CC BY
10
DOI: 10.24412/2074-5036-2023-3-72-76 УДК 619:615.9
Ключевые слова: кормовая добавка «Лозекорм», доклинические исследования, крысы, птица, продуктивность, сохранность, АЛТ, АСТ, РЗГА, ИФА
Key words: feed additive "Losekorm", preclinical studies, rats, poultry, productivity, safety, ALT, AST, HI test, ELISA
Юнищук Ф. Д., 2Семененко М. П., 3Онищук А. А., 4Лагунина Н. А., 5Катарская Т. В., 6Иванова А. Н.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПО ОЦЕНКЕ БЕЗВРЕДНОСТИ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ «ЛОЗЕКОРМ» И ЕЕ ПРОИЗВОДСТВЕННЫЕ ИСПЫТАНИЯ В УСЛОВИЯХ ПТИЦЕВОДЧЕСКИХ ХОЗЯЙСТВ
EXPERIMENTAL STUDIES TO ASSESS THE SAFETY OF THE FEED ADDITIVE "LOSEKORM" AND ITS PRODUCTION TESTS IN THE CONDITIONS OF POULTRY FARMS
'ООО «Биостим». Адрес: 344064, г. Ростов-на-Дону, ул. Большевистская, 27
OOO "Biostim". Address: 344064, Rostov-on-Don, Bolshevistskaya str., 27 2ФГБНУ «Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии» Адрес: 350005, г. Краснодар, пос. Знаменский, ул. Первомайская, 4 FSBSI «Krasnodar Scientific Center for Animal Husbandry and Veterinary Medicine» Address: 350005, Krasnodar, Znamensky, Pervomaiskaya st., 4 3ООО «ОЛФАРМ». Адрес: 117105, г. Москва, ул. Нагатинская, д. 3А OLPHARMLLC. Address: 117105, Moscow, Nagatinskaya st., 3A 4Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГБУ «ВГНКИ»). Адрес: 123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, д. 5, стр. 1 The All-Russian State Center for Quality and Standardization of Veterinary Drugs and Feed (FGBU "VGNKI") Address: 123022, Moscow, Zvenigorodskoe sh., 5, building 1 5АО ППЗ «Хабаровский». Адрес: 680052, г. Хабаровск, Хабаровский край, Хабаровский район,
с. Гаровка-1, ул. Краснореченская, 25 JSC PPZ "Khabarovskiy". Address: 680052, Khabarovsk, Khabarovsk region, Khabarovsky district,
Garovka-1, Krasnorechenskaya st., 25 6Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГБУ «ВГНКИ»). Адрес: 123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, д.5, стр. 1 The All-Russian State Center for Quality and Standardization of Veterinary Drugs and Feed (FGBU "VGNKI"). Address: 123022, Moscow, Zvenigorodskoe shosse, 5, building 1
Онищук Филипп Давидович, доктор биологических наук, профессор, директор ООО «Биостим», е-mail: [email protected]
CnishchukPhilip Davidovich, Doctor of Biological Sciences, Professor, Director of OOO "Biostim", e-mail: [email protected] Семененко Марина Петровна, доктор ветеринарных наук, доцент, заведующая отделом фармакологии, е-mail: [email protected] Semenenko Marina Petrovna, Doctor of Veterinary Sciences, Associate Professor, Head of the Pharmacology Department, e-mail: [email protected] Онищук Анастасия Александровна, заместитель руководителя отдела фармакологических исследований,
старший фармаколог, е-mail: [email protected] Onischuk Anastasia Aleksandrovna, Deputy Head of the Department of Pharmacological Researches, Senior Pharmacologist, e-mail: [email protected] Лагунина Наталья Александровна, кандидат ветеринарных наук, ст. науч. сотр., главный специалист отдела научного планирования и НИР, е-mail: [email protected] Lagunina Natalya Alexandrovna, PhD in Veterinary Sciences, Senior Researcher, Chief Specialist of the Department of Scientific Planning and Research, e-mail: [email protected] Катарская Тина Витальевна, заместитель генерального директора, е-mail: [email protected] Katarskaya Tina Vitalievna, Deputy of General Director, e-mail: [email protected] Иванова Анна Николаевна, начальник отдела научного планирования и НИР, е-mail: [email protected] Ivanova Anna Nikolaevna, Head of the Scientific Planning and Research Department, e-mail: [email protected]
Аннотация. Высокая заболеваемость и гибель сельскохозяйственных животных и птицы в значительной степени препятствует росту отечественного производства животноводческой продукции. Поэтому улучшение ветеринарного обслуживания животноводства и птицеводства, разработка более эффективных методов и средств профилактики широко распространенных заболеваний, в том числе и с помощью активных кормовых добавок, для повышения их продуктивности и сохранности, является актуальной задачей ветеринарной науки и практики. В работе представлены исследования по оценке безвредности новой комплексной кормовой добавки «Лозекорм» и ее профилактической эффективности в каче-
стве иммуномодулятора для создания стойкого напряженного специфического иммунитета к инфекционным заболеваниям птицы: Ньюкаслской болезни (НБ), инфекционного ларинготрахеита (ИЛТ), инфекционного бронхита кур (ИБК). Установлено, что «Лозекорм» относится к группе веществ малоопасных (IV класс опасности), не оказывает отрицательного влияния на общее состояние животных, их клинический статус, показатели гомеостаза крови, что позволяет использовать данную кормовую добавку в птицеводстве без специальных режимов и ограничений.
Summary. High morbidity and death offarm animals and poultry to a large extent hinders the growth of domestic livestock production. Therefore, improving the veterinary care of livestock and poultry, the development of more effective methods and means of preventing widespread diseases, including the help of active feed additives, to increase their productivity and safety, is an urgent task ofveterinary science and practice. The paper presents studies on the assessment of the safety of the new complex feed additive "Losekorm" and its prophylactic efficiency as an immunomodulator to create persistent intense specific immunity to infectious diseases of poultry such as Newcastle disease (ND), infectious laryngotracheitis (IL), infectious chicken bronchitis (ICB). It has been determined that "Losekorm" belongs to the group of low-hazard substances (hazard class IV), does not adversely affect the general condition of animals, their clinical status, blood homeostasis, which allows to use this feed additive in poultry farming without special regimes and restrictions.
Введение
Современное развитие сельскохозяйственного производства, и в первую очередь отрасли животноводства, требует использования достижений научно-технического прогресса, обуславливающего обеспечение продуктивного здоровья животных и птицы, в том числе с помощью создания и внедрения в практику новых фармакологических средств и кормовых добавок, проявляющих не только высокую эффективность при профилактике и терапии заболеваний, но и соответствующих всем критериям безопасности для живого организма.
Подобные критерии могут быть достигнуты в ходе детального доклинического изучения возможных токсических проявлений или нежелательных эффектов нового фармакологического средства, связанных с изменениями физиологического статуса организма на клеточном, органном или системном уровне.
При этом токсикологические исследования как раз и направлены на выявление возможных структурных и биохимических нарушений, возникающих в организме при кратковременном или длительном применении фармакологического средства, на изучение механизмов развития неблагоприятных эффектов, на оценку клинической патологии и отдаленных последствий для получения научными методами доказательств его эффективности и безопасности [1, 2].
В связи с вышеизложенным нами были проведены фармако-токсикологические исследования новой кормовой добавки «Лозекорм», представляющей собой комплексное соединение для стимулирования роста, развития, повышения продуктивности, сохранности, а также профилактики инфекционных заболеваний у сельскохозяйственной птицы [3, 4].
Материалы и методы
Опыты по оценке общетоксических свойств кормовой добавки «Лозекорм» были проведены в соответствии с требованиями к ла-
бораторным исследованиям по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период проведения работы и учета результатов [6] на основании «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» под общей редакцией проф. Р. У. Хабриева (2005), «Руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств» (часть первая) под редакцией А. Н. Миронова (2012) и ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности» на белых нелинейных крысах, содержащихся в условиях вивария.
В остром опыте токсикологическая оценка «Лозекорма» проводилась путем ее однократного введения непосредственно в полость желудка крыс с помощью атравматического зонда в максимальных для внутреннего введения дозах (5,0 мл). Животным контрольной группы в том же режиме дозирования вводился физиологический раствор. Грызуны по группам (опытная и контрольная, п=10) были распределены по принципу аналогов, при этом в качестве критерия принимались половая принадлежность и масса тела крыс, которая в среднем составила 215±6,0 г.
Параметры субхронической токсичности изу-ча-лись по общепринятым методикам на трех группах белых лабораторных крыс, руководствуясь результатами, полученными при исследовании острой токсичности [5]. Кормовая добавка задавалась крысам посредством болюсов (в качестве основы использовалась овсяная мука), натощак один раз в день, курсом 28 дней с последующим 14-дневным периодом отмены. Животные контрольной группы получали болюсы только с овсяной мукой.
При ежедневных наблюдениях учитывалось общее состояние, аппетит, показатели дыхания, пульса, температуры тела, функции органов пищеварения и мочеотделения, динамика прироста массы тела. Взвешивание животных осуществлялось в начале опыта, через 14 дней и по его окон-
чанию. Кровь для исследований брали на 30-е сутки экспериментального периода.
В работе использовалось следующее оборудование: весы аналитические OHAUS PA114C, фирмы Ohaus Corporation, USA, e=0,001g; анализатор биохимический Vitalab Flexor Junior с версией программного обеспечения 1.0. (открытая система для проведения фотометрических тестов, изготовитель Vital Scientific N. V. Netherlands); весы лабораторные М-ER, Россия; реактивы фирмы ELITech Clinical Systems (Франция) и Analyticon biotechnologies AG (Германия).
Статистическая обработка результатов проводилась с использованием программного обеспечения фирмы Microsoft ®. Критический уровень значимости нулевой статистической гипотезы (р) принимается равным 0,05.
В качестве метода серологического контроля инфекционных заболеваний птицы использовалась реакция иммуноферментного анализа (ИФА) и реакция задержки гемагглютинации (РЗГА) для выявления болезни Ньюкасла.
Результаты исследований
«Лозекорм» - комплексная кормовая добавка, содержащая хвойный экстракт, янтарную кислоту, ПЭГ-9 и воду, в которой присутствуют природные флавоноиды, микроэлементы, биоорганические соединения, обладающие иммуномо-дулирующими свойствами, активирующие клеточный метаболизм, что способствует активному росту и развитию птицы, а также увеличению продуктивности и сохранности поголовья.
Производителем кормовой добавки «Лозе-корм» по решению Россельхознадзора МСХ РФ № ПВР-2-42.20/03595 от 27.11.2020 является ООО «Биостим».
Результатами исследований острой токсичности установлено, что за весь период наблюдения (14 дней) гибели животных в опытной группе зарегистрировано не было, различий в поведении и состоянии подопытных и контрольных крыс не установлено. В первые сутки экспериментального периода отмечалось снижение потребле-
ния корма, которое имело место и в контрольной группе животных, и было связано, по всей видимости, не с токсическим действием кормовой добавки, а со стрессирующим эффектом процедуры внутрижелудочного введения больших объемов растворов.
При оценке внешних идентификаторов интоксикации - рефлексы, координация движений, физиологические параметры сердечного и дыхательного ритмов оставались без изменений. По шкале изменения активности крыс подопытные животные соответствовали значению «нормальное» (5/+++++/).
Таким образом, данные токсикометрии, а также наблюдения за лабораторными крысами в постинтоксикационном периоде острого опыта, по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества», позволили отнести кормовую добавку «Лозекорм» к 4-му классу опасности (вещества малоопасные), для которых диапазон доз LD50 при внутрижелу-дочном введении в опытах на крысах составил более 5000 мг/кг.
Принимая во внимание невозможность определения летательных доз кормовой добавки (в остром опыте среднесмертельная доза (LD50) установлена не была), отправным моментом для выбора дозировок при проведении субхронической токсичности явился максимальный объем, использованный при однократном введении (5,0 мл).
Эксперименты по определению субхронической токсичности кормовой добавки проводились на белых нелинейных половозрелых крысах со средней массой тела 175,8±1,47 г по следующей схеме (таблица 1).
В результате проведенных исследований установлено, что 28-дневное пероральное применение лабораторным крысам образцов кормовой добавки «Лозекорм» в изучаемых дозах не вызывает гибели животных - показатель сохранности по группам был 100 %.
У опытных животных в сравнении с интакт-ной группой не выявлено изменений и достоверных различий в показателях ритма дыхания, частоты сердечных сокращений и температуры
Таблица 1
Схема опыта при определении субхронической токсичности кормовой добавки «Лозекорм» на лабораторных крысах (п=10)
Группы Доза кормовой добавки
1 опытная 1/5 - 1,0 мл/животное
2 опытная 1/10 - 0,5 мл/животное
3 опытная 1/20 - 0,25 мл/животное
4 контрольная 0,9 %-ный раствор натрия хлорида в эквиобъеме 1 группы и в том же режиме дозирования
тела, которые не выходили за границы видово-возрастной нормы для взрослых здоровых крыс. Отклонений в функциях пищеварения и мочеотделения отмечено не было.
Применение кормовой добавки «Лозекорм» оказало положительное влияние на динамику прироста массы тела, так как животные всех опытных групп набирали массу с большей скоростью, чем здоровые крысы контрольной группы. Наиболее высокий показатель был установлен в первой опытной группе (17 %). В двух других опытных группах он составил 16,1 % (вторая) и 14 % (третья), а в контроле - 9,2 %.
Оценка комплекса биохимических показателей крови крыс выявила увеличение содержания глюкозы в первой и второй опытных группах - на 5,9 % и 9,9 %, что позволяет говорить о стимулирующем влиянии компонентов добавки (янтарная кислота) на углеводный обмен.
Под влиянием «Лозекорма» выявлено снижение уровня гепатоиндикаторных ферментов -АлАТ и АсАТ, которое отмечено во всех опытных группах, в сравнении с контролем - на 7,3 % и 3,4 % и 13,4 % (р<0,05).
Влияние кормовой добавки на липидный обмен опытных крыс проявилось в достоверном увеличении содержания триглицеридов на 53,2 % (1 группа) и 27,7 % (2 и 3 группа) относительно контроля.
Таким образом, длительное скармливание кормовой добавки «Лозекорм» лабораторным животным в субтоксических дозах не оказывает негативного действия на их организм, способствует приросту массы тела, а также положительно влияет на динамику биохимических показателей крови.
Эффективность кормовой добавки «Лозе-корм» изучалась в различных птицеводческих хозяйствах Российской Федерации: ООО «Че-баркульская птица» Челябинской области, АО ППЗ «Хабаровский» Хабаровского края, птицефабрика «Уссурийская» Приморского края, птицефабрика ООО «Дуэт» и птицефабрика ИП «Братусин С.С.» Краснодарского края.
«Лозекорм» применялся на молодняке птицы как иммуномодулятор для создания стойкого напряженного специфического иммунитета к инфекционным заболеваниям: Ньюкаслской болезни (НБ), инфекционному ларинготрахеиту (ИЛТ), инфекционному бронхиту кур (ИБК); на взрослом стаде - профилактика ослабленной и отстающей в развитии птицы с признаками респираторных инфекций: (ИЛТ, респираторный микоплазмоз, ИБК), а также кишечных инфекций (колибактериоз).
Обработка проводилась двумя методами — энтеральным и аэрозольным. Аэрозольные обработки проводились с помощью системы АПА-6Г или аппаратами САГ в дозе 0,5-1,0 л/1000 м3 на протяжении 20-25 минут до образования в птичнике густого аэрозольного тумана с экспозицией 25-30 минут.
Проводимый курс составлял 3 ежедневных обработки до появления признаков оздоровления птицы. При необходимости через 3-5 дней перерыва курс повторялся.
Установлено, что после аэрозольных обработок «Лозекормом» в конце курса признаки заболевания исчезали, птица начинала активно принимать корм, набирала вес, снижался падеж, повышалась яйценоскость и улучшалось качество скорлупы яиц.
Продуктивность яйценоскости птицы промышленного стада увеличилась с 94,6 до 97,4 %. Процент нестандартного яйца (бой, грязь, насечка, деформированное яйцо) снизился с 8,8 до 3,6-3,8 %. Процент сохранности молодняка увеличился с 96,0 до 99,8 %, промышленного стада (птица до 90 недель) - с 80,4 до 94,4 %.
Энтеральный способ применялся при появлении респираторных и кишечных признаков заболевания. Для этого птица пропаивалась «Лозекормом» в разведении с водой в дозе 0,10,2 мг/кг живой массы утром в течение 4-6 часов на протяжении 3-4 суток.
Установлено, что за это время среднесуточный привес птицы увеличился с 40,1 г в контроле до 70,08 г в опытной группе, при этом процент сохранности птицы увеличился с 96 % в контроле до 99,8 % в опытной группе (птицефабрика ООО «Дуэт»).
После курса применения «Лозекорма» исчезли клинические проявления болезни: слабость, беспокойство, ринит, коньюнктивит, слезотечение, чихание, носовые выделения, наличие слизи в ротовой полости. При патологоанатомическом вскрытии птицы признаки заболевания не выявлены, нормализовалось состояние слизистых оболочек дыхательного и пищеварительного тракта.
На основании серологического мониторинга сыворотки крови после проведения курсов обработки поголовья птицы (промышленного стада и молодняка) «Лозекормом» в РЗГА и ИФА (АО ППЗ «Хабаровский» Хабаровского края) наблюдалась положительная динамика напряженности поствакцинального иммунитета (таблица 2).
В результате проведенных испытаний добавка была включена в схему профилактических меро-
Таблица 2
Сравнительные показатели серологических исследований крови птицы
Птица с признаками заболевания Метод исследования До применения Лозекорма (август 2022 г.) После применения Лозекорма (июнь 2023 г.)
Болезнь Ньюкасла РЗГА 80-85 % log 4-6 ЕИД 50 100 % log 10-11 ЕИД 50
Инфекционный бронхит ИФА CV — 10-11% CV — 35-40%
приятий с целью повышения продуктивности и сохранности поголовья птицы.
Обсуждение результатов
Проведенные исследования по оценке безвредности кормовой добавки «Лозекорм» и ее производственные испытания в условиях птицеводческих хозяйств в различных регионах страны показали ее безвредность и высокую эффективность.
Были предложены два метода применения «Лозе-корма» на птице - энтеральный и аэрозольный. Установлено, что оба метода обработки птицы способствуют ее продуктивности и улучшению товарного качества яйца, что связано с входящими в ее состав хвойным экстрактом и янтарной кислотой. Янтарная кислота является регулятором тканевого обмена, стимулирует клеточное дыхание, выполняет универсальную функцию синтеза энергии на клеточном уровне, тогда как хвойный экстракт положительно влияет на продолжительность жизни и состояние здоровья птицы, улучшает обмен веществ, а также обладает выраженными иммуномодуляторными свойствами, активируя стойкий специфический иммунитет к инфекционным заболеваниям, о чем свидетельствуют РЗГА и ИФА, проведенные до начала приема «Лозе-корма» и в конце его применения.
Выводы
1. Кормовая добавка «Лозекорм» относится к группе веществ малоопасных (IV класс опасности). Ее однократное применение в максимальной дозе, а также длительное применение в субтоксических дозах не оказывает отрицательного влияния на общее состояние лабораторных животных, их клинический статус, показатели
гомеостаза крови, что позволяет использовать данную кормовую добавку в птицеводстве без специальных режимов и ограничений.
2. Кормовая добавка «Лозекорм» активно влияет на продуктивность и сохранность взрослой птицы и молодняка.
3. В ходе проведения испытаний доказана ее высокая эффективность при применении на птице в производственных условиях - увеличение продуктивности (рост, развитие, яйценоскость) и сохранности поголовья птицы при энтеральном способе применения и аэрозольных обработках. Побочных действий на организм птицы после применения добавки не выявлено. «Лозекорм» совместим с другими препаратами и антибиотиками, усиливая их действие.
Список литературы
1. Березовская И. В. Методические рекомендации по изучению безопасности воспроизводства лекарственных препаратов / И. В. Березовская, Т. А. Гуськова, А. Д. Дурнев // Биомедицина. 2011. № 3. С. 78-80.
2. Ланец О. В. Определение параметров токсичности нового препарата при длительном воздействии на организм крыс / О. В. Ланец, М. П. Семененко, Е. Н. Рудь // Сборник научных трудов Краснодарского научного центра по зоотехнии и ветеринарии. 2020. Т. 9. № 1. С. 362-365.
3. Онищук Ф. Д. Способ повышения иммунитета пчел. Патент РФ №2018131649. - 2018.
4. Семененко М. П. «Лозекорм» - новая безвредная кормовая добавка для пчел / М. П. Семененко, Ф. Д. Онищук, Е. В. Кузьминова // Пчеловодство. 2021. № 3. С. 8-10.
5. Jacobs A. C. History of Chronic Toxicity and Animal Carcinogenicity Studies for Pharmaceuticals. / A. C. Jacobs, K. P. Hatfield // Veterinary Pathology. 2013. 50(2).
6. Yousefi N. New Product Development in the Pharmaceutical Industry: Evidence from a generic market. / N. Yousefi, G. Mehralian, H. R. Rasekh, M. Yousefi // Iran J Pharm Res. 2017. 16(2).
Подписной индекс журнала «Актуальные вопросы ветеринарной биологии»: Агентство «Роспечать» - 33184
