CC BY
146
э
УДК 616.36:615.9] 1615.2-092.9
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ЛЬНЯНОГО МАСЛА И МАСЛА ИЗ ПЛОДОВ ГРЕЦКОГО ОРЕХА В ГАСТРОЭНТЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ
Быков М. И., Есауленко Е. Е., Басов А. А.
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Краснодар
EXPERIMENTAL FOUNDATION FOR LINSEED AND WALNUT OILS APPLICATION IN GASTROENTEROLOGY
Bykov M. I., Esaulenko E. E., Basov A. A.
State Educational Institution of Higher Professional Education «Kuban State Medical University» Ministry of Health Care of the Russian Federation, Krasnodar
Быков Михаил Ильич, кандидат медицинских наук, доцент кафедры хирургии № I факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки специалистов ГБОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.
Есауленко Елена Евгеньевна, доктор биологических наук, доцент кафедры фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации. Басов Александр Александрович, кандидат медицинских наук, доцент кафедры фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.
Басов
Александр Александрович
Basov Aleksandr A. 350063 г. Краснодар ул. Седина, д. 4
E-mail:
Резюме
В статье представлены результаты, отражающие гепатотропные эффекты льняного масла и масла из плодов грецкого ореха, их влияние на липидный спектр сыворотки крови крыс, подвергнутых интоксикации CCl4. Метаболизм липидов характеризовали путем определения в сыворотке крови содержания общего холестерина, неэтерифицированного холестерина, эфиров холестерина, холестерина липопротеидов высокой, низкой и очень низкой плотности, триацилглицеринов. У крыс с экспериментальной печеночной недостаточностью развивалась выраженная гиперхолестеринемия, связанная с увеличением холестерина во фракции липопротеидов низкой плотности, при одновременном снижении его во фракции липопротеидов высокой плотности, а также наблюдалось угнетение процессов этерификации холестерина (на 31,1 %). Под влиянием исследуемых веществ проявилась тенденция к уменьшению выраженности нарушений (в 1,7-2,0 раза) и тенденция к нормализации метаболизма липидов у животных.
Ключевые слова: гепатопротекторы, холестерин, липидный спектр. Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология 2015; 118 (6): 53-56
Summary
In the article the influence of the hepatotropic effect of linseed and walnut oils on the lipid composition of the rats' blood serum under CCl4 intoxication has been presented. Lipid metabolism was characterised by the assessment of total cholesterol content in the blood serum, non-etherified cholesterol, cholesterol ethers, cholesterol lipoproteids of high-, low- and very low- density as well as triaclglycerins. In rats with experimental severe liver insufficiency associated with cholesterol increase in low-density lipoproteid fraction alongside its decrease in high-density lipoproteid fraction hypercholesterolemia was progressing. Cholesterol etherification inhibition (by 31,1 %) was also observed. The tendency to less intensive disorders (by1,7-2,0) as well as the tendency to lipid metabolism normalisation in animals have been revealed under the influence of lipophilic substances studied.
Keywords: hepatoprotector, cholesterol, lipid spectrum.
Eksperimental'naya i Klinicheskaya Gastroenterologiya 2015; 116 (4): 53-56
При воздействии гепатотоксических веществ на организм повреждается не только печень и другие органы пищеварительной системы, но и легкие, почки, сердце, кроветворная и другие системы организма [2, 5, 8, 10]. Значительная распространенность поражений различных органов и систем проявляется сложным и тяжелым комплексом клинических симптомов, но при этом симптоматика поражения печени занимает ведущее место и определяет в большинстве случаев тактику лечения [1,3, 9].
Современные подходы к гепатопротекции и, в первую очередь, фармакологической коррекции токсических поражений печени базируются на представлениях о роли эссенциальных фосфоли-пидов (ЭФЛ) и полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) в метаболических и структурных трансформациях гепатоцитов. Несомненный интерес представляют гепатопротекторы, содержащие ПНЖК, которые получают из растительного сырья. Особое внимание уделяется роли ПНЖК в метаболизме липидов, поддержании жидкостности клеточных мембран, богатых длинноцепочечными полиено-выми кислотами. ПНЖК, являясь эссенциальными факторами пищи, обладают разнообразной биологической активностью, участвуют в адаптации организма к окружающей среде, оказывают сложный интегральный эффект, обуславливающий их незаменимость для большинства живых организмов [6].
Материалы и методы исследования
Эксперименты были выполнены на 120 беспородных крысах-самцах массой тела 170-220 грамм. Животные содержались в стандартных условиях вивариума. Использование животных в эксперименте проводилось в соответствии с правилами, регламентированными законодательством Российской Федерации и рекомендациями Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов в научных или иных целях. Подопытные животные были разделены на 4 группы: первая (I) группа — контрольная (п=30); вторая (II) группа — животные с моделированием токсического поражения печени (ТПП), вызванного введением подкожно 50 %-го масляного раствора тетрахлорметана — 0,5 мл/100 г массы тела — 1 раз в сутки в течение 3-х дней (п=30); третья (III) группа — животные с моделированием токсического
Льняное масло издавна используется в традиционной медицине для профилактики и лечения разнообразных заболеваний, благодаря положительному влиянию на многие органы и системы. Основная ценность льняного масла состоит в его уникальном жир-нокислотном составе, который в большинстве своем содержит незаменимые ПНЖК. Поступление в организм жирных кислот семейства ш-3 и ш-6 вызывает активацию окисления жирных кислот в тканях, торможение синтеза триацилглицеринов (ТАГ) в печени, снижение уровня холестерина, нормализацию обмена липопротеиновых частиц крови [7].Грецкий орех обладает обширным арсеналом фармакологических свойств, которые использует медицина. Одним из главных действующих начал грецкого ореха является юглон — производноегидрокси-альфа-нафтохинона. Под влиянием грецкого ореха в эритроцитах отмечено улучшение эндотелиальной функции клеток, снижение уровня С-реактивного белка и фактора некроза опухоли альфа. Различные части грецкого ореха обладают сильным антиоксидантным действием, благодаря содержанию токотриенолов. Исследований влияния масел льна и грецкого орехов, как потенциальных гепатопротекторов, на липидный спектр крови животных в доступной литературе практически нет. Эти обстоятельства послужили основанием для изучения влияния масел грецкого ореха и льна на липидный обмен у животных с токсическим поражением печени.
поражения печени, которым по гастральному зонду вводили масло грецкого ореха (п=30); четвертая (IV) группа — животные с моделированием токсического поражения печени, которым по гастральному зонду вводили льняное масло (п=30). Масла вводили внутрижелудочное 7-х по 30-е сутки эксперимента в количестве 0,2 мл в сутки в утренние часы до основного кормления животных.
Биохимические исследования влияния исследуемых масел на липидный обмен животных выполнялись общепринятыми методами и включали определение содержания в сыворотке крови крыс общего холестерина (ОХС), триацилглицеринов (ТАГ), эфиров холестерина (ЭХ), неэтерифициро-ванного холестерина (НЭХС), холестерина липопро-теидов высокой плотности (ЛПВП), низкой (Л ПНП) и очень низкой плотности (ЛПОНП).
экспериментальное обоснование использования льняного масла... | experimental foundation for linseed...
Определение содержания ОХС в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом Триндера основывается на реакции гидролиза ЭХ холестеринэстеразой с образованием НЭХС. Образовавшийся в результате гидролиза и имеющийся в пробе НЭХС под действием холестеролоксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием эквимолярного количества перекиси водорода, которая под действием пероксидазы окисляет хро-могенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски продукта, определяемая фотоэлектроколориметрически, пропорциональна концентрации содержания ОХС в исследуемой пробе сыворотки крови. Результаты исследования выражали в ммоль/л сыворотки крови [4].
Определение содержания ТАГ в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом Буколо и Дэвида основано на реакции ферментативного гидролиза ТАГ под действием липазы с образованием свободных жирных кислот и глицерина. Под действием глицерокиназы образовавшийся глицерин превращается в глицерол-3-фосфат, который окисляется кислородом воздуха с участием глицерофосфатоксидазы в фосфодиоксиацетон и пероксид водорода. В результате взаимодействия перекиси водорода с 4-аминоантипирином, 4-хлор-фенолом и под действием пероксидазы образуется окрашенное вещество хинонимин, концентрация которого в реакционной смеси определяется фотометрически и пропорциональна содержанию ТАГ в исследуемой сыворотке крови. Полученные результаты выражали в ммоль/л сыворотки крови [4].
Определение содержания ЭХС иНЭХС в сыворотке крови методом Златкиса-Зака основано на реакции осаждения НЭХС раствором дигитонина. В супернатанте после центрифугирования остаются только ЭХС. Его концентрацию определяли в соответствии с методикой, приведенной выше. Разница между содержанием ОХС и ЭХС соответствовала концентрации НЭХС в сыворотке крови, которую выражали в ммоль/л сыворотки крови.
Определение содержания ХС ЛВНП в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом основано на осаждении хиломикронов (ХМ), ЛПОНП, ЛПНП после добавления к исследуемой пробе сыворотки крови фосфорновольфрамовой кислоты и Mg2+. После центрифугирования реакционной смеси в надосадочной фракции остаются только ЛПВП, концентрация ХС в которых определяется в соответствии с методикой определения ХС в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом.
Расчет содержания ХС ЛПОНП и ХС ЛПНП осуществляли с использованием формул, опубликованных в литературе [11]:
ХС ЛПОНП (ммоль/л) = ТАГ (ммоль/л) / 2,2.
ХС ЛПНП (ммоль/л) = ОХС (ммоль/л) — ХС ЛПВП (ммоль/л) — ХС ЛПОНП (ммоль/л).
Обработку экспериментального материала проводили в соответствии с методами вариационной статистики, с использованием пакетов статистических программ «Microsoft Exel 2010» и STATISTIKA 6.0 for Windows. За достоверные различия в сравнении средних величин сравниваемых показателей брали t-критерий Стьюдента при p<0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Верификация изменений липидного обмена, возникающих при ТПП, в значительной мере базируется на данных исследования содержания в сыворотке крови ОХС и ТАГ (табл. 1).
Изменения липидного обмена у крыс с ТПП тетрахлорметаном состояли, прежде всего, в выраженной гиперхолестеринемии, связанной как с увеличением содержания по сравнению с контролем ОХС на 30,0 % (p<0,05), так и с увеличением его содержания в ЛПНП на 120 % (p<0,05) при одновременном снижении холестерина (ХС) во фракции ЛПВП на 45,1 % (p<0,05). По содержанию ХС в отдельных фракциях липопротеидов можно с высокой вероятностью судить о количестве самих липопротеидов в плазме крови [11]. Это позволяет на основании полученных нами данных предполагать, что у подопытных животных имело место формирование вторичной дислипопротеидемии II а типа по D. S. Fridrickson (1967). У крыс с интоксикацией CCl4 было выявлено угнетение процессов этерификации ХС, так содержание ЭХС в крови крыс уменьшилось на 31,1 %, а концентрация НЭХС возросла на 128,8 % (p<0,05), что обусловило уменьшение значения коэффициента ЭХС/НЭХС на 72,9 % по сравнению с контролем.
Угнетение процесса этерификации ХС связано с накоплением продуктов ПОЛ в липопротеидах и последующим нарушением распределения ОХС в ли-попротеидных частицах. Исследование содержания
ТАГ показало, что у крыс II группы их концентрация в крови уменьшилась на 66,7 % (р<0,05) по сравнению с контрольной группой. Вероятно, наблюдаемое снижение концентрации ТАГ связано с блокированием синтеза эндогенных ТАГ в печени в результате ее токсического поражения. Это подтверждается фактом снижения содержания ХС в ЛПОНП на 66,1 % (р<0,05) у крыс II опытной группы по сравнению с контролем. Поскольку ЛПОНП синтезируются в печени и в их состав входят в значительном количестве ТАГ, то блокирование синтеза последних сопровождается уменьшением образования ЛПОНП.
Полученные данные о состоянии липидного обмена у крыс с ТПП свидетельствуют, что при введении им масел грецкого ореха и льна проявилась явная тенденция к уменьшению выраженности нарушений и нормализации метаболизма липидов в организме. В III и ^группах крыс содержание ОХС и НЭХС в сыворотке крови достоверно уменьшилось по сравнению соП группой сравнения. Наиболее значительное снижение концентрации ОХС (на 17,5 %) и НЭХС (на 38,2 %) наблюдалось у животных, получавших льняное масло.
Анализ распределения ХС показал, что его содержание во фракции ЛПНП у крыс, получавших исследуемые масла, достоверно уменьшилось по сравнению со II группой крыс. Наиболее выраженный эффект снижения ХС в ЛПНП наблюдался у крыс, получавших льняное масло (на 47,4 %). В то же время
Таблица 1.
Динамика показателей метаболизма липидов в сыворотке крови крыс с острой интоксикацией тетрахлор-метаном на фоне введения исследуемых растительных масел (М±т)
Примечание:
* — р<0,05 в сравнении с контролем; н — р<0,05 в сравнении со II группой; I группа — контрольная; II группа — животные с моделированием ТПП; III группа — животные с моделированием ТПП, которым по гастральному зонду вводили масло грецкого ореха; IV группа — животные с моделированием ТПП, которым по гастральному зонду вводили льняное масло.
Исследуемый биохимический Группы подопытных животных
показатель I группа II группа III группа IV группа
ОХС, ммоль/л 2,90±0,08 3,77±0,06* 3,28±0,06* 3,52±0,04*
ТАГ, ммоль/л 1,29±0,07 0,43±0,02* 1,19±0,03*^ 0,95±0,02*^
ХС в ЛПВП, ммоль/л 0,91±0,04 0,50±0,02* 0,79±0,02* 0,64±0,02*
ХС в ЛПНП, ммоль/л 1,40±0,08 3,08±0,07* 1,95±0,06*^ 2,45±0,06*
ХС в ЛПОНП, ммоль/л 0,59±0,03 0,20±0,01* 0,54±0,02* 0,43±0,02*
ЭХС, ммоль/л 1,79±0,03 1,23±0,01* 1,40±0,02* 1,31±0,02*
НЭХС, ммоль/л 1,11±0,08 2,54±0,06* 1,88±0,06* 2,21±0,06*
Коэффициент ЭХС/НЭХС 1,81±0,14 0,49±0,01* 0,74±0,02* 0,59±0,02*
содержание холестерина в ЛПВП значительно увеличилось. Максимальное увеличение ХС в ЛПВП было у животных, получавших льняное масло (на 80,1 %). Содержание ХС в ЛПВП у крыс, получавших масло грецкого ореха, превысило этот показатель по сравнению со II группой на 58,0 %. Содержание ХС в ЛПОНП у крыс, получавших масло грецкого ореха, было больше, чем у животных II группы в 1,7 раза, а у крыс, получавших масло льна,— в 2 раза (р<0,05), что практически соответствовало значению этого показателя у крыс контрольной группы.
Выводы
Результаты исследования влияния льняного масла и масла грецкого ореха на состояние метаболических процессов у крыс с интоксикацией те-трахлорметаном позволяют сделать вывод о его выраженных позитивных эффектах, проявившихся в достоверной тенденции к нормализации нарушений обмена липидов в организме подопытных животных.
Полученные нами данные могут служить основанием для доклинических исследований
Литература
1. Аляутдин, Р. Н. Экспериментальная скрининговая оценка стресспротекторного действия фитопрепаратов / Р. Н. Аляутдин, Б. К. Романов, М. Д. Гусейнов, П. В. Лопатин, И. Н. Зилфикаров // Российский медицинский журнал.— 2008.— № 3.— С. 29-32.
2. Багирова, В.Л. Разработка инновационных препаратов — основа повышения качества лекарственного обеспечения в республике Казахстан / В. Л. Багирова, Л. Г. Сатаева // Российский медицинский журнал — 2008.— № 3.— С. 33-37.
3. Есауленко, Е. Е. Метаболические эффекты льняного масла у крыс с интоксикацией тетрахлорметаном / Е. Е. Есауленко // Фундаментальные исследования.— 2014.— № 1.— С. 59-63.
4. Камышников, В. С. Справочник по клинико-биохими-ческим исследованиям и лабораторной диагностике.— М.: МЕДпресс-информ, 2009.— 896 с.
5. Курзанов, А. Н. Влияние хронической инотксикации четыреххлористым углеродом на гидролазы крови, желчи и мочи // Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии: тр.20 междунар. конф. и дискус. науч. клуба.— Ялта; Гурзуф, 2012.— С. 237-239.
6. Самойлова, А. В. Некоторые аспекты моделирования сбалансированного жирнокислотного состава спредов / А. В. Самойлова, А. А. Кочеткова,
Содержание ТАГ в крови животных, получавших масла льна или грецкого ореха, достоверно превысило этот показатель у крыс II группы на 202,0 % и 178,3 % соответственно и статистически не отличалось от их содержания в крови животных контрольной группы.
В целом изменения липидного метаболизма у крыс с интоксикацией тетрахлорметаном, которым вводили масло льна и грецкого ореха, были значительно меньшими по сравнению с животными, не получавшими их.
гепатопротекторных свойств липофильных продуктов из плодов грецкого ореха и льна в гастроэнтерологической практике.
Работа выполнена при поддержке государственного задания Министерства здравоохранения Российской Федерации (от 28.01.2015 г.ч. 1, раздел 1) «Осуществление прикладных научных исследований, в том числе проведение доклинических исследований лекарственных средств и клинических исследований лекарственных препаратов».
С. М. Севериненко, В. Г. Байков // Вопросы питания.— 2008.— Т. 77, № 3.— С. 74-78.
7. Семенов, Д. Е. Влияние тритерпеновых производных на общую численность гепатоцитов в печени крыс с токсическим гепатитом / Д. Е. Семенов, Н. А. Жукова, Е. П. Бессергенева, И. В. Сорокина, Д. С. Баев, Б. М. Глу-хов, Г. И. Непомнящих, Т. Г. Толстикова // Бюллетень экспериментальной.биологии и медицины.— 2012.—Т. 153, № 6.— С. 837-840.
8. Шамычкова, А. А. Оценка внешнесекреторной функции поджелудочной железы у больных вирусными гепатитами В и/или С / А. А. Шамычкова, Е. В. Ни-кушкин // Клиническая лабораторная диагностика.— 2007.— № 2.— С. 47-49.
9. Яковенко, Э. П. Лекарственно — индуцированные поражения печени. Диагностика и лечение / Э. П. Яковенко, А. В. Яковенко, А. Н. Иванов, Б. И. Обуховский, А. В. Ковтун, И. П. Солуянова, Л. П. Краснолобова // Лечащий врач.— 2011.— № 2.— С. 16-20.
10. Cooksley, W. Treatment with interferons (including pegyla-tedinterferons) in patients with hepatitis B /W.Cooksley // Semin. Liver Dis.— 2004.— Vol. 24, Suppl.— P. 45-53.
11. Fridwald, W. T. Estimation of the concentration of lowden-sitylipoprotein cholesterol in plasma, without use of the preparative ultracentrifuge /W.T. Fridwald, R. J. Levy, D. S. Fred-rickson // Clinical Chem.— 1972.— Vol. 18.— P. 499-502.
