. 4. Из таблицы видно, что, хотя общий уровень СБ122+ после первой прививки и после ревакцинации не менялся, при оценке его экспрессии на различных субпопуляциях Т-лимфоцитов обнаружены значимые различия. Так, у впервые привитых детей наблюдали значимое повышение экспрессии СБ122 на СБ3+- и на СБ8+- лимфоцитах, тогда как в группе ревакцинированных
Таблица 2
некоторые субпопуляции Т-лимфоцитов в крови детей, привитых против кори, краснухи и эпидемического паротита (процент CD3+CD4+-лимфоцитов)
Субпо- Впервые привитые Ревакцинированные
пуля- до вакци- через через до вакцина- через через
ции нации 1 нед 6 нед ции 1 нед 6 нед
CD4+25+ 6,95±0,52 9,45±0,61* 8,13±0,64 7,39±0,55 9,40±0,68* 9,14±0,71*
Treg 4,95±0,40 5,80±0,42 7,14±0,41** 4,92±0,42 4,79±0,38 7,13±0,49**
Thact 2,00±0,12 3,64±0,18* 0,99±0,13 2,47±0,14 4,61±0,29* 2,01±0,16
Примечание. * - p < 0,05 по сравнению с исходным количеством; сравнению с исходным количеством.
- р < 0,01 по
**
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Таблица 3
Экспрессия маркеров активации CD38 и DR на различных субпопуляциях Т-клеток у детей, привитых и ревакцинированных "Приорикс" (процент в лимфоидном гейте)
Субпопуляции Впервые привитые Ревакцинированные
до вакцинации через 1 нед через 6 нед до вакцинации через 1 нед через 6 нед
CD38+ 81,73±1,98 83,08±1,04 83,80±1,24 71,42±1,99 69,21±1,70 71,38±1,85
CD38+3+ 56,49±1,70 57,68±1,07 57,49±1,43 50,39±1,69 51,44±1,24 50,02±2,22
CD8+38+ 16,53±1,05 16,43±0,83 16,91±0,89 14,58±0,88 14,49±0,67 14,07±0,87
CD8+38+3+ 14,01±0,68 12,34±0,68* 13,82±0,71 11,51±1,04 11,48±0,93 10,44±0,82
CD4+38+3+ 32,45±1,21 39,04±1,17* 28,47±1,71 36,10±1,55 35,30±2,09 36,95±2,32
CD3+DR+ 0,43±0,07 0,60±0,09* 0,95±0,08* 0,68±0,09 0,67±0,12 0,62±0,11
* -р < 0,05 по сравнению с исходным уровнем/
Таблица 4
Экспрессия маркера активации CD122 на различных субпопуляциях Т-клеток у детей, привитых и ревакцинированных "Приориксом" (процент в лимфоидном гейте)
Субпопуляции Впервые привитые Ревакцинированные
до вакцинации через 1 нед через 6 нед до вакцинации через 1 нед через 6 нед
CD122+ 14,95±1,36 15±0,83 15,03±1,33 13,68±1,25 14,79±1,63 13,98±0,93
CD122+3+ 4,44±0,46 5,17±0,50* 4,31±0,93 3,76±0,47 3,22±0,39 4,30±0,81
CD8+122+ 3,86±0,33 4,74±0,69* 3,92±0,34 4,42±0,49 4,91±0,62 4,54±0,40
CD8+122+3+ 1,05±0,12 0,74±0,11* 1,23±0,25 0,61±0,09 0,63±0,08 0,52±0,10
CD4+122+3+ 3,41±0,36 4,86±0,34* 3,91±0,43 3,43±0,26 2,56±0,41* 3,98±0,32
CD8lo122+3- 2,17±0,20 3,70±0,33* 2,59±0,26 3,36±0,27 5,20±0,55* 3,14±0,34
* -р < 0,05 по сравнению с исходным уровнем/
таких изменений не отмечали. Интересно, что в группе впервые привитых обнаружено значимое снижение экспрессии CD122 на субпопуляции CD3+CD8+, а на субпопуляции CD3+CD4+ -значимое повышение этого маркера. Аналогичные изменения обнаружены в экспрессии CD38 на тех же субпопуляциях, в той же группе (см. табл. 3). В группе ревакцинированных детей экспрессия CD122 на CD3+CD8+ никак не менялась после прививки, тогда как на субпопуляции CD3+CD4+ отмечали значимое снижение. Следует особо отметить субпопуляцию CD3-810: такая комбинация - одна из характеристик активированных ЫК-клеток. Интересно, что и в группе впервые привитых и в группе ревакцинированных наблюдали значимое повышение экспрессии CD122 на субпопуляции CD3"810 через 1 нед после прививки. Напомним, что вакцина "Приорикс" содержит живые аттенуированные штаммы вирусов кори, краснухи и эпидемического паротита, а ЫК-клетки - основные "бойцы" врожденного иммунитета именно против вирусов. По-видимому, повышение экспрессии CD122 на CD3-810 ЫК-клетках говорит об их активном участии в ответе на вводимую вакцину. Через 6 нед после введения вакцины как в группе впервые привитых, так и у ревакцинированных исследованные параметры не отличались от исходного уровня.
Заключение
Таким образом, при исследовании маркеров активации показано, что у впервые привитых детей через 7 дней после вакцинации отмечались значимое увеличение количества активированных хелперов (CD3+CD4+CD25+CD127hi) и лимфоцитов с фенотипом поздней активации CD3+HLA-DR+; экспрессия CD38 и CD122 значимо повышалась на субпопуляции CD3+CD4+ и снижалась на цитотоксических лимфоцитах CD3+CD8+, а через 6 нед показатели возвращались к исходному уровню. Существуют различные мнения относительно роли молекулы CD38 на субпопуляциях Т-лимфоцитов, например,
что эта молекула способствует выходу Т-лимфоцитов из кровотока в ткани для реализации эффекторных функций [6]. В группе ревакцинированных детей также через неделю после прививки отмечали значимое повышение CD3+CE>4+CD25+CDШЫ и снижение экспрессии CD122 на CD3+CD4+, возвращающиеся к исходному уровню через 6 нед. Активацию клеток врожденного иммунитета (ЫК-клеток) обнаруживали через 1 нед после вакцинации независимо от типа иммунного ответа (первичный или вторичный). Следовательно, оценка комплекса рецепторов клеточной активации субпопуляций Т-хелперов, Т-цитотоксических и ЫК-клеток в динамике формирования поствакцинального ответа позволяет выявить определенные физиологические реакции, типичные для первичного или вторичного адаптивного иммунного ответа или для врожденного иммунного ответа. Уже через неделю после вакцинации по наличию повышения экспрессии выявленных рецепторов можно говорить о формировании иммунного ответа на вакцинацию или его отсутствии. Мы полагаем, что исследование активации различных субпопуляций лимфоцитов может быть информативно для мониторинга иммунного ответа на вакцину у различных групп пациентов, в том числе у иммунокомпрометированных больных.
Исследование не имело спонсорской поддержки.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
литература
3. Семикина Е.Л., Родионова Т.В., Закиров Р.Ш., Филянская Е.Г., Ма-янский Н.А. Методические возможности оценки активации лимфоцитов in vitro. Иммунология. 2014; 35 (2): 85-8.
6. Кудрявцев И.В., Борисов А.Г., Давыдова А.Я., Кробинец И.И., Савченко А.А., Серебрякова М.К. Особенности экспрессии CD38 Т-лимфоцитами периферической крови. Российский иммунологический журнал. 2015; 9 (18) № 2: 42-7.
references
1. Davis M.M. A prescription for human immunology. Immunity. 2008; 29: 835-8.
2. Appay V., van Lier R.A., Sallusto F., Roederer M. Phenotype and function of human T lymphocyte subsets: consensus and issues. Cytometry. 2008; 73: 975-83.
3. Semikina E.L., Rodionova T.V., Zakirov R.Sh., Filyanskaya E.G., Ma-yanskiy N.A. Metodical possibilities of evaluating the activation of lymphocytes in vitro. Immunologiya. 2014; 35 (2): 85-8. (in Russian)
4. Macey M.G., McCarthy D.A., Howells G.L., Curtis M.A., King G., Newland A.C. Multiparameter flow cytometric analysis of polymor-phonuclear leucocytes in whole blood from patients with adult rapidly progressive periodontitis reveals low expression of the adhesion molecule L-selectin (Cd62L). Cytometry. 1998; 34: 152-8.
5. Biancotto A., Fuchs J. C., Williams A., Dagur P. K., McCoy J. P., Jr. High dimensional flow cytometry for Comprehensive Leukocyte Immunophenotyping (CLIP) in translational research. J. Immunol. Meth. 2011; 363 (2): 245-61.
6. Kudryavtsev I.V., Borisov A.G., Davydova A.Ya., Krobinets I.I., Savchenko A.A., Serebryakova M.K. CD38 expression by peripheral blood n cell differentiation subsets. Rossiyskiy immunologicheskiy zhurnal. 2015; 9 (18) № 2: 42-7.
Поступила 15.01.16 Принята в печать 18.02.16
