CC BY
48
EXPERIMENTAL STUDY OF HORMONOCYTOSTATICS FOR TREATMENT OF BREAST CANCER
Z.S. Smirnova N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS
ABSTRACT
The objective of this study is investigation of the antitumor efficacy of hormonocytostatics with different physiological functions selected for the treatment of breast cancer, such as estrogene- derivatives phenestrol and cytestrol acetate, androgene - derivative testifenon and corticoid cytostatic drug cortifen. The clinical trial phase I have been completed for peroral oleum formulations of testifenon and cortifen. The regimens recommended for the clinical trial phase II are 150 mg/m2 for testifenon and 91,9 mg/m2 for cortifen daily in the course of 5 consecutive days. Cytestrol actetate, 1 la-hydroxy-derivative of ethynylestradiol, is an antiestrogenic drug with high antitumor efficacy. This drug is at the stage of the formulation development. Phenestrol has not been recommended for the clinical trial due to the difficulties associated with the development of formulation.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ГОРМОНОЦИТОСТАТИКОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
З.С. Смирнова Российский онкологический научный центр им. H.H. Блохина РАМН
РЕЗЮМЕ
В работе представлены результаты изучения противоопухолевой активности гормоноцитостатиков с разной физиологической направленностью гормонального действия, отобранных для лечения рака молочной железы из большого числа соединений. Это фенэстрол и цитэстрол ацетат на основе эстрогенов, андрогеноцитостатик -тестифенон и цитотоксическое производное кортикоидного ряда - кортифен. В настоящее время завершена I фаза клинического изучения препаратов тестифенон и кортифен в масляной лекарственной форме для приема внутрь. Тестифенон рекомендован на II фазу клинического испытания в суточной дозе 150 мг/м2, а кортифен -в дозе 91,9 мг/м2 при ежедневном введении в течение 5 дней. Цитэстрол ацетат, 11а-гидрокси-производное этинилэстрадиола, обладающий антиэстрогенной активностью и высоким противоопухолевым действием, находится на стадии разработки лекарственной формы. Из-за сложностей, возникших при разработке лекарственной формы фенэстрола, препарат не был передан в клинику.
Введение. За последние три десятилетия к гормонам, обладающим направленным противоопухолевым действием, присоединились гормоноцитостатики. Идея использования биологически активных веществ в качестве носителей цитотоксических групп и увеличения направленности действия этих групп на опухоли принадлежит академику Л.Ф. Ларионову [7]. Гормоноцитостатики (ГЦ) считаются транспортными формами ал-килирующей цитотоксической группы в ткани-мишени и происходящие из них опухоли. Гормоны - носители усиливают избирательность противоопухолевого действия ГЦ, повышая их накопление в тканях-мишенях и опухолях, исходящих из них. ГЦ также обладают меньшей токсичностью по сравнению с алкилирующи-ми агентами [16; 22; 26].
Работы по синтезу и экспериментальному изучению ГЦ начались в конце 50-х и начале 60-х г. практически в одно и то время у нас в стране и за рубежом [12; 15; 21; 23; 28; 30]. К настоящему времени в мире получено более 100 ГЦ на основе различных групп стероидных гормо-
нов: эстрогенов, андрогенов, прогестинов и кортикостероидов. В Швеции, Румынии, Германии, США и других странах синтезированы главным образом эстрогеноцито-статики, в которых использованы эстрадиол-17Ь, эстрон и диэтилстильбэстрол, а из других стероидов - преднизо-лон, дегидроэпиандростерони 19-нортестостерон. В качестве цитотоксических групп, наряду с алкилирующи-ми фрагментами, используются также эпоксидная и ази-ридиновая группировки [26], нитрозокарбаминовая группа [20], нитрозомочевины [18; 22; 24; 25], комплексные соединения металлов [31], алкалоиды [19].
Для лечения рака молочной железы за рубежом используются два гормоноцитостатика. Бусрамустин, синтезированный в Японии, является хлорамбуциль-ным производным эстрадиола, у которого вторая гидроксильная группа замещена на остаток бензойной кислоты. При метастатическом раке молочной железы установлен терапевтический эффект препарата в 33% случаев [17]. Другой препарат-Стерецит-производное преднизолона и хлорамбуцила синтезирован в
Швеции. Радом клинических исследований установлено, что частота объективных эффектов у больных с метастатическим раком молочной железы при применении стерецита колеблется от 9 до 49% [29; 32]. Сопоставление эффективности стерецита и простой комбинации его молекулярных компонентов -хлорамбуци-ла и преднизолона - выявило его преимущество при метастатическом раке молочной железы [27].
В РОНЦ также изучались гормоноцитостатики -производные гормонов с различными физиологическими свойствами, синтезированные как у нас в центре, так и в других учреждениях России. Цитотоксической группой в гормоноцитостатиках, синтезированных в России, служили алкилирующие агенты: ди-(2-хлорэ-тил) аминобензойная кислота, хлорфенацил, хлорам-буцил, ацетилсарколизин [8; 9; 13; 14]. Цитотоксичес-кая группа чаще всего присоединялась к гормону по функциональным группам гормона.
Материалы и методы. Работа выполнена на неинб-редных крысах массой 200-250 г, мышах линии С57ВЬ/ 6 и гибридах BDFj (C57BL/6 х DBA/2) массой 18-25 г, а также мышах SHK массой 30-3 5 г. Животных получали из отдела экспериментальных животных РОНЦ им.
H.H. Блохина РАМН. Их содержали в виварии на обычном рационе питания.
Противоопухолевая активность препаратов изучена на 2 моделях перевиваемых опухолей молочной железы (ОМЖ): аденокарциноме молочной железы Са-755 мышей и альвеолярном раке молочной железы РМК-1 крыс, а также спонтанных ОМЖ мышей SHK и ДМБА-индуцированных ОМЖ крыс.
Для перевивки Са-755 выделенную опухолевую ткань измельчали ножницами до гомогенной консистенции, добавляли среду 199 в соотношении 1:10 и
0,5 мл полученной суспензии, что составляет приблизительно 50 мг опухолевой массы, вводили подкожно в область правой подмышечной впадины мышам, тогда как для перевивки РМК-1 выделенную опухолевую ткань измельчали ножницами до гомогенной консистенции, добавляли среду 199 в соотношении 1:5 и 0,5 мл полученной суспензии, что составляет приблизительно 100 мг опухолевой массы, вводили подкожно в область правой подмышечной впадины крысам. Дозы и режимы введения препаратов приведены в табл.
Индукцию опухолей молочной железы осуществляли 4-кратным еженедельным внутривенным введением водно-жировой эмульсии ДМБА в суммарной дозе 8 мг на крысу. Опухоли индуцировали у неинбредных крыс - самок в возрасте 55 дней.
Лечение спонтанных и ДМБА-индуцированных ОМЖ начинали по достижении размеров соответственно 100 и 2500 мм3.
Противоопухолевое действие препаратов на перевиваемых опухолях оценивали по трем критериям: торможению роста опухоли (ТРО, %), увеличению продолжительности жизни опытных животных по сравнению с контрольными (УПЖ, %) и % излеченных животных.
Противоопухолевый эффект препаратов на ДМБА-индуцированных и спонтанных ОМЖ оценивали по регрессии роста опухоли, т.е. уменьшению
объема её по сравнению с объемом до начала лечения (%). При этом определяли полную ремиссию (ПР), частичную (ЧР) и стабилизацию опухолевого процесса. Полная ремиссия - полная регрессия опухоли, частичная ремиссия - регрессия опухоли более чем на 50% и стабилизация - регрессия опухоли менее чем на 50% или рост опухоли не более чем на 25%.
Терапевтический эффект гормонотерапии обычно оценивается как сумма положительных эффектов -ПР + ЧР + стабилизация опухолевого процесса.
При статистической обработке результатов опытов применяли метод Стьюдента-Фишера. Результаты считаются статистически значимыми при р J 0,05. Группы формировались с учетом получения статистически достоверных результатов: контрольная группа состояла не менее чем из 12, опытная - из 8 животных.
Результаты и обсуждение. Первым из гормоноци-тостатиков для лечения рака молочной железы был отобран фенэстрол - 4,4’ - бис[п-ди-(2-хлорэтил)ами-нофенацил] синэстрол.
При изучении гормональных свойств in vivo показано, что фенэстрол, как и входящий в него синэстрол, вызывают течку у кастрированных животных. Однако отличием гормонального действия фенэстрола от синэстрола является сила действия, проявляющаяся в величине физиологического эффекта и его длительности. Так, 2-дневное введение синэстрола в физиологически активной дозе 0,5 мг/кг вызывает у кастрированных крыс течку длительностью 7 дней. Введение же фенэстрола в эквимолярной дозе по той же схеме приводит к течке в течение 42 дней.
Противоопухолевый эффект фенэстрола был изучен на аденокарциноме молочной железы Са-755 мышей и альвеолярном раке молочной железы РМК-1 крыс (см. табл. 1). Показано, что фенэстрол в терапевтической дозе 100 мг/кг при ежедневном подкожном введении в течение 10 дней тормозит рост Са-755 на 37%) и РМК-1 на 49%. Однако при сочетанном применении с овариэктомией противоопухолевый эффект фенэстрола усиливается практически в 2 раза [3]. По силе противоопухолевого действия фенэстрол превосходит терапевтический эффект синэстрола.
Было установлено, что эндокринный механизм противоопухолевого действия препарата связан с угнетением продукции фолликулостимулирующего гормона гипофиза (см. табл.2). Фенэстрол в дозе 100 мг/ кг при ежедневном подкожном введении в течение 14 дней снижает уровень фолликулостимулирующего гор-
Таблица 1
Противоопухолевое действие фенэстрола на перевиваемые опухоли молочной железы в сравнении с синэстролом и в сочетании с овариэктомией
Группа Са-755 ТРО, % РМК-1 ТРО, %
Фенэстрол 37 (70) 49 (78)
Синэстрол 24 (29) 48 (69)
* В скобках показан противоопухолевый эффект препаратов в сочетании с овариэктомией; режим введения фенэстрола: 100мг/кг/24ч. Ч10 дней, синэстрола: 2,5мг/кг/24ч. 410 дней.
Таблица 2
Действие фенэстрола, синэстрола и овариэктомии на содержание ФСГ в гипофизах крыс
Группа Доза (мг/кг) ежедневно в течение 14 дней Содержание ФСГ (мг/мг массы гипофиза)
Контроль - 0,068
Фенэстрол 100 0,007
Синэстрол 1 0,032
Овариэктомия - 0,14
Примечание. Содержание ФСГ определяли с помощью методики “Augmentation test”.
мона в гипофизе до 0,007 мг на мг массы гипофиза, а синэстрол только до 0,032 мг [4].
Таким образом, данные о противоопухолевой активности фенэстрола показывают, что препарат, как и эстрогены, будет эффективен у больных раком молочной железы, находящихся в менопаузе, т.к. его противоопухолевое действие усиливается после удаления из организма эстрогенов яичников, роль которых в патогенезе рака молочной железы установлена.
Фенэстрол был рекомендован для лечения рака молочной железы. Однако сложности, возникшие при разработке лекарственной формы, заставили отказаться от его продвижения в клинику.
Из 6 андрогеноцитостатиков для лечения рака молочной железы был отобран препарат тестифенон -17Ь-[п-ди(2-хлорэтил)аминофенилацетат]-5а-андростан-17Ь-ол-3-он, синтезированный в химико-технологической лаборатории РОНЦ.
Изучение спектра противоопухолевого действия те-
стифенона показало, что он активен на опухолях молочной железы грызунов [5]. Тестифенон тормозит рост Са-755 на 92% и РМК-1 на 69%, а в сочетании с овариэкто-мией на 80%, а также вызывает стабилизацию роста спонтанных опухолей молочной железы мышей (см. табл .3).
На ДМБА - индуцированных опухолях молочной железы крыс, растущих медленнее, чем перевиваемые опухоли, выявлено длительное отсроченное противоопухолевое действие тестифенона (см. табл. 4). Он после 5-дневного курса введения в дозе 25 мг/кг вызывает частичные ремиссии в 42%) случаев, тогда как через 4 недели - в 75%> случаев.
По частоте объективных эффектов длительное введение тестифенона - в течение 21 - дня статистически не отличается от 5-дневного курса лечения: частичные ремиссии наблюдаются в 52 и 71% случаев соответственно . Молекулярный компонент тестифенона 5а-ДГТ вызывает частичные ремиссии только в 18% случаев.
Тестифенон обладает андрогенной и анаболической активностью, которая превосходит гормональное действие его молекулярного компонента - 5а-ДГТ (см.табл.5). Так, андрогенный индекс тестифенона и 5а-ДГТ составляют 8,5 и 1,1, а анаболический индекс 2,4 и 1,6 соответственно. В то же время тестифенон статистически значимо уступает по гормональной активности тестостерон-пропионату, который применяется в клинике при лечении рака молочной железы у женщин репродуктивного возраста.
При изучении эндокринных механизмов действия тестифенона показано, что он влияет на функцию яичников, вызывая эффект химической кастрации (см. табл.6).
Химическую кастрацию тестифенон вызывает не только при курсовом введении в терапевтической дозе 25
Таблица 3
Противоопухолевое действие тестифенона на опухоли молочной железы мышей и крыс в сравнении с молекулярными компонентами - 5а-дигидротестостероном (5а-ДГТ) и хлорфенацилом (ХЛ)
Опухоль Вид животного ТРО, % или уменьшение размеров опухоли по отношению к исходному, %**
Тестифенон ХЛ 5а-ДГТ
Са-755 мыши 92* 87* 0
Спонтанные ОМЖ** Стабилизация н/и н/и
РМК-1 крысы 69 (80)* 20 0
* р < 0,05 по отношению к контролю; в скобках показан терапевтический эффект тестифенона в сочетании с овариэкто-мией; дозы и режимы введения веществ: тестифенон - 25-50/24ч. Ч 5 дней; ХЛ - 1-2/24ч. Ч 5 дней; 5а-ДГТ - 15-20/24ч. 45 дней; н/и - не исследовали.
Таблица 4
Противоопухолевое действие тестифенона на ДМБА-индуцированные опухоли молочной железы крыс в сравнении с -5а-дигидротестостероном (5а-ДГТ)
№опыта опыта Группа Доза (мг/кг)/ интервал(час) Ч число введений После окончания курса лечения 4ерез 4 недели после лечения
4исло опухолей/крыс 4Р,% 4исло опухолей/крыс ЧР,%
і Контроль - 20/13 10 19/9 5
Тестифенон 25/24 4 5 12/7 42* 12/7 75**
2 Контроль - 44/26 5 46/23 5
Тестифенон 25/24 4 21 21/15 52** 21/15 72**
5а-ДГТ 10/24 4 21 11/8 18* 11/7 18*
* р < 0,05; ** р < 0,001 по отношению к контролю.
Таблица 5
Андрогенные и анаболические свойства тестифенона при ежедневном введении в течение 10 дней
Препарат Доза (мг/кг) Андрогенный индекс Анаболический индекс
Тестифенон 25 8,5* 2,4*
5а-ДГТ 15 1,1* 1,6*
Хлорфенацил 1 0,9 1
Тестостерона пропионат 2 10,7 4,5
* р < 0,05 по отношению к тестостерон-пропионату; андрогенный и анаболический индекс вычисляли как отношение средней относительной (на 100 г массы крысы) массы вентральной доли предстательной железы или ш. levator ani в опытной группе к средней относительной массе этих органов у кастрированного контроля, принимая массу органов в контроле за 1.
Таблица 6
Репродуктивная способность самок- мышей С5?В1/6 после воздействия тестифенона
Группа Доза (мг/кг)/ интервал (час); Ч - число введений Кол-во крыс Из них репродуктивно-способные (месяцы после курса лечения)
1 -2 3-4
Да Нет Да Нет
Контроль - 16 16 0 16 0
Тестифенон 150 41 10 7 3 0 10
25/24 4 5 9 5 4 0 9
15/24 45 10 8 2 0 10
10/24 45 8 8 0 1 7
5а-ДГТ 20/24 4 5 9 9 0 9 0
Хлорфенацил 1,5/24 45 9 9 0 0 9
мг/кг, но и в случае однократного введения препарата в дозе - 150 мг/кг. Следует также отметить, что тестифе-нон оказывает угнетающее действие на яичники и в дозах значительно ниже терапевтической дозы -10 и 15 мг/кг в день. Через 3-4 мес. после окончания введения тестифенона в дозах 15 и 25 мг/кг репродуктивная способность отсутствует у 100% мышей, а в дозе 10 мг/кг-у 87,5%. В течение 9 мес. наблюдения репродуктивная способность мышей не восстанавливается.
В системе in vitro обнаружена способность тестифенона специфически связываться с цитоплазматическими рецепторами андрогенов (РА) в клетках матки и вентральной доли предстательной железы крыс, а также опухолей молочной железы человека, что является начальным проявлением специфического гормонального действия (табл.7) [5].
In vivo на Са-755 показано, что тестифенон в виде гормонорецепторного комплекса транслоцируется из цитоплазмы в ядро опухолевых клеток и связывается с ядерными рецепторами, вызывая появление разрывов в молекуле ДНК и белков хроматина, что характерно для алкилирующих препаратов. Кроме того, тестифенон вызывает нарушение процесса транскрипции и метаболизма РНК в нормальных и опухолевых клетках в ранние сроки после его введения, что также связано с его алкилирующими свойствами [1; 2].
Завершена I фаза клинического испытания препарата тестифенон в масляной лекарственной форме (1-%-й раствор препарата в подсолнечном масле) для приема внутрь. Тестифенон рекомендован на II фазу клинического испытания в суточной дозе 150 мг/м2 при ежедневном введений в течение 5 дней.
В настоящее время продолжается изучение противоопухолевой активности тестифенона в липосомаль-
Таблица 7
Специфичность связывания тестифенона (1 Ч 10‘6 М) с цитоплазматическими РА в матке крыс, вентральной доли предстательной железы и опухолях молочной железы человека
Модель Содержание РА (фмоль/ мг белка) % подавления специфического связывания fH] -ДГТ с РА
Матка крыс 15,3 ±6,2 38*
Вентральная простата 66,0 ±8,1 44*
ОМЖ 21,2 ±8,7 43*
* р < 0,05.
ной лекарственной форме для внутривенного введения.
Для лечения рака молочной железы из двух ГЦ кор-тикоидного ряда отобран препарат кортифен -11-де-зокси-17а-окси-21-[п-ди(2-хлорэтил)аминофенилацетат] кортикостерон, синтезированный в химико-технологи-ческой лаборатории РОНЦ. Природный гормон, входящий в состав кортифена, - 11-дезокси-17а-оксикор-тикостерон, является гормоном-предшественником в метаболическом ряду глюко- и минералокортикоидов.
Показано, что Кортифен тормозит рост Са-755 и РМК-1 на 94 и 59%, тогда как преднизолон, который включается в комбинированную химиотерапию рака молочной железы, оказывает пограничный противоопухолевый эффект и тормозит рост этих опухолей на 55 и 40% (рис.1). Кортифен вызывает уменьшение размеров спонтанных опухолей мышей на 37%, в то же время преднизолон стимулирует рост этих опухолей. На ДМБА-идуцированных опухолях молочной железы
крыс кортифен вызывает регрессию опухолей на 33%, а преднизолон - на 20% [6].
На рис. 2 представлена динамика роста спонтанных опухолей молочной железы (ОМЖ) мышей и ДМБА-ин-дуцированных ОМЖ крыс после 2 курсов лечения корти-феном в дозе 15 мг/кг в течение 5 дней. Кортифен после 2 курсов лечения спонтанных ОМЖ мышей с интервалом 3 нед. и ДМБА-индуцированных ОМЖ крыс с интервалом 4 нед. вызывает практически полную регрессию этих опухолей. Эти данные свидетельствуют о высокой противоопухолевой активности кортифена при повторных курсах, а также позволяют предполагать, что лекарственная устойчивость к кортифену не развивается.
Кортифен обладает глюкокортикоидным действием, которое выявлено при его введении адреналэкто-мированным крысятам. При введении кортифена в дозе 9 мг/кг в течение 3 дней препарат продлевает жизнь животных в равной степени, как и эквимоляр-ные дозы входящего в него 17а-оксикортикостерона
- на 113 и 115%) соответственно.
В основе глюкокортикоидной активности кортифена лежит его способность специфически и с высоким сродством (Ка = 14 10 ~9 М) связываться с цитоплазматическими рецепторами кортикостероидов в нормальных и опухолевых клетках [1]. Кортифен в концентра-
ДМБА- индуц.
РМК-1
-60 -40 -20 0 20 40 60 80 100 120
Рис. 1. Противоопухолевый эффект кортифена (2) в сравнении с преднизолоном (1) на моделях опухолей молочной железы мышей и крыс.
Примечание: критерий эффективности на РМК-1 и Са-755 - ТРО, %; на ДМБА-индуцированных и спонтанных опухолях - регрессия опухоли, %.
1 2 3 4 5 6 7
Недели
Рис. 2. Динамика роста спонтанных ОМЖ мышей после двух курсов лечения кортифеном -1, контроль - 3 и ДМБА-индуцированных ОМЖ крыс - 2, контроль - 4
ции 1 Ч 10 ~8 М подавляет специфическое связывание 3Н-дексаметазона в цитозоле клеток Са-755 и РМЖ человека на 70-53% [6].
После связывания кортифена с цитоплазматическими кортикостероидными рецепторами происходит интенсивная транслокация гормонорецепторного комплекса в ядра опухолевых клеток, где образует длительно сохраняющиеся сшивки в ДНК, причем кортифен, в отличие от хлорфенацила, входящего в его молекулу, длительно подавляет процесс транскрипции РНК в клетках опухоли Са-755 [2].
К настоящему времени завершена I фаза клинического изучения препарата кортифен в масляной лекарственной форме (0,4-%-ный раствор препарата в подсолнечном масле) для приема внутрь. Установлена максимально переносимая суточная доза - 91,9 мг/м2 при ежедневном введении в течение 5 дней. Препарат рекомендован на II фазу клинического испытания.
Также продолжается изучение противоопухолевой активности кортифена в липосомальной лекарственной форме для внутривенного введения.
С открытием и использованием в онкологической практике методов исследования рецепторов стероидных гормонов связан важнейший этап развития гормонотерапии - применение антиэстрогенов. Они применяются при раке молочной железы для лечения диссеминированных форм и адъювантной гормонотерапии после радикальных операций. Наиболее широко используется нестероидный антиэстроген тамоксифен. Попытки синтезировать цитотоксические производные тамоксифена не увенчались успехом.
С целью поиска цитотоксических стероидов с ан-тиэстрогенной активностью были изучены 4 типа эст-рогеноцитостатиков: 11а-и 11Ь-гидроксипроизводные эстрадиола, этинилэстрадиола и эстрона, синтезированные в Эндокринологическом научном центре и опыт-но-наработочной лаборатории химических веществ РОНЦ. Показано, что в зависимости от конфигурации 11 -С-заместителя возможно получить активные эстрогены или антиэстрогены [10].
В результате структурно-функционального анализа полученных данных по гормональной и противоопухолевой активности 19 изученных веществ было отобрано соединение с антиэстрогенным действием:
11а-ацетат-3[п-ди(2-хлорэтил) аминофенилацетат] 17-ацетат этинилэстрадиола. Условное название соединения - цитэстрол ацетат.
Установлено, что цитэстрол ацетат в концентрации 1 Ч 10‘6М тормозит специфическое связывание меченого эстрадиола с РЭ в цитозоле клеток матки крыс на 100%, а в клетках опухолей молочной железы женщин на 87% (табл.9)
При изучении гормональной активности in vivo выявлена дозозависимая антиэстрогенная активность цитэстрол ацетата. Выраженный антиэстрогенный эффект
- 26,8% цитэстрол ацетат проявляет в дозе 150 мкг на мышь при ежедневном введении в течение 3 дней.
Цитэстрол ацетат эффективен в отношении Са-755 (табл. 11)и ДМБА-индуцированных опухолей молочной железы, содержащих РЭ (табл. 12).
Таблица 8
Специфичность связывания кортифена с рецепторами глнжокортикоидов в Са-755 и РМЖ человека
Опухоль Количество опытов Содержание РГ (фмоль/мг белка) % подавления специфи-ческого связывания 3Н-дексаметазона
Са-755 2 22,5 ± 1,5 70**
РМЖ человека 7/12* 29,8 ±3,3 53**
* в числителе - больные с опухолями, клетки которых содержат рецепторы глюкокортикоидов (РГ+), в знаменателе -общее число больных; ** р < 0,05.
Таблица 9
Специфичность связывания цитэстрол ацетата (1 Ч 10-6 М) с цитоплазматическими РЭ в матке крыс и опухолях молочной железы человека
Таблица 10
Ингибиция гормонального эффекта эстрона (ИЭ) на матку неполовозрелых мышей-самок под действием цитэстрол ацетата
Модель Содержание РЭ (фмоль/мг белка) % подавления специфического связывания 3Н-эстрадиола с РЭ
Матка крыс 37,3 ±2,9 100*
ОМЖ 27,9 ± 9,4 87*
* р < 0,05.
Доза мкг/ мышь /день Количество мышей в группе ИЭ, %
3 10 6,9
30 9 17,7*
150 10 26,8*
Примечание, эстрон в 10-%-ом спирто-масляном растворе в объеме 0,1 мл вводили подкожно в течение 3 дней; цитэстрол ацетат в объеме 0,2 мл - перорально; * р < 0,05.
На Са-755 выявлен высокий дозозависимый терапевтический эффект цитэстрол ацетата. Цитэстрол ацетат в терапевтической дозе 25 мг/кг при ежедневном введении в течение 5 дней тормозит рост Са-755 в течение 14 дней на 96-99%, увеличивает продолжительность жизни опытных животных по сравнению с контрольными на 48% и излечивает мышей в 12,5% случаев.
На ДМБА-индуцированных опухолях молочной железы крыс проведено сравнительное исследование противоопухолевой эффективности цитэстрол ацетата и тамоксифена. Показано, что тамоксифен проявляет только непосредственный терапевтический эффект: частичные ремиссии выявлены в 43% случаев и стабилизация роста опухоли в 14% случаев. В то же время цитэстрол ацетат обладает как непосредственным, равным действию тамоксифена, так и более сильным отсроченным противоопухолевым действием: частич-
ные ремиссии наблюдаются у 75% крыс и стабилизация роста опухоли у 13% животных.
Цитэстрол ацетат в настоящее время находится на стадии разработки лекарственной формы.
Выводы
1. Гормоноцитостатики, синтезированные на основе не модифицированных природных и синтетических гормонов, обладают более сильным гормональным и противоопухолевым эффектом, чем входящие в их молекулу гормоны (фенэстрол и тестифенон).
2. Данные о высокой противоопухолевой активности кортифена при повторных курсах позволяют предполагать, что лекарственная устойчивость к кортифе-ну не будет развиваться.
3. Синтез и изучение эстрогеноцитостатиков на основе модифицированных эстрогенов позволили отобрать цитэстрол ацетат с антиэстрогенной активнос-
Таблица 12
Противоопухолевое действие цитэстрол ацетата (ЦА) на ДМБА-индуцированных ОМЖ крыс в сравнении с тамоксифеном (Гам)
Группа Число опухолей Эффект после лечения, % случаев Число опухолей Эффект через 4 недели, % случаев
ЧР Стаб. Рост ЧР Стаб. Рост
Контроль 16 13 6 81 15 14 0 96
ЦА 11 45* 18* 36 8 13* 13
Там 7 43* 14* 43 5 20 0 80
* р < 0,5 по отношению к контролю; ** р < 0,5 по отношению к тамоксифену; дозы и режимы введения препаратов (мг/ кг/интервал (час) х число введений): ЦА - 2/24 х 30 дней, Там 0,8/24 х 30 дней.
Таблица 11
Противоопухолевый эффект цитэстрол ацетата при ежедневном подкожном введении в течение 5 дней, Са-755
Доза (мг/кг) ТРО, % (дни после лечения) УПЖ, % Излечение, % Гибель от токсичности
1 7 14
10 80* 95* 85* 26 12,5* 0/8
25 89* 99* 96* 48* 12,5* 0/8
50 94* 99,9* 99,7* -36 0 6/8
* р < 0,05 по отношению к контролю.
тью и высоким противоопухолевым эффектом на опухолях молочной железы. Учитывая наличие отсроченного терапевтического эффекта у цитэстрол ацетата, его можно будет рекомендовать на клиническое изучение при курсовом введении.
4. С учетом эндокринного механизма действия тес-тифенона - вызывать эффект химической кастрации -нет необходимости при раке молочной железы у женщин репродуктивного возраста при лечении препаратом производить овариэктомию.
5. Изучение механизма действия кортифена и тес-тифенона позволяет с уверенностью утверждать, что они специфически взаимодействуют с цитоплазматическими рецепторами стероидных гормонов и в виде гормонорецепторного комплекса транслоцируются из цитоплазмы в ядра нормальных и опухолевых клеток-мишеней. На основании этих данных следует ожидать, что эти препараты будут эффективны в отношении рака молочной железы с высоким содержанием функционально активных рецепторов, соответствующих гормональному носителю.
ЛИТЕРАТУРА
1. Belousova A.K., Boguslavskaya O.A., Bergoltz V.V. et al. Molecular mechanisms of hormonal cytostatic action. // Exper.oncol. - 1982. - 2, № 4. - P. 363 - 369.
2. Белоусова А.К, Суслова O.A. О механизме действия гормо-
ноцитостатиков тестифенона и кортифена. // Российский онкол. жур. - 1997. - 2. - С. 49 - 54.
3. Лагова Н.Д. Гормонотерапия рака молочной железы в эксперименте. В кн.: Гормонотерапия злокачественных опухолей. - М. - 1968. - С. 48 - 69.
4. Лагова Н.Д. Роль эндокринных механизмов в противоопухолевом действии гормоноцитостатиков. // Экспе-рим. онкол. - 1982 - 4, № 5. - С. 38 - 42.
5. Лагова Н.Д,, Софьина З.П., Шкодинская Е.Н., Курдюмова
К.Н. и соавт. Противоопухолевое действие тестифенона. // Вопр. онкол. - 1988. -34, № 11. - С. 1363 - 1368.
6. Лагова Н.Д., Киселев В.И., Курдюмова КН., Софьина 3.П.,
Шкодинская Е.Н. и соавт. Экспериментальное изучение противоопухолевых свойств и механизма действия кортифена. // Вопр. онкол. - 1989. - 35, № 4. - С. 450 - 456.
7. Ларионов Л.Ф., Манкин З.В. Биологические и химические способы лечения опухолей. В кн.: Злокачественные опухоли. Под ред. H.H.Петрова. - 1948.-1. - С. 117- 152.
8. Ларионов Л. Ф., Софьина З.П., Лагова Н.Д., Шкодинская Н.Д.
и соавт. Синтез и экспериментальное изучение противоопухолевого действия сложных эфиров п-ди (2-хлорэтил) аминофенилуксусной кислоты с этрогенными гормонами. // Вопр. онкол. - 1968. -14, № 11. - С. 61 - 64.
9. Larionov L.F., Sofyna Z.P., Lasarev N.I., LagovaN.D. etal. The study of action of esters of chlorophenacyl and various hormones on tumors and normal animal tissues. // Tenth intern, cancer cong. Abstracts. Houston, Texas, USA.- 1970.-P. 411-412.
10. Ржезников В. М., Иваненко Т.Н., ПокровскаяЕ.В., Федотов В.П. Биологическая активность окисленных по кольцу С эстрогенов. // Хим.-фарм. журн. -1986. - С. 1057 - 1061.
11. Ржезников В.М., Голубовская Л.E., Федотов В.П. и соавт. Результаты скрининга новых типов цитотокси-ческих стероидов и перспективы создания на их основе противоопухолевых препаратов. // Тезисы докладов 1 съезда онкологов стран СНГ, 3-6 декабря 1996, Москва. - ч. I. - С. 57 - 58.
12. Софьина3.П.,ЛаговаН.Д., ВалуеваИ.М.., КузьминаЗ.В. и соавт. Биологическое действие ряда гормоноцитоста-тических веществ (сложных эфиров хлорфенацила с си-нэстролом, дегидроэпиандростероном и прегненоло-ном). // Матер. I Всесоюзн. конф. по химиотерапии зло-
качественных опухолей. - Рига, 1968. - С. 441 - 443.
13. Софьина 3.П., Лагова Н.Д., Валуева И. М. Действие на экспериментальные опухоли и организм животных гормоноцитостатиков производных эстрогенов, андрогенов и некоторых других стероидных гормонов. // Химиотерапия опухолей в СССР. - 1973. - вып. 17. - С. 75 - 89.
14. SofynaZ.P., LarionovL.F., LagovaN.D., Platonova G.N. etal Androstane series steroid derivates. // PCT International application. SU 84/00033. Date offflling 27.06.1984, Date of printing 23.07.1986. Pat. FRG 349, 07, 38; Pat. Schveden 860, 08, 28-1 and others.
15. Шкодинская E.H., Курдюмова КН., Васина О. С., Берлин А.Я. П-ди (2-хлорэтил)аминофенилаланин (сарколизин) и его производные. VIII холестериновые эфиры ацетилсарко-лизина и п-ди(2-хлорэтил)амино-фенилуксусной кислоты. // Журн. общей химии. -1962. - 32, № 3. - С. 959 - 962.
16. Шкодинская Е. Н., Курдюмова КН., Лагова Н.Д. и соавт. В кн.: Целенаправленный транспорт новых противоопухолевых и противовирусных препаратов. - Рига, 1978.-С. 109-116.
17. Abe О., Izuo М., Watanabe Н., Enomoto К. Early phase II study of bestrabucil on advanced and recurrent breast cancer. // Oncologia. - 1986. -18. - P. 158 —166.
18. BetschB., BergerM.R., SpiegelhalderB. etal. Estradiol-linked nitrosoureas: new anticancer drugs with clearly modified pharmacokinetic properties. // Eur. J. Clin. Pharmacol. -1989.-36, suppl. — P. 306.
19. Blickenstaff R. Т., Gerzon K. Estrogen - Catharanthus (Yinca) Alkaloid Conjugates. // In: Cytotoxic Estrogens in Hormono Receptive Tumors /Ed. J.Raus, H.Martens, G.Leclercq/. —1980. - P. 89 - 105.
20. Bouveng R.,- Ellman М., Gunnasson P. O. et al. Effects of LS 1727, a Nitrosocarbamate of 19-Nortestosterone, on Dimethylbenz(a)anthracene-Induced Mammary Tumors in the Rat. // Eur. J. Cancer. - 1979. -13. - P. 407 - 414.
21. Burstein S. H, RingoldH. J. A steroidal mustard of the androstane series. // J. Org. Chem. -1961. - 26, № 9. - P. 3084 - 3086.
22. EisenbrandG., Berger M.R., Fischer J. etal. N’-(2-chloroethyl)-N’
- nitrosocarbamoyl amino acid derivatives of steroid hormones. // Cancer Treat. Rev. -1987. -14. - P. 285 - 290.
23. Gensler W.J., Scherman G.M. Synthesis of steroidal nitrogen mustard. //J. Org. Chem. -1958. - 23, № 8. - P. 1227 -1228.
24. Kifnyvesl, FexH., Hifgberg G., Jensen G., StamvikA. Steroid-N-nitroso-w-haloalkylcarbamates. A new type of antitumor compounds. // In: Characterization and treatment of human tumoures /Ed. Davies W., Harrap K.R./ Amsterdam, 1978. - P. 303 - 307.
25. LamH-J.P., NgP.K.T., GoldenbergG.J., WongCh-M. Estrogen receptor-binding affinity and cytotoxic activity of new estrogen-nitrosourea conjugates in human breast cancer cell lines in vitro. // Cancer Treat. Rep. -1987.-71, № 10. - P. 901 - 906.
26. Leclercq G. New aspects in the development of cytotoxic-linked estrogens for the control of breast neoplasia. // Arch. Geschwulstforsch. - 1981. - 51, № 7. - P. 643 - 649.
27. LoeberJ., MouridsenH.T., Christiansen I.E. etal. A phase III trial comparing prednimustine (LEO 1031) to chlorambucil plus prednisolone in advanced breast cancer. // Cancer. -1983.-52. -P. 1570- 1576.
28. Milku S., ZimelH., Petreal. (Милку С., Цимел X., Петреа И.) Изучение синтеза некоторых новых гормоноцитос-татических веществ и их действия при экспериментальном раке. // Труды VIII Международного противоракового конгресса - M.-JL, 1963. - 6. - Р. 142 - 145.
29. Mouridsen Н. et al. Phase II trial of prednimustine, L-1031, in advanced breast cancer. // Cancer. -1990. - 46. - P. 253 - 255.
30. Nogrady Т., Vagi K.M., Adamkiewicz V.M. N-mustard derivatives of oestrogens. // Canad. J. Chem. -1962. - 40, №
11. - P. 2126-2129.
31. Pasini A., Zunino F. Neue cisplatin - auf dem Weg zu besseren cancerostatica. // Angewandre Chemie. - 1987. -99, №7.-P. 632-641.
32. RanckinE.M., Harve C., KnightR.K., RubensR.D. PhaseII trial of prednimustine as first-line chemotherapy in patient with advanced breast cancer. // Cancer Treat.Rep. -1987. -71.-P. 1107- 1108.
