Экспрессия cd8-ассоциированныx генов в циркулирующих CD4 + цитотоксических лимфоцитах у здоровых доноров Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ИММУНОЛОГИЯ № 2, 2013

57. Vourvahis M., Tappouni H.L., Patterson K.B. et al. The pharmacokinetics and viral activity of tenofovir in the male genital tract. J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 2008; 47: 329-33.

58. Wang L.H., Begley J., St Claire R.L., 3rd et al. Pharmacokinetic and pharmacodynamic characteristics of emtricitabine support its once daily dosing for the treatment of HIV infection. AIDS Res. Hum. Retrovirus. 2004; 20: 1173-82.

59. Watson-Jones D., Baisley K., Rusizoka M. et al. Measurement

and predictors of adherence in a trial of HSV suppressive therapy in Tanzania. Contemp. Clin. Trials. 2009; 30: 504-12.

60. Weber J., Chakraborty B., Weberova J., et al. Diminished replicative fitness of primary human immunodeficiency virus type 1 isolates harboring the K65R mutation. J. Clin. Microbiol. 2005; 43: 1395-1400.

61. www.prepwatch.org.

Поступила 31.10.12

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ИММУНОЛОГИЯ И ИММУНОГЕНЕТИКА

© М.в. ПАЩЕНКОВ, Б.В. ПИНЕГИН, 2013 УДК 612.112.94.017.1:577.21.08

Пащенков М.В., Пинегин Б.В.

экспрессия CD8-АCCОЦИИРОВАННЫX гЕИОв в циркулирующих CD4+ цитотоксических лимфоцитах у здоровых доноров

Лаборатория клинической иммунологии ФГБУ ГНЦ Институт иммунологии ФМБА России, г Москва (115478, Каширское ш., д. 24, корп. 2)

Циркулирующие CD4+-цитотоксические Т-лимфоциты (CD4+^nn) представляют собой атипичную субпопуляцию CD4+ Т-клеток, которая обладает некоторыми свойствами, присущими CD8+ Т-лимфоцитам (наличие литических гранул, цитотоксических белков и клеточной цитотоксичности). В настоящей работе показано, что в CD4+-I4nn по сравнению с обычными CD4+ Т-клетками повышена экспрессия факторов транскрипции RUNX3 и эомезодермина, необходимых для дифференцировки и поддержания фенотипа CD8+ Т-лимфоцитов, а также снижена экспрессия фактора транскрипции ZBTB7B, играющего ключевую роль в дифференцировке и поддержании фенотипа CD4+ Т-лимфоцитов. Эти изменения в CD4+-I4nn проявляются фенотипически в виде повышения экспрессии перфорина и гранзима B, снижения экспрессии CD4 и появления невысокой экспрессии CD8 на 20-30% CD4+-I4nn. Таким образом, в основе дифференцировки CD4+ ЦТЛ из обычных CD4+ Т-клеток может лежать частичное переключение транскрипционной программы с CD4-типа на CD8-™a

Ключевые слова: CD4+-цитотоксические Т-лимфоциты, CD4, CD8, RUNX3, ZBTB7B, эомезодермин Pashenkov MV, Pinegin BV

EXPRESSION OF CD8-ASSOCIATED GENES IN THE CIRCULATING CD4+ CYTOTOXIC T LYMPHOCYTES

The circulating CD4+ cytotoxic T lymphocytes (CD4+ CTL) represent an atypical subpopulation of CD4+ T cells that possesses some features of CD8+ T lymphocytes (lytic granules, expression of cytotoxic proteins, cell-mediated cytotoxicity). Here we show that CD4+ CTL, as compared to "ordinary" CD4+ T cells, display an elevated expression of RUNX3 and eomesodermin, two transcription factors that are vital for differentiation of CD8+ T lymphocytes and for the maintenance of their phenotype. This is accompanied by the reduced expression of ZBTB7B, a transcription factor playing a key role in the differentiation of CD4+ T lymphocytes. These changes of transcription factors observed in the CD4+ CTL penetrate phenotypically as an elevated expression of perforin and granzyme B, diminished expression of CD4 and appearance of low CD8 expression on 20-30% of CD4+ CTL. Thus, differentiation of CD4+ CTL from "ordinary" CD4+ T cells may be driven by a partial switch of the transcriptional program from the "CD4 type" to the "CD8 type".

K e y w o r d s : CD4+ cytotoxic Tlymphocytes; CD4; CD8; RUNX3; ZBTB7B; eomesodermin

Введение. СВ4+-цитотоксические Т-лимфоциты (CD4+-ЦТЛ), циркулирующие в крови, представляют собой атипичную субпопуляцию CD4+ Т-клеток, которая обладает некоторыми свойствами, присущими CD8+ Т-лимфоцитам. Так, CD4+-U,Tn содержат литические гранулы, в которых присутствуют цитотоксические белки, они способны дегранулиро-вать и убивать клетки-мишени [1, 3, 5]. Характерной чертой CD4+-U,Xn являются утрата экспрессии костимуляторной молекулы CD28 и появление маркера терминальной дифферен-

Пащенков Михаил Владимирович (Pashchenkov Mikhail Vladimirovich), e-mail: [email protected]

цировки CD57, ассоциированного с наступлением клеточной старости [4, 14]. Механизмы дифференцировки CD4+-U,Xn изучены недостаточно хорошо, однако многократно продемонстрирована связь между повышенным содержанием этих клеток и наличием латентной цитомегаловирусной инфекции [3, 5, 14].

Приобретение CD4+ Т-клетками некоторых свойств CD8+ Т-клеток, вероятно, требует активации соответствующей транскрипционной программы. Известно, что при дифференцировке Т-клеток в тимусе формирование фенотипа CD8+CD4- обеспечивается факторами транскрипции RUNX1 и RUNX3, а формирование фенотипа CD8-CD4+ - факторами транскрипции GATA-3 и ZBTB7B (другое на-

- 72 -

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ИММУНОЛОГИЯ И ИММУНОГЕНЕТИКА

Праймеры, использованные в работе

Примечание. п. о. -

звание - ThPOK) [16, 17]. Недавно показано, что некоторые из этих факторов транскрипции необходимы для поддержания фенотипа Т-клеток и после выхода из тимуса. Так, ZBTB7B экспрессируется в циркулирующих CD4+ Т-клетках [13] и подавляет в них экспрессию генов, характерных для CD8-линии (CD8, перфорин, гранзим B) [15]. У мышей с гипофункцией ZBTB7B или с его избирательным нокаутом в циркулирующих CD4+

Т-клетках происходит RUNX3-зависимая реактивация экспрессии CD8-ассоциированных генов [15]. Кроме того, RUNX3 совместно с другим фактором транскрипции - эомезодермином (EOMES)

- контролирует дифференци-ровку наивных CD8+ Т-клеток в эффекторные цитотоксические Т-лимфоциты [6]. Этот процесс сопровождается повышением экспрессии перфорина, гранзима B и формированием литических гранул. Можно предположить, что факторы транкскрипции RUNX3, эомезодермин и ZBTB7B (точнее, изменение уровня их экспрессии) контролируют приобретение обычными CD4+ Т-клетками свойств ЦТЛ. Однако этот вопрос пока не нашел отражения в литературе.

В настоящей работе с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) провели сравнение экспрессии четырех групп генов в циркулирующих CD4+ ЦТЛ по сравнению с обычными CD4+ Т-клетками: 1) генов поверхностных маркеров CD4+ ЦТЛ (CD57/B3GAT1, CD28); 2) генов цитотоксических белков (перфорин, гранзим B); 3) генов факторов транскрипции (ZBTB7B, RUNX3, эомезодермин); 4) генов, ассоцированных с клеточной старостью (GLB1, p21/CDKN1A).

Материалы и методы. Выделение CD4+-ЦТЛ и обычных CD4+ Т-клеток из крови. Венозная кровь была получена от 5 клинически здоровых доноров в возрасте от 27 до 50 лет с высоким содержанием CD57+CD4+-U,TO (от 6,1 до 41% среди всех CD4+ Т-клеток; М±а = 22,2±15,1%). Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли на градиенте плотности фиколл-урографина ("ПанЭко", Россия). Из выделенных МНК путем негативной иммуномагнитной селекции выделяли CD4+ Т-клетки, используя реактивы и оборудование фирмы Milte-nyi Biotec (Германия). Затем с помощью парамагнитных частиц, конъюгированных с антителами к CD57 (Miltenyi Biotec, Германия), популяцию CD4+ Т-клеток делили на CD57+-фракцию (CD4+-HIX) и CD57--фракцию (обычные CD4+ Т-клетки). По данным проточной цитометрии, чистота CD57+- и CD57--фракций была > 90% (по процентному содержанию, соответственно, CD4+CD57+CD28- и CD4+CD57-CD28+-клеток). Выделенные клетки отмывали в фосфатносолевом буфере и лизировали в TriReagent (Sigma, США).

ПЦР-РВ. Общую РНК выделяли из клеточных лизатов согласно инструкции, прилагаемой к реактиву TRI Reagent. 1 мкг РНК подвергали обратной транскрипции с помощью набора реактивов RevertAid (Fermentas, Литва); в качестве праймера использовали гексамеры случайной последовательности. Праймеры для ПЦР обратного транскрипта в РВ (ПЦР-РВ) конструировали с помощью программы Primer-BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/

Таблица 1

Ген Белок Праймер Последовательность (5’ ^ 3’) (п. °0

B3GAT1 CD57 Прямой TGTGAGTGCTGGTAATGAGGAGCCG 185

Обратный TTTCGCGTCGGGGGTCACTG

CD28 CD28 Прямой GGTGCTGGTGGTGGTTGGTGG 134

Обратный GGCGGCGGGGAGTCATGTTC

PRF1 Перфорин Прямой GAGCCACAGTGGGCTGCCTG 116

Обратный GGGCTGCCATGGAGCTGGAATC

GZMB Гранзим B Прямой ACAGCAGCTCCAACCAGGGC 193

Обратный AGGAAGCCACCGCACCTCTTCA

RUNX3 RUNX3 Прямой GGTGCGCTCGATGGTGGACG 169

Обратный CACCACCGTACCATCCGGCAC

EOMES Эомезодермин Прямой GCAACCGGCCTCTGTGGCTC 174

Обратный GGAAGCGCCAGTGGTTGGGG

ZBTB7B Zbtb7b/ThPOK Прямой GGGGACGCGCTTCTTCCCAC 130

Обратный GCTCACTGCTGTGGTCCGGG

GLB1 Р1-Г алактозидаза Прямой ACGCTCCCGGCCTTTTATATGGG 164

Обратный AAGGTCAACTGAGGGCCCCG

CDKN1A p21 Прямой CTGCGCCAGCTGAGGTGTGAG 144

Обратный TGCCGCATGGGTTCTGACGG

GAPDH Глицеральдегид- Прямой CAGCCTCCCGCTTCGCTCTC 143

фосфатдегидро- геназа Обратный ACCAGGCGCCCAATACGACC

primer-blast/index.cgi); последовательности указаны в табл. 1. Амплификацию проводили с использованием смеси реактивов фирмы "Синтол" (Россия) на приборе 7300 Real Time PCR System (Applied Biosystems, США). Для детекции ампликонов использовали краситель SYBR Green. Амплификацию GAPDH и RUNX3 проводили при следующих условиях: начальная денатурация - 95°С, 5 мин., затем 40 циклов (95°С/15 с; 60°С/45 с) с детекцией сигнала в конце каждого цикла. При амплификации остальных генов циклы состояли из трех стадий (95°С/15 с; 60°С/40 с; T°C/35 c) с детекцией при T°C, с тем чтобы устранить неспецифический сигнал от низкомолекулярных неспецифических продуктов. При амплификации GZMB, PRF1, GLB1 и CD28 устанавливали T = 85°C, EOMES - T = 86°C, B3GAT1 (CD57), ZBTB7B и CDKN1A (p21) - T = 88°C. Если специфическая амплификация данного гена в данном образце отсутствовала, то Ct принимали равным 40. Специфичность амплификации подтверждали путем анализа кривых плавления (наличие единственного пика на графике в координатах "температура - 1-я производная от интенсивности сигнала" в области температур, выше или равных температуре детекции).

Относительную экспрессию (ОЭ) каждого гена вычисляли отдельно у каждого донора по методу 2-лла с нормализацией по гену GAPDH:

ОЭ = 2~MCt = 2~((Ctген обр■ 1■ - Ct ген обр. 2) - (Ct GAPDH обр. 1 - Ct GAPDH обр. 2))

где Ct - пороговый цикл, ген - любой исследуемый ген, обр. 1 - образец CD4+ ЦТЛ, обр. 2 - образец обычных CD4+ Т-клеток того же донора, в котором экспрессия данного гена принимается равной единице. Для статистического анализа данные переводили в логарифмическую форму (log2 ОЭ).

Проточная цитометрия. Иммунофенотипирование CD4+ ЦТЛ и обычных CD4+ Т-клеток проводили с помощью следующих моноклональных антител производства Beckman

- 73 -

ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2013

B3GAT1 CD57 559,8±556,9 5,84±4,29**

CD28 CD28 0,00033±0,000006 - -11,59±0,26**

Цитотоксические белки

PRF1 Перфорин 107,1±67,7 6,38±1,08**

GZMB Гранзим B 12,8±9,4 3,11±1,36**

Факторы транскрипции

RUNX3 RUNX3 4,7±1,1 2,19±0,34**

EOMES Эомезодермин 1264,8±1256,6 7,16±4,14**

ZBTB7B Zbtb7b/ThPOK 0,25±0,06 -2,04±0,34**

Coulter (США): aHm-CD57 (FITC), анти-CD8 (FITC), анти-CD28 (фикоэритрин), анти-CD4 (PC5), aHm-CD3 (ECD). Образцы анализировали на проточном цитометре Cytom-ics FC500 с использованием программы CXP (все Beckman Coulter, США).

Статистическая обработка данных. Парные показатели в CD4+ ЦТЛ и обычных CD4+ Т-клетках сравнивали с помощью парного t-теста Стьюдента.

Результаты. Сравнение экспрессии генов в CD4+ ЦТЛ и обычных CD4+ Т-клетках ex vivo. Как и ожидалось, экспрессия мРНК B3GAT1 (CD57) в CD4+-HM была в среднем в 560 раз выше, чем в обычных CD4+ Т-клетках; напротив, экспрессия CD28 в CD4+-U,Xn была снижена примерно в 3000 раз (табл. 2). Экспрессия мРНК PRF1 и GZMB в CD4+-ЦТЛ была повышена соответственно в 107 и 13 раз по сравнению с таковой обычных CD4+-Т-клеток (см. табл. 2), что согласуется с данными других авторов [2], и с экспрессией этих генов на уровне белковых продуктов [3, 14].

Наиболее примечательной находкой оказались изменения экспрессии ZBTB7B, RUNX3 и EOMES (см. табл. 2). Так, экспрессия мРНК RUNX3, отвечающего за дифференцировку CD8+ Т-клеток [6, 17], в CD4+-U,Xn была в 4,7 раза выше, чем в обычных CD4+ Т-клетках. Экспрессия EOMES, необходимого для приобретения CD8+ Т-клетками фенотипа цитотоксических лимфоцитов [6], в CD4+-U,Xn была повышена приблизительно в 1200 раз. В то же время экспрессия ZBTB7B, отвечающего за приобретение и поддержание фенотипа CD8-CD4+ [15, 16], в СМ+-ЦТЛ была снижена в 4 раза (см. табл. 2). Таким образом, можно предположить, что появление экспрессии перфорина и гранзима B, наблюдаемое в CD4+-HM, обусловлено повышением экспрессии факторов транскрипции RUNX3 и эомезодер-мина, контролирующих экспрессию этих белков.

Вопреки ожиданиям экспрессия генов, ассоциированных с клеточным старением - GLB1 (бета-галактозидаза, ассоциированная со старением [9]) и CDKN1A (р53-индуцибельный белок р21), - в CD4+^Xn ex vivo оказалась примерно в 2 раза ниже, чем в обычных CD4+ Т-клетках (см. табл. 2). Это, однако, не исключает возможности возрастания экспрессии этих генов при активации CD4+-HM in vitro и in vivo.

Снижение экспрессии CD4 и повышение экспрессии CD8 на CD4+ ЦТЛ ex vivo. Поскольку одной из основных функций RUNX3 и ZBTB7B является контроль поверхностного фено-

типа Т-клеток, изучали экспрессию CD4 и CD8 на CD4+^TO и обычных CD4+ Т-клетках у 5 обследованных доноров. Средняя интенсивность флюоресценции CD4 на обычных CD4+ Т-клетках составила 108,1±25,8 усл.ед., тогда как на CD4+-HM она была снижена в 1,7 раза, составив 63,1±16 усл.ед. (p < 0,01). Аналогичные изменения ранее наблюдали как наша, так и другие группы [1, 8].

В литературе давно описана субпопуляция Т-клеток с фенотипом CD4+CD8dim, которая обычно составляет менее 2% Т-клеток (см. рисунок, а), однако в редких случаях может достигать 40% общего количества Т-клеток [10, 11]. CD4+CD8dim-клетки имеют морфологию больших гранулярных лимфо-Т цитов и экспрессируют маркер CD57, что указыва-

ет на их принадлежность к CD4+^TO [10]. У обследованных нами доноров тоже имелась довольно значительная субпопуляция Т-клеток с фенотипом CD4+CD8dim (см. рисунок, б; для сравнения на рисунке а показаны Т-клетки контрольного донора с низким содержанием CD4+^IX). Результаты фенотипического анализа подтвердили, что большинство CD4+CD8low-клеток содержится во фракции CD4+^TO и не экспрессирует CD28 (см. рисунок, в, г). Процентное содержание CD4+CD8dim-клеток среди CD4+CD28-^TO составило 24,1±6,3%, среди обычных CD4+ Т-клеток - лишь 1,4±1,1%. Следует подчеркнуть, что экспрессия CD8 на CD4+CD8dim-ЦТЛ была на порядок ниже, чем на CD4-CD8+ Т-клетках (см. рисунок, б).

Экспрессия CD8 на CD4+ ЦТЛ.

а - CD3+ Т-клетки донора с высоким содержанием CD4+ ЦТЛ (31% от CD4+ Т-клеток). Регионами выделены популяции CD4+CD8- Т-клеток, CD4+CD8dim Т-клеток и CD4-CD8+-клеток. CD4+CD8dim клетки составляют 5,9% от всех Т-клеток, б - для сравнения показаны клетки донора 2 с низким содержанием CD4+ ЦТЛ (1% от CD4+ Т-клеток). У этого донора CD4+CD8dim клетки составляют 5,9% от всех Т-клеток, в и г - экспрессия CD8 и CD28 на изолированных CD4+ ЦТЛ (в) и обычных CD4+ Т-клетках (г) одного и того же донора. Указано процентное содержание клеток в соответствующем регионе или квадранте по отношению ко всем клеткам на графике.

Таблица 2

Относительная экспрессия ОЭ генов в CD4+^TH по сравнению с таковой обычных CD4+ Т-клеток (M±a)

Ген Белок ОЭ log2 ОЭ Направление

изменения*

Поверхностные маркеры

т

1

т т 1

Белки, ассоциированные с клеточной старостью GLB1 Pj-галактозидаза 0,52±0,12 -0,95±0,28** (

CDKN1A р21 0,47±0,21 -1,26±0,69** (

Примечание. * - направление изменения экспрессии генов в CD4+^HH по сравнению с таковым обычных CD4+ Т-клеток; ** -p < 0,05 при сравнении CD4+^nn и обычных CD4+ Т-клеток парным /-тестом Стьюдента.

- 74 -

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ИММУНОЛОГИЯ И ИММУНОГЕНЕТИКА

Обс уждение. V. Appay и соавт. [2], сравнив транс-криптомы CD8+ и CD4+ Т-клеток, пришли к выводу о том, что по мере дифференцировки той и другой субпопуляции Т-клеток их транскриптомы становятся все более схожими, причем наибольшее сходство наблюдается между терминально дифференцированными субпопуляциями CD8+CD57+CD28- и CD4+CD57+CD28-. Настоящая работа позволяет предположить, что в основе этого феномена лежат изменения экспрессии факторов транскрипции в CD4+ ЦТЛ: повышение экспрессии RUNX3 и эомезодермина, характерных для CD8+ Т-клеток, и понижение экспрессии ZBTB7B, необходимого для поддержания фенотипа CD4+CD8-. Эти изменения экспрессии факторов транскрипции могут быть взаимосвязаны, поскольку известно, что RUNX3 может подавлять экспрессию ZBTB7B и усиливать экспрессию эоме-зодермина, тогда как ZBTB7B подавляет экспрессию RUNX3 [6, 7, 12].

Изменения экспрессии факторов транскрипции, вероятно, ведут к частичному переключению транкскрипционной программы в CD4+ ЦТЛ с CD4-rarn на CD8-ram В результате CD4+^Tn приобретают как функциональное, так и отчасти фенотипическое сходство с CD8+ Т-клетками, что проявляется, в частности, в повышении экспрессии перфорина и гранзима B, снижении экспрессии CD4 и появлении невысокой экспрессии CD8 на части CD4+-U,Rfi. Данные по экспрессии CD4/CD8 напоминают результаты L. Wang и соавт. [15], которые получены на мышах, экспрессирующих гипо-морфный аллель гена Zbtb7b. В периферических лимфоидных органах этих мышей наряду с CD4+CD8- Т -хелперами и CD4-CD8+ цитотоксическими Т-клетками имеется дополнительная популяция Т-клеток, характеризующаяся промежуточными уровнями экспрессии CD4 и CD8. У мышей с полным нокаутом Zbtb7b CD4+ Т-клетки на периферии практически отсутствуют [15]. В литературе нет данных о том, участвуют ли указанные факторы транскрипции в повышении экспрессии CD57 и репрессии гена CD28, наблюдаемых в CD4+-U)Lfi. Сигналы, вызывающие изменения экспрессии факторов транксрипции в CD4+-U,Rfi, а также связь этих сигналов с цитомегаловирусной инфекцией требуют дальнейшего изучения.

Благодарность

Работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант 10-04-01337).

ЛИТЕРАТУРА

1. Пащенков М.В., Муругина Н.Е., Муругин В.В., Пинегин Б.В.

Выявление и характеризация цитолитических CD8+ и CD4+

Т-клеток. Иммунология. 2010; 31 (1): 4-12.

2. Appay V., Bosio A., Lokan S. et al. Sensitive gene expression profil-

ing of human T cell subsets reveals parallel post-thymic differentiation for CD4+ and CD8+ lineages. J. Immunol. 2007; 179: 7406-14.

3. Appay V., Zaunders J. J., Papagno L. et al. Characterization of CD4(+) CTLs ex vivo. J. Immunol. 2002; 168: 5954-8.

4. Brenchley J. M., Karandikar N. J., Betts M. R. et al. Expression of CD57 defines replicative senescence and antigen-induced apoptotic death of cD8+ T cells. Blood. 2003; 101: 2711-20.

5. Casazza J. P., Betts M. R., Price D. A. et al. Acquisition of direct antiviral effector functions by CMV-specific CD4+ T lymphocytes with cellular maturation. J. Exp. Med. 2006; 203: 28б5-77.

6. Cruz-Guilloty F., Pipkin M. E., Djuretic I. M. et al. Runx3 and T-box proteins cooperate to establish the transcriptional program of effector CTLs. J. Exp. Med. 2009; 206: 51-9.

7. Egawa T., Littman D. R. ThPOK acts late in specification of the helper T cell lineage and suppresses Runx-mediated commitment to the cytotoxic T cell lineage. Nature Immunol. 2008; 9: 1131-9.

8. Fletcher J. M., Vukmanovic-Stejic M., Dunne P. J. et al. Cytomegalovirus-specific CD4+ T cells in healthy carriers are continuously driven to replicative exhaustion. J. Immunol. 2005; 175: 8218-25.

9. Lee B. Y., Han J. A., Im J. S. et al. Senescence-associated beta-galactosidase is lysosomal beta-galactosidase. Aging Cell. 2006; 5: 187-95.

10. Richards S. J., Sivakumaran M., Parapia L. A. et al. A distinct large granular lymphocyte (LGL)/NK-associated (NKa) abnormality characterized by membrane CD4 and CD8 coexpression. The Yorkshire Leukaemia Group. Br. J. Haematol. 1992; 82: 494-501.

11. Sala P., Tonutti E., Feruglio C. et al. Persistent expansions of CD4+ CD8+ peripheral blood T cells. Blood. 1993; 82: 1546-52.

12. Setoguchi R., Tachibana M., Naoe Y. et al. Repression of the transcription factor Th-POK by Runx complexes in cytotoxic T cell development. Science. 2008; 319: 822-25.

13. Sun G., Liu X., Mercado P. et al. The zinc finger protein cK-rox directs CD4 lineage differentiation during intrathymic T cell positive selection. Nature Immunol. 2005; 6: 373-81.

14. van Leeuwen E. M., Remmerswaal E. B., Vossen M. T. et al. Emergence of a CD4+CD28- granzyme B+, cytomegalovirus-specific T cell subset after recovery of primary cytomegalovirus infection. J. Immunol. 2004; 173: 1834-41.

15. Wang L., Wildt K. F., Castro E. et al. The zinc finger transcription factor Zbtb7b represses CD8-lineage gene expression in peripheral CD4+ T cells. Immunity. 2008; 29: 876-87.

16. Wang L., Wildt K. F., Zhu J. et al. Distinct functions for the transcription factors GATA-3 and ThPOK during intrathymic differentiation of CD4(+) T cells. Nature Immunol. 2008; 9: 1122-30.

17. Woolf E., Xiao C., Fainaru O. et al. Runx3 and Runx1 are required for CD8 T cell development during thymopoiesis. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2003; 100: 7731-6.

Поступила 30.11.12

- 75 -