CC BY
35
УДК 619:636.3:616.9
А.П. КРАСИКОВ \ М.В. ЗАБОЛОТНЫХ \ Н.В. РУДАКОВ 2
1 Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина, Омск 2Омский НИИ природно-очаговых инфекций Роспотребнадзора, Омск
ЭКОЛОГО-ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЛИХОРАДКИ КУ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПО МАТЕРИАЛАМ ИЗУЧЕНИЯ В ОМСКОЙ ОБЛАСТИ
С целью усовершенствования лабораторной диагностики и оценки эпизоотической ситуации по лихорадке Ку крупного рогатого скота усовершенствованы схемы иммунизации животных для получения гипериммунных сывороток и способы сенсибилизации эритроцитов, на основе которых разработаны и испытаны коксиеллезный антигенный эритроцитарный диагностикум для реакции непрямой гемагглютинации и гипериммунные сыворотки для реакции непрямой иммунофлюоресценции. Апробация методов проведена в хозяйствах Омской области. В работе использован способ получения кок-сиеллезной сыворотки с помощью коксиеллезного антигена из вакцинного штамма Coxiella burnetii М-44 путем гипериммунизации кроликов по схеме D. Schimmel в модификации с дополнительным подкожным введением иммуностимулятора левамизола при первых двух внутривенных инъекциях антигена. Также был сконструирован коксиеллезный антигенный эритроцитарный диагностикум для реакции непрямой гемагглютинации. Диагностикум изготавливали по методу Фили в модификации, которая заключается в более щадящем способе воздействия формалина на эритроциты и одновременном обеспечении хорошей фиксации их. В качестве сенситина использовали коксиеллезный антиген также из штамма Coxiella burnetii М-44. Полученная коксиеллезная сыворотка обладает специфичностью, высокой чувствительностью и активностью и не только не уступает стандартной люминесцентной коксиеллезной сыворотке, но и позволяет выявлять больше животных в непрямом варианте флуоресцирующих антител. Разработанный коксиеллезный эритроцитарный диагностикум специфичен и обладает достаточной активностью в РНГА при лихорадке Ку крупного рогатого скота. Его можно применять для обнаружения антител к коксиеллам в сыворотке крови больного скота и носителей. Оценено эпизоотологическое состояние животноводческих хозяйств по лихорадке Ку крупного рогатого скота в многолетней динамике. Результаты проведенных исследований свидетельствуют о широком распространении в Омской области лихорадки Ку крупного рогатого скота в современный период, несмотря на отсутствие официальной регистрации этой инфекции. С учетом длительного неблагополучия хозяйств региона по лихорадке Ку крупного рогатого скота необходимо внедрение эффективной системы эпизоотолого-эпидемиологического надзора и мер борьбы с этой инфекцией на федеральном и региональном уровнях.
Ключевые слова: лихорадка Ку, Coxiella burnetii, крупный рогатый скот, микробиологическая диагностика, эпизоотология.
Введение
Инфекции, общие для человека и животных, на протяжении всей истории человечества были существенной проблемой общественного здоровья. Это, в первую очередь, относится к убиквитарным инфекциям с длительной персистенцией возбудителей в организме животных [1]. Коксиеллез (лихорадка Ку) - недостаточно контролируемая зоонозная инфекция с природной очаговостью, распространенная практически во всех регионах мира, а также более чем в 50 субъектах Российской Федерации [2; 3]. Особенно очевидным становится значение данной проблемы c учетом выраженной резистентности коксиелл в различных условиях существования, многообразных механизмов и путем передачи и возможности образововать длительно существующие очаги лихорадки Ку сельскохозяйственных животных [4].
У сельскохозяйственных животных болезнь имеет энзоотическое течение, протекает часто бессимптомно с выработкой антител и аллергизацией организма [5; 6]. Крупный рогатый скот достаточно чувствителен к лихорадке Ку [7]. В период болезни и продолжительный период после нее животные выделяют коксиеллы Бернета с мочой, калом, слюной,
© Красиков А.П., Заболотных М.В., Рудаков Н.В., 2017
секретом молочных желез и отделяемых слизистых оболочек верхних дыхательных путей. Длительная персистенция возбудителя наблюдается у части животных после перенесенной инфекции.
Болезнь отличается медленным развитием, зачастую со скрытым накоплением специфических антител в крови животных. Коксиеллы, обладая выраженной избирательностью, размножаются в селезенке, легких, лимфатических узлах, молочной железе, матке. Накапливаясь в больших количествах, они вызывают общие изменения септикотоксическо-го характера, раздражение ретикулоэндотелиальной и лимфатической системы, гиперплазию фолликулов селезенки, а также дегенеративные изменения в печени, почках, миокарде, центральной нервной системе, в матке, молочных железах, семенниках и других органах; образование микронекротических фокусов, впоследствии преобразующихся в соединительную ткань. В некоторых случаях образуются абсцессы в паренхиме (молочная железа и региональные лимфатические узлы). Также возможно повторное внедрение возбудителя в кровяное русло из регионарных лимфоузлов [5].
Отсутствие современных данных по региональной эпизоотологии лихорадки Ку является одним из существенных недостатков в ее изучении, а отсутствие лабораторной базы существенно тормозит профилактику и ликвидацию этой болезни. РСК с антигеном из возбудителя фазы I, которая на сегодняшний день получила наиболее частое использование в качестве лабораторного теста для диагностики лихорадки Ку крупного рогатого скота, не всегда дает возможность выявлять все случаи заболевания [5; 6].
Лихорадка Ку повышает восприимчивость скота к вторичным инфекциям, что делает ее течение более тяжелым, в некоторых случаях приводя к летальному исходу. Отсутствие специфической клинической картины и лабораторной верификации диагнозов в значительной мере определяет сложившуюся ситуацию, при которой коксиеллезная инфекция выявляется далеко не в полной мере, оставаясь в большинстве административных территорий вне эпизоотологического контроля. В связи с этим, наряду с развитием лабораторных диагностических тестов, важна оптимизация эпизоотологического надзора за коксиеллезом.
Принимая во внимание особенности течения и патогенез болезни, необходимо проводить своевременную диагностику лихорадки Ку крупного рогатого скота, в том числе в совокупности с другими инфекционными патологиями с помощью современных и рациональных методов.
Объекты и методы
С целью совершенствования лабораторной диагностики и оценки эпизоотической ситуации по лихорадке Ку крупного рогатого скота разработаны и испытаны коксиеллезный антигенный эритроцитарный диагностикум для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) и гипериммунные сыворотки для реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ). Апробация этих методов проведена в хозяйствах Омской области.
Применен способ получения коксиеллезной иммунной сыворотки с помощью антигена из штамма Coxiella burnetii М-44 путем гипериммунизации кроликов по схеме D. Schimmel в модификации [8] с дополнительным подкожным введением иммуностимулятора левамизо-ла при первых двух внутривенных инъекциях антигена. Гипериммунизация кроликов данным методом позволяет получить активную и специфичную в РНИФ антикоксиеллезную сыворотку [9]. Был сконструирован коксиеллезный антигенный эритроцитарный диагности-кум для реакции непрямой гемагглютинации [10]. Диагностикум изготовливали по методу Фили в модификации, которая заключается в более щадящем способе воздействия формалина на эритроциты и одновременном обеспечении хорошей их фиксации. В качестве сенсити-на использовали коксиеллезный антиген также из штамма Coxiella burnetii М-44.
Результаты исследования и обсуждение
Как известно, для постановки серологических реакций необходимо иметь соответствующие специфические антисыворотки и антигены. При этом наиболее эффективным методом гипериммунизации животных является разработанная модификация, суть которой
состоит в дробном внутривенном введении антигена кроликам. Достоинство данного метода состоит в возможности получать антисыворотки с высокими титрами антител. Для сравнения диагностической ценности реакции классического метода флюоресцирующих антител (МФА) с меченой флюорохромом коксиеллезной сывороткой производства НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи и РНИФ с полученной кроличьей гипериммунной сывороткой проведено исследование проб молока и цервико-вагинальной слизи от коров дойного стада, принадлежащих двум хозяйствам Омской области. В результате определено, что полученная кок-сиеллезная сыворотка обладает достаточной специфичностью и чувствительностью, а по активности не только не уступает меченной коксиеллезной сыворотке для МФА, но и позволяет выявлять больше животных с низкой концентрацией антигена в РНИФ. Используя коксиеллезный антиген, можно исследовать сыворотку крови на наличие антител, при этом в РНИФ дополнительно к МФА выявляется на 5 % больше реагирующих животных.
Для выявления антител к коксиеллам сконструирован коксиеллезный эритроцитарный антигенный диагностикум для реакции непрямой гемагглютинации (патент № 2410698, 2011). Полученный диагностикум специфичен и обладает достаточной активностью в РНГА при выявления антител при лихорадке Ку сельскохозяйственных животных.
В производственных условиях для сопоставления диагностической ценности РНГА и РНИФ проведено исследование 681 пробы сывороток крови от коров и телок из 16 хозяйств. В РНГА выявлено 8,6 %, а в РНИФ - 9,8 % положительных результатов. Результаты испытания свидетельствуют, что методы близки по чувствительности, при комплексном исследовании скота позволяют своевременно выявлять больных, носителей и проводить лечебно-профилактические мероприятия при кок-сиеллезной патологии.
Результаты проведенного серологического мониторинга выявили значительное распространение коксиеллеза крупного рогатого скота в хозяйствах Омской области. Из 29 обследованных хозяйств лихорадка Ку выявлена в 17 (59 %), при этом серопозитивность скота составляла от 3 до 65 % (в среднем 10,6 %), что существенно не отличается от результатов исследований в предшествующий период 1997-2006 гг. (9,3 %).
Как показали результаты комплексного лабораторного обследования животных на ряд патогенов, лихорадка Ку крупного рогатого скота часто является микст-инфекцией. Наиболее часто в ассоциации с коксиеллами выявляют хламидии (59 %), листерии (48 %), лептоспиры (44 %), микоплазмы (33 %), а наибольший процент в ассоциации принадлежит хламидиям - 59 %.
Заключение
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о широком распространении в Омской области лихорадки Ку крупного рогатого скота в современный период, несмотря на отсутствие официальной регистрации этой инфекции. Учитывая, что лихорадка Ку в Омской области у людей и сельскохозяйственных животных выявлена еще в 50-е годы прошлого века [2], можно отметить длительную (более 60 лет) энзоотичность региона по данной инфекции. Очаги лихорадки Ку носят выраженный сочетанный характер, однако если ранее наиболее часто сочетались очаги лихорадки Ку и бруцеллеза, то в настоящее время при отсутствии (или резком снижении) распространения бруцеллеза крупного рогатого скота, инфекционный процесс при лихорадке Ку сочетается с хламидиями, микоплазмами, листерия-ми и рядом других зоонозных патогенов с общими механизмами и путями заражения.
Разработанные препараты для выявления антигенов коксиелл в патологических материалах от животных (РНИФ) и серологического обследования на лихорадку Ку (РНГА, РНИФ) обладают достаточной чувствительностью и специфичностью и могут быть использованы для лабораторной верификации диагнозов.
С учетом длительного неблагополучия хозяйств региона по лихорадке Ку крупного рогатого скота необходимо внедрение эффективной системы эпизоотолого-эпидемио-логического надзора и мер борьбы с этой инфекцией на федеральном и региональном уровнях.
A.P. Krasikov M.V. ZabolotnykhN.V. Rudakov 2
LOmsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin, Omsk
2Omsk Research Institute of Natural Focal Infections of Rospotrebnadzor, Omsk
Ecological and epizootological characteristics and laboratory diagnostics of Q-fever
in cattle on the materials of Omsk region
In order to improve the laboratory diagnosis and assessment of the epizootic situation of the bovine Q fever, the animal immunization schemes for obtaining hyperimmune sera and methods for sensitizing red blood cells have been improved, on the basis of which the Coxiella antigenic erythrocyte diagnosticum for the indirect hemagglutination reaction and hyperimmune sera for the indirect immunofluorescence reaction were developed and tested. Approbation of methods was carried out in the farms of the Omsk region. The method used to prepare the Coxiella antiserum with the help of the Coxiella antigen from the Coxiella burnetii strain M-44 was used, by the hyperimmunization of rabbits according to the D. Schimmel scheme in our modification with additional subcutaneous administration of the immunostimulant levamisole with the first two intravenous injections of the antigen. Also, a co-eagle antigenic erythrocyte diagnosticum was constructed for the reaction of indirect haemag-glutination. The diagnostic was prepared according to the Fili method in our modification, which consists in a more gentle method of exposing formalin to erythrocytes and at the same time ensuring their good fixation. As a sensitin, the Coxiella antigen was also used from the strain Coxiella burnetii M-44. The obtained diagnosticum whey possess specificity, high sensitivity and activity and not only is not inferior to the standard luminescent anti-Coxiella serum, but also allows to identify more animals in the indirect version of fluorescent antibodies with a low concentration of antigen in titres 1 : 32-1 : 64. The developed antigenic erythrocyte diagnosticum is specific and has sufficient activity in the RNGA with fever of the Ku of cattle. It can be used to detect antibodies to Coxiella in the blood serum of sick cattle and carriers. The epizootic state of livestock farms for the Q fever of cattle is estimated in many years of dynamics. The results of the conducted studies testify to the wide spread of the Q fever of cattle in the Omsk region in the modern period, despite the absence of official registration of this infection. Given the long-term disadvantage of farms in the region for the Q fever of cattle, it is necessary to introduce an effective system of epizootic-epidemiological surveillance and measures to combat this infection at the federal and regional levels.
Keywords: Q-fever, Coxiella burnetii, cattle, microbiological diagnosis, epizootology.
Список литературы
1. Тимченко Л.Д., Тинькова Е.Л. Гистологические изменения в плаценте овец в условиях длительной персистенции коксиелл Бернета // Ветеринарная патология. № 1. 2008. С. 103-105.
2. Красиков А.П., Рудаков Н.В. Риккет-сиозы, коксиеллез и анаплазмозы человека и животных: монография. Омск : Омский научный вестник, 2013. 280 с.
3. Яковлев Э.А., Борисевич С.В., Попова А.Ю., Ежлова Е.Б., Демина Ю.В. Заболеваемость лихорадкой Ку в Российской Федерации и странах Европы: реалии и проблемы // Проблемы особо опасных инфекций. 2015; 4: 49-54.
4. Marrie T.J., Raoult D. Coxiella burnetii (Q fever). Mandell, Douglas, and Bennett's Principles and Practice of Infectious Diseases. 2014. P. 2208-2216.
5. Госманов Р.Г., Юсупов Р.Х. Совершенствование диагностики лихорадки Ку сельскохозяйственных животных // Диагностика, профилак-тика и методы борьбы с туберкулезом животных : науч. тр. КГВИ. Казань, 1985. С. 57-65.
6. Фрейлихман О.А., Токаревич Н.К., Кондра-шова В.Д. Лабораторные методы диагностики Ку-лихорадки и генотипирование Coxiella burnetii // Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2017. № 2 (19). С. 49-60.
7. BergE.J, Wielders C.C.H., Schneeberger P.M., Wegdam-Blans M. C., Hoek W. Spatial analysis of positive and negative Q fever laboratory results for identify-
References
1. Timchenko L.D., Tin'kova E.L. Gistologicheskie izmenenija v placente ovec v uslovijah dlitelnoj persistencii koksiell Berneta // Veterinarnaja patologija. № 1. 2008. S. 103-105.
2. Krasikov A.P., Rudakov N.V. Rikketsiozy, kok-siellez i anaplazmozy cheloveka i zhivotnyh: monografija. Omsk : Omskij nauchnyj vestnik, 2013. 280 s.
3. Yakovlev E.A., Borisevich S.V., Popova A.Yu., Ezhlova E.B., Demina Yu.V. Zabolevaemost' lihoradkoj Ku v Rossijskoj Federacii i stranah Evropy: realii i prob-lemy // Problemy osobo opasnyh infekcij. 2015. № 4. C. 49-54. '
4. Marrie T.J., Raoult D. Coxiella burnetii (Q fever). Mandell, Douglas, and Bennett's Principles and Practice of Infectious Diseases. 2014. P. 2208-2216.
5. Gosmanov R.G., Jusupov R.H. Sovershenstvo-vanie diagnostiki lihoradki Ku selskohozjajstvennyh zhivotnyh // Diagnostika, profilaktika i metody bor'by s tuberkulezom zhivotnyh : nauch. tr. KGVI. Kazan', 1985. S. 57-65.
6. Frejlihman O.A., Tokarevich N.K., Kondrashova V.D. Laboratornye metody diagnostiki Ku-lihoradki i genotipirovanie Coxiella burnetii // Infekcionnye bolezni: novosti, mneniya, obuchenie. 2017. № 2 (19). S. 49-60.
7. Berg E.J., Wielders C.C.H., Schneeberger P.M., Wegdam-Blans M.C., Hoek W. Spatial analysis of positive and negative Q fever laboratory results for identifying high-and low-risk areas of infection in the Netherlands. Infect. Ecol. Epidemiol. 2013. № 3. C. 1-7.
ing high-and low-risk areas of infection in the Netherlands. Infect. Ecol. Epidemiol. 2013. № 3. С. 1-7.
8. Рудаков Н.В., Николаева Н.Н., Красиков А.П. Актуальные аспекты лабораторной диагностики уроге-нитальных микоплазмозов мелких домашних животных // Актуальные проблемы ветеринарной медицины в современных условиях и пути их разрешения : сб. науч. тр. / ИВМ ОмГАУ. Омск, 2000. С. 132-134.
9. Способ получения сыворотки для диагностики коксиеллеза крупного рогатого скота в реакции непрямой иммунофлюоресценции : пат. № 2413533 / А.П. Красиков, О.И. Наконечный, Н.В. Рудаков. С2 (2011).
10. Способ получения эритроцитарного диагно-стикума для реакции непрямой гемагглютинации при коксиеллезе крупного рогатого скота : пат. № 2410698 С2 (2011)/ А.П. Красиков, О.И. Наконечный.
Красиков Александр Пантелеевич, д-р вет. наук, проф., Омский ГАУ, ap.krasikov@ omgau.org; Заболотных Михаил Васильевич, д-р биол. наук, проф., Омский ГАУ, mv.zabolotnykh@omgau.org; Рудаков Николай Викторович, д-р мед. наук, проф., ОНИИПИ, rickettsia@mail.ru.
8. Rudakov N.V., Nikolaeva N.N., Krasikov A.P. Aktualnye aspekty laboratornoj diagnostiki urogenitalnyh mikoplazmozov melkih domashnih zhivotnyh // Aktualnye problemy veterinarnoj mediciny v sovremennyh uslovijah i puti ih razreshenija : sb. nauch. tr. / IVM OmGAU. Omsk, 2000. S. 132-134.
9. Krasikov A.P., Nakonechnyj O.I., Rudakov N.V. Sposob poluchenija syvorotki dlja diagnostiki koksielleza krupnogo rogatogo skota v reakcii neprjamoj immunofljuorescencii. Patent na izobretenie № 2413533 S2 (2011).
11. Sposob poluchenija jeritrocitarnogo diagnos-tikuma dlja reakcii neprjamoj gemaggljutinacii pri kok-sielleze krupnogo rogatogo skota. Patent na izobretenie № 2410698 S2 (2011) / A.P. Krasikov, O.I. Nakonechnyj .
Krasikov Alexander Panteleevich, Dr. Vet. Scis, Prof, Omsk SAU, ap.krasikov@ omgau.org; Zabolotnykh Mikhail Vasilyevich, Dr. Biol. Scis, Prof, Omsk SAU, mv.zabolotnykh@omgau.org; Rudakov Nikolay Viktorovich, Dr. Med. Scis, Prof, Omsk Research Institute of Natural Focal Infections of Rospotrebnadzor, Omsk, rick-ettsia@mail.ru.
УДК 619:616.9:637.54
Е.Р. НУРАЛИЕВ1, И И. КОЧИШ2
1ТОО «Агрофирма «АКАС», г. Уральск, Западно-Казахстанская область, Республика Казахстан
2Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина, г. Москва, Российская Федерация
БОЛЕЗНЬ МАРЕКА В ПРИУСАДЕБНЫХ ХОЗЯЙСТВАХ - РЕЗЕРВУАР ВОЗБУДИТЕЛЯ ИНФЕКЦИИ ДЛЯ ПРОМЫШЛЕННОГО ПТИЦЕВОДСТВА
Отличительной особенностью вируса болезни Марека является его способность на длительное время сохраняться в хозяине и экосистеме, при этом эволюционировать. Постоянно создаются новые проблемы в вопросах контроля и диагностики заболевания. В период, когда рыночная экономика диктует свои условия, частные предприниматели зачастую пренебрегают проведением противоэпизоотических мероприятий, направленных на борьбу с инфекционными, вирусными и инвазионными болезнями, что приводит к массовой гибели птиц и колоссальным убыткам. Вследствие огромного экономического ущерба, наносимого болезнью Марека и широким распространением вируса, опасности для промышленного птицеводства заноса инфекции вирулентных штаммов, необходима обязательная иммунизация кур, цесарок, фазанов, перепелов и индеек в приусадебных хозяйствах. Цель иммунизации состоит в достижении напряженного и максимально длительного группового иммунитета, препятствующего заносу вирулентных штаммов вируса, их размножению и распространению инфекции. Изложены результаты исследований по изучению эффективности проведения вакцинопрофилактики болезни Марека. Болезнь Марека проявилась в контрольной группе на невакцинированном поголовье со всеми клиническими признаками данной инфекции и патологоанатомическими изменениями. В опытном цехе у вакцинированного поголовья подкожно в области шеи болезнь Марека отсутствовала. Сохранность поголовья выше по сравнению с контрольной группой, отсутствует клиническое проявление различных патологий болезни Марека, повышены продуктивность и резистентность организма птицы. На основании полученных результатов в приусадебных хозяйствах как природном резервуаре инфекции рекомендуем производить вакцинацию против болезни Марека у поголовья птиц подкожно в области шеи.
Ключевые слова: болезнь Марека, вакцинация, кросс, куры, цесарки, фазаны, перепелки, индюки.
© Нуралиев Е.Р., Кочиш И.И., 2017
