CC BY
62
УДК 636.02:612.018:619:615.31
ЭКСПРЕССИЯ КАСПАЗЫ 32 И КАСПАЗЫ 8 В ЯИЧНИКАХ У САМОК КРЫС ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ДОЗАХ ЙОДИДА КАЛИЯ
Н.Л. Басалаева*, В.К. Стрижиков**, О.В. Дружинина***, Г.В. Сычугов**** *Региональная дирекция медицинского обеспечения на ЮУЖД, г. Челябинск,
**Уральская академия ветеринарной медицины Минсельхоза России, г. Троицк,
***Министерство здравоохранения Челябинской области, г. Челябинск, ****Областное патологоанатомическое бюро Министерства здравоохранения Челябинской области, г. Челябинск
Выявлено, что йодид калия оказывает дозозависимое влияние на уровень экспрессии каспазы 8 в яичниках эутиреоидных самок крыс.
Ключевые слова: каспаза 32, каспаза 8, йодид калия, яичники, крысы.
В литературе имеются данные о том, что йодиды стимулируют в щитовидной железе процессы апоптоза [2]. Некоторые исследователи считают, что йодиды влияют на митохондриальный путь программированной гибели клеток как в тканях щитовидной железы [1], так и в экстратиреоидных тканях [4].
Имеются также экспериментальные данные о влиянии йодида калия на выраженность экспрессии каспазы 32 и каспазы 8 в тканях щитовидной железы, гипофиза и яичников [5]. При дальнейших исследованиях было выявлено, что выраженность этого процесса в гипофизе и щитовидной железе дозозависима - активация каспаз возникает только при определенных дозах йодида калия, индивидуальных для гипофиза и щитовидной железы [3]. Оставался открытым вопрос, справедливо ли это утверждение для яичников.
Исходя из вышеизложенного целью настоящего исследования стало изучение влияния различных доз йодида калия на экспрессию каспазы 32 и каспазы 8 в яичниках у эутиреоидных самок крыс.
Материалы и методы. В эксперименте, выполненном на кафедре анатомии и гистологии Уральской академии ветеринарной медицины Минсельхоза России (зав. кафедрой - проф. В.К. Стрижиков), были использованы 32 беспородные крысы-самки 6-месячного возраста со средней массой 250 ± 30 г. Животные содержались в виварии со стандартным световым режимом (12 ч света : 12 ч темноты (дневная фаза - с 7:00 до 19:00 летнего времени)) и получали стандартный корм и воду. Эксперимент проводился в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к Приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. № 775). Самки были взяты на опыт в фазы диэструса и метаэструса. 8 животных составили контрольную группу, 24 - 1, 2, 3 и 4-ю груп-
пы (от 6 до 8 крыс в каждой). Крысам 1-4-й групп однократно через желудочный зонд вводили йодид калия из расчета соответственно 1 мкг/100 г, 4 мкг/100 г, 8 мкг/100 г и 25 мкг/100 г массы животного (м. ж.).
Анализ цикличности функционирования гонад проводился на основании определения гормонов репродуктивной сферы в сыворотке крови и исследования вагинальных мазков.
Все животные были подвержены эвтаназии под эфирным наркозом в период с 11 до 13 ч дневной фазы экспериментальных суток через 48 ч после введения йодида калия. Предварительно у животных проводился забор крови из яремной вены. У всех крыс были изъяты яичники.
Морфологический раздел работы был выполнен в Областном патологоанатомическом бюро Министерства здравоохранения Челябинской области (начальник - канд. мед. наук Г.В. Сычугов) и на кафедре анатомии и гистологии Уральской академии ветеринарной медицины Минсельхоза России (зав. кафедрой - профессор В.К. Стрижиков).
Определение экспрессии каспазы 32 и каспа-зы 8 в тканях яичников осуществляли стрепта-видин-биотиновым методом с помощью моноклональных антител к каспазе 32 (clone GHM62, 1:50 v/v) и каспазе 8 (clone 11 B6, 1:30v/v) (Novo-castra, Newcastle upon Tyne, UK). Было исследовано 32 образца (по 8 образцов в контрольной и второй группах, и по 6 - в первой, третьей и четвертой). Для визуализации антигенреактивных клеток использовали тест-систему «Novostain Universal Detection Kit» (Novocastra, Newcastle upon Tyne, UK).
Препараты исследовались с помощью светового микроскопа Axiostar plus (Carl Zeiss Jena, Germany), оснащенного 35-мм фотоаппаратом (Cannon Power Shot A520). Подсчет числа клеток с позитивным (коричневым) иммуногистохимиче-ским окрашиванием проводился при увеличении
Серия «Образование, здравоохранение, физическая культура», выпуск 32
67
Проблемы здравоохранения
х 400 по проценту окрашенных клеток (positive area % (PA%)). Результаты подвергались автоматизированному количественному анализу с использованием программного обеспечения BioVision Professional 3.0 (West Medica Handels GmbH, Vienna, Austria).
Комплексный статистический анализ был выполнен с использованием пакета прикладных программ Statistica for Windows 6.0. Достоверность различий между группами вычисляли с помощью /-критерия Стьюдента. Достоверными считали значения при р < 0,05.
Результаты исследования и обсуждение.
Экспрессия каспазы 8 (см. рисунок). Уровень экспрессии каспазы 8 достоверно повышался с 1,7 ± 0,8 % PA в контроле до 4,0 ± 0,9 % PA после дозы йодида калия 8 мкг/100 г м. ж. (р < 0,05) и до 4,2 ± 0,3 % PA после 25 мкг/100 г м. ж. (Р < 0,05).
Экспрессия каспазы 32 (см. рисунок). Повышение экспрессии каспазы 32 было недостоверным при всех дозах йодида калия: от 1,5 ± 0,5 % PA в контроле до 3,0 ± 0,7 % PA (р > 0,05), 3,9 ± ± 1,2 % PA (р > 0,05), 2,5 ± 0,2 % PA (р > 0,05), 3,4 ± 0,6 % PA (р > 0,05) после доз йодида калия
1, 4, 8 и 25 мкг/100 г м. ж. соответственно. Однако пик экспрессии каспазы 32 наблюдался после дозы 4 мкг/100 г м. ж.
При сравнении влияния различных доз йодида калия на экспрессию каспаз 32 и 8 в тканях яичника, гипофиза и щитовидной железы определяется, что реакция яичника на KI ближе к изменениям в щитовидной железе, чем к гипофизу. В гипофизе экспрессия каспаз 32 и 8 достоверно вырастает при всех исследуемых дозах йодида калия (с 1 до 25 мкг/100 г м. ж.) [3]. В щитовидной железе, как и в яичнике, - только после дозы 8 мкг/100 г м. ж. [3].
Было выявлено и отличие в реакции каспаз между щитовидной железой и яичником: в тканях щитовидной железы повышалась экспрессия эф-фекторной каспазы 32, а в тканях яичника - ини-циаторной каспазы 8. Также можно отметить, что
экспрессия каспазы 32 в щитовидной железе изменялась только при 8 мкг/100 г м. ж. [3]. В яичнике реакция каспазы 8 была с более широким диапазоном - достоверный рост был как после 8, так и после 25 мкг/100 г м. ж.
Понимание деталей процессов регуляции каспаз тесно связано с возможностью рационально манипулировать апоптозом с целью получения терапевтических выгод.
По результатам проведенного нами исследования можно предположить, что реакция каспаз на введение йодида калия не только дозозависима, но
и органоспецифична, причем каспазы в тканях экстратиреоидных органов изменяются активнее, чем в тканях щитовидной железы.
Литература
1. Boechat, L. Effect of iodide on Fas, Fas-ligand and Bcl-w mRNA expression in thyroid of NOD mice pretreated with methimazole / L. Boechat, C. Vilella, R. Zolliner // Brazil J. Medic. Biol. Res. - 2002. -Vol. 35. - Р. 289-295.
2. Influence of iodide and iodolactones on thyroid apoptosis: Evidence that apoptosis induced by iodide is mediated by lodolactones in intact porcine thyroid follicles / R. Langer, C. Burzler, G. Bechtner, R. Gartner // Exper. Clin. Endocrinol Diab. - 2003. -Vol. 111. - Р. 325-329.
3. Iodine concentration and signs of apoptosis in the thyroid and pituitary of female rats after different single doses of potassium iodide / N. Basalaeva, G. Sychugov, V. Strizhikov, E. Mikhailova // Endocr. Regul. - 2011. - Vol. 45. - Р. 183-190.
4. Molecular iodine induces caspase-independent apoptosis in human breast carcinoma cells involvingthe mitochondria-mediated pathway / A. Shrivastava, M. Tiwari, A. Sinha et al. // J. Biol. Chem. - 2006. -Vol. 281. - Р. 19762-19771.
5. Sings of apoptosis in the pituitary, thyroid and ovaries of femalerats after a single dose of potassium iodide. Endocrine Regul / N. Basalaeva, G. Sychugov, N. Miphtakhutdinov, V. Strizhikov // Endocr. Regul. -2010. - Vol. 44. - Р. 83-88.
Поступила в редакцию 14 июня 2012 г.
Динамика изменений экспрессии каспазы 8 и каспазы 32 в яичниках при различных дозах йодида калия. * - р < 0,05 - различия с контрольной группой
68
Вестник ЮУрГУ, № 28, 2012
