CC BY
57
Описанные микроскопические признаки характерны для всех изученных образцов коры ивы. Район заготовки сырья оказывает лишь некоторое влияние на интенсивность окраски первичной коры. Также может незначительно различаться количество и размер кристаллов кальция оксалата в первичной коре и кристаллоносной обкладке лубяных волокон.
Выводы: определены основные морфологические характеристики коры ивы белой: цвет и характер поверхности, запах и вкус. Проведено микроскопическое изучение образцов сырья, собранных в различных регионах Российской Федерации. Установлена совокупность диагностических признаков необходимых для идентификации сырья:
- многоугольная форма и коричневатая окраска клеток наружной коры, наличие в ней кристаллов кальция оксалата;
- обособленные овальные скопления клеток светлой окраски в пластинчатой колленхиме;
- во внутренней коре - группы оранжевожелтых толстостенных лубяных волокон, образующих концентрические пояса;
- слой крупных клеток ярко-оранжевого цвета с сильно утолщенными стенками у внутреннего края коры;
- наличие в паренхиме коры клеток с фла-бофенами;
- лубяные волокна с толстыми стенками, окруженные кристаллоносной обкладкой. Встречаются как одиночные кристаллы кальция оксалата (они имеют более крупный размер), так и группы кристаллов, образующие цепочки (в этом случае кристаллы более мелкие). Характерные формы кристаллов - друзы и призматические.
Результаты исследований позволяют подтвердить подлинность сырья независимо от региона заготовки и могут быть использованы при разработке проекта нормативного документа на лекарственное растительное сырье «Ивы белой кора».
ЛИТЕРАТУРА
1. Зузук Б.М., Куцик Р.В., Недоступ А.М. и др. Ива белая. Salix alba L. (Аналитический обзор) // Провизор. - 2005. - № 15. - С. 16-18.
2. Компанцева Е.В., Попова О.И., Игнатенко А.И. и др. Фитохимическое изучение коры ивы белой (Salix alba L.), произрастающей в различных регионах Российской Федерации // Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы. -Минск, 2009. - С. 265-268.
3. Методы анализа растительного сырья. Кора: [фармакоп. ст.] // Государственная фармакопея СССР: в 2 вып.: вып. 1. Общие методы анализа..-11-е изд. - М., 1987. - С. 261-263.
УДК 615.033 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОНИЦАЕМОСТИ КОЖИ ПРИ ТРАНСДЕРМАЛЬНОМ ВВЕДЕНИИ МЕКСИДОЛА
©Лосенкова С.О., НовиковВ.Е., Степанова Э.Ф.
Кафедра фармацевтической технологии, кафедра фармакологии с курсом фармации ФПК Смоленской государственной медицинской академии, Смоленск;
*кафедра технологии лекарств Пятигорской государственной фармацевтической академии, Пятигорск, Ставропольский край
E-mail: [email protected]
Проницаемость кожи крыс для мексидола из трансдермального пластыря определяли in vivo и in vitro. Методом in vitro через слой «переживающей» кожи животного с удалённой гиподермой зафиксировано проникновение мексидола в динамике эксперимента. Произведена количественная оценка степени высвобождения мексидола.
Ключевые слова: трансдермальный пластырь с мексидолом, проницаемость кожи крыс in vivo и in vitro, УФ-спектрофотометрия.
EXPERIMENTAL STUDYING OF PERMEABILITY OF A SKIN IN TRANSDERMAL
INTRODUCTION OF MEXIDOL Losenkova S.O., Novikov V.E., Stepanova E.F.
Pharmaceutical Technology Department, Department of Pharmacology with a Course of Pharmacy FPQ
of the Smolensk State Medical Academy, Smolensk;
Technology of Drugs Department of the Pyatigorsk State Pharmaceutical Academy, Pyatigorsk, Stavropol Region Permeability of a skin of rats for Mexidol from a transdermal plaster was defined in vivo and in vitro. The method in vitro through a layer of a "worrying" skin of an animal with removed of hypoderma fixes penetration of Mexidol in dynamics of experiment. The quantitative estimation of the degree of output of Mexidol is made.
Keywords: transdermal a plaster with Mexidol, permeability of a skin of rats in vivo and in vitro, Uf-spektrofotometrija.
Механизм проникновения лекарственного вещества (ЛВ) через кожу является малоизученным процессом, который связан со сложным морфологическим строением кожи, разнообразной ее функцией и физико-химическими особенностями проникающего вещества. Эффективность многих ЛВ, наносимых на кожу с лечебной целью, зависит от степени проникновения их через эпидермальный барьер в кожу. Проникновению лекарственных веществ в кожу способствуют основы (переносчики), к которым относятся гидрофильные и гидрофобные жировые вещества, водные растворы, эмульсии и гели [1].
Различные слои эпидермиса оказывают неодинаковое сопротивление проникающему веществу из внешней среды в организм. Относительно непроницаемая тонкая мембрана, так называемый эпидермальный барьер, располагается на границе между ороговевшей и неороговевшей частью эпидермиса. Главным барьером, препятствующим проникновению веществ через кожу, являются не все её слои, а только ороговевшая часть эпидермиса.
По данным Rothman, сохранение структуры и функции ороговевших слоев эпидермиса после смерти организма более продолжительно, чем других слоев кожи. Функциональная способность
ороговевших слоев, в частности барьерная в отношении проницаемости, сохраняется долгое время.
Целью нашего исследования явилось изучение проницаемости кожи крыс in vivo и in vitro для мексидола при наложении трансдермального пластыря, а также количественное определение степени его высвобождения.
Проницаемость кожи крыс определяли как in vivo так и in vitro. Исследование проницаемости кожи in vitro имеет ряд преимуществ: исключается возможность отравления организма, кожа может быть взята в достаточном количестве от одного животного или человека, чем практически устраняются индивидуальные различия в степени ее проницаемости.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для проведения исследования сконструирован пластырь с мексидолом площадью 25 см2 следующего состава: поливинилпирролидон К90 высокомолекулярный (пласдон ISP), 1,2-пропиленгликоль, субстанция мексидола (0,05), спирт этиловый 95%. Субстанция мексидола была предоставлена для исследования производствен-
ной компанией «Фармасофт». Адгезивную массу наносили на плёнку-подложку с неметаллизиро-ванной стороны, высушивали при 40°С в течение 8 часов. Аналогичным образом сконструирована матрица без лекарственного вещества (контроль).
Определяли проницаемость кожи in vivo на лоскутах кожи, связанных двумя концами с животным. Внутрибрюшинно крысам (массой 180220 г, n=3) вводили водный раствор хлоралгидрата 300 мг/кг животного. На участке кожи спины крысы тщательно удаляли шерсть, делали два разреза длиной 10 см, расстояние между которыми составляет 4-5 см; между разрезами кожу отделяли от подлежащих тканей. Поверхность кожи (эпидермиса) смачивали водой, тщательно вытирали. Вода размягчает и мацерирует роговой слой эпидермиса, что способствует проникновению веществ через кожу. Далее накладывали часть пластыря площадью 2 см2 (4 мг мексидола).
Параллельно проводили контрольный опыт, для чего на кожу наносили пластырь без ЛВ площадью 2 см2. Под лоскут кожи, связанной с животным двумя концами, помещали небольшой резервуар, заполненный водой очищенной (V=10 мл). Водный раствор, омывавший гипо-дермальную поверхность кожи, на эпидермис которой наносили испытуемый пластырь, исследовали методом УФ-спектрофотометрии на спект-
рофотометре СФ 2000-02. Водные растворы, взятые из разных резервуаров (опытного и контрольного) по 3,0 мл, переносили в чистые пробирки, к ним добавляли по 6,0 мл 0,01М раствора кислоты хлористоводородной. В качестве раствора сравнения использовали разведение, состоящее из 3,0 мл воды и 6,0 мл 0,01М раствора кислоты хлористоводородной. Толщина слоя 10 мм. Мек-сидол согласно ФСП «5% раствор мексидола для инъекций» имеет максимум поглощения 297±2нм в 0,01М растворе кислоты хлористоводородной. На рис. 1 представлены УФ-спектры мексидола и вспомогательных веществ, входящих в состав пластыря в 0,01М растворе кислоты хлористоводородной.
Белки кожи имеют собственное поглощение в области 230-300 нм и соответственно мешают количественному определению мексидола [2].
Для определения степени проникновения мексидола через кожу из трансдермальной композиции нами были сняты УФ-спектры в диапазоне волн 240-340 нм приготовленных разведений опытного и контрольного резервуаров, для чего к
3,0 мл диализата из каждого резервуара прибавляли 6,0 мл 0,01М раствора кислоты хлористоводородной. Максимумы поглощения в опытном и контрольном резервуаре (276±2 нм) не отличаются друг от друга и свидетельствуют о высвобождении только белков из гиподермы (рис. 2).
Рис. 1. УФ-спектры поглощения вспомогательных веществ и мексидола в 0,01М растворе кислоты (отсчёт от линии ординат).
Примечание. 1 - 1,2-пропиленгликоль; 2 - полиэтиленгликоль низкомолекулярный (ПЭГ-400); 3 - поливинилпирролидон высокомолекулярный (Пласдон К90).
Рис. 2. УФ-спектры разведений из опытного резервуара через 4, 21 и 24 часа наблюдения (максимумы 276,6 нм).
В качестве экспериментальной модели для изучения проницаемости кожи in vitro нами использована переживающая кожа крыс. Для проведения биофармацевтических исследований с поверхности спины крыс (n=6) тщательно удаляли шерсть. Лоскуты кожи освобождали не только от подкожной жировой клетчатки, но и слоя гиподермы, обильно пронизанного сетью капилляров. Проверяли лоскут под лупой на целостность поверхностной части эпидермиса, укладывали между двумя салфетками, хорошо смоченными физиологическим раствором, и переносили в чашку Петри [1]. Опыты ставили сразу же после взятия материала. Испытуемый пластырь площадью 2 см2 аналогичным образом наносили на кожу животного, предварительно смоченную водой. Проницаемость изолированной кожи определяли с использованием диализатора. Параллельно проводили контрольный опыт. Кожа служила мембраной, разделяющей пластырь с мексидолом и среду для диализа. В качестве диализной среды использована вода очищенная объёмом 50 мл.
Диализ проводился в термостате при температуре 37±Q,5°Q Отбор проб диализата производился через 1 час наблюдения. При этом объём жидкости, отобранной для пробы (3 мл), возвращался тем же объёмом воды очищенной. Жидкость для этой цели находится в термостате вместе с диализатором, для поддержания температуры эксперимента. К отобранным пробам (3,Q мл) прибавляли
6,0 мл 0,01М раствора кислоты хлористоводородной (рН 3-4). Аналогично регистрировали УФ-спектры в диапазоне волн 24Q-34Q нм.
Отличительные особенности между УФ-спектрами разведений опытного и контрольного резервуаров были зафиксированы через 6 часов от начала эксперимента (рис. 3). В контрольном образце максимум поглощения 276 нм, а в опытном 291,5 нм.
Через 7 часов наблюдения максимум поглощения спектра контрольного образца составил 276 нм, а опытного 293,5 нм (рис. 4). В течение суток максимум поглощения спектра опытного образца достиг значений 295 нм.
Рис. 3. УФ-спектры разведений диализата из контрольного и опытного резервуаров через 6 часов наблюдения.
Рис. 4. УФ-спектры разведений диализата из контрольного и опытного резервуаров через 7 часов наблюдения.
При последующем добавлении к 3,Q мл диализата из опытного резервуара 6,Q мл фосфатного буфера (рН 7,4) спектр поглощения смещался и имел максимум поглощения 325±3 нм, что характерно для продуктов гидролиза мексидола. В контрольном образце значимых изменений при этом не наблюдалось (рис. 5). Мексидол обратимо подвергается гидролизу в нейтральной и сла-бощёлочной среде особенно при воздействии высокой температуры (продукты разложения имеют максимумы 24S±2 нм и 325±3 нм) и имеет стабильные спектры в 0,01М растворе кислоты хлористоводородной (максимум 297±3 нм).
Прибавление хлороформа или 10% раствора хлорной кислоты, последующее центрифугирование с целью коагуляции белка [2] не обеспечило достаточную для последующего спектрофотометрического анализа полноту его осаждения и не способствовало обнаружению мексидола, так как в органических растворителях (хлороформ, эфир, спирт этиловый) мексидол имеет максимум поглощения 2S3±3 нм, что характерно для белков кожи.
При наблюдении на 2-3-исутки эксперимента зарегистрировано активное высвобождение в диализат продуктов распада белка (рН 6,Q), что делало невозможным дальнейшее проведение эксперимента. В результате исследований нам не удалось определить количественное содержание мексидола в диализате.
Для количественной оценки степени высвобождения и проникновения мексидола накладывали сконструированный пластырь на предварительно очищенную от шерсти и гидратированную кожу крыс-самцов (n=6) площадью 5 см2 (содержание мексидола 1Q мг) на трое суток экспери-
мента. По истечении времени наблюдения осуществляли смыв с поверхности кожи 0,01М раствором кислоты хлористоводородной. Помещали раствор в колбу на 50,0 мл, доводили до метки данным растворителем, 2 мл разведения помещали в колбу на 25,0 мл и доводили до метки. Разведение анализировали спектрофотометрически в диапазоне волн 240-340 нм, в качестве раствора сравнения использовали 0,01М раствор кислоты хлористоводородной.
Содержание мексидола вычисляли по формуле следующим образом:
D1x К*а*У1х V2. х Урсо ,
gг = D0xV0xV х Унав.
где D1 -оптическая плотность разведения компонентов пластыря;
а - навеска РСО мексидола в граммах (0,05);
V1, V2- объём разведения исследуемого образца (50 мл и 25 мл);
D0 - оптическая плотность раствора РСО мексидола;
V, V0 - объёмы разведения РСО мексидола (100 и 50мл), мл;
V нав. - количество мл исследуемого образца, используемое в разведении (2 мл);
К - поправочный коэффициент влияния основы на степень поглощения мексидола (высчитывается экспериментально);
Урсо - количество мл РСО, используемое в разведении (1 мл).
С учётом технологических потерь (3,6%) при конструировании пластыря на поверхности кожи было обнаружено 25±2% мексидола. Недостатком данного метода является отсутствие возможности определения количества действующего вещества в роговом слое.
Рис. 5. УФ-спектры разведений диализата из контрольного и опытного резервуаров в фосфатном буфере.
