CC BY
159Экосистемы, их оптимизация и охрана. 2011. Вып. 4. С. 104-111. УДК 632.937.19+582.475+674.032.475.4+634.0.174.154
ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ТЕРПЕНОВ И ИХ ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ: МЕТОДОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ
Гольдин Е. Б., Гольдина В. Г.
Южный филиал Национального университета биоресурсов и природопользования Украины «Крымский агротехнологическийуниверситет», Симферополь, [email protected]
На основании результатов многолетних исследований проведен анализ биоцидной активности терпеновых соединений и создана методологическая база работы с этими веществами, включающая специальные подходы к их выделению, идентификации и тестированию.
Ключевые слова: терпеновые соединения, биоцидная активность, цианобактерии, микроводоросли, растительноядные организмы, условно патогенные бактерии.
ВВЕДЕНИЕ
Терпеновые соединения (сегодня их насчитывается свыше 55000) - обширная и разнообразная группа ненасыщенных углеводородов (терпенов), в основе которых находится пятиатомная разветвленная углеродная цепь (изопреновая единица), и которые образуют производные, содержащие гетероатомы (терпеноиды). По числу атомов углерода терпеновые соединения делятся на моно-, сескви-, ди-, три-, тетра-и политерпены. Терпены и терпеноиды широко распространены в природе и имеют важное значение для сохранения экологического баланса в межвидовых взаимоотношениях бактерий, цианобактерий, микроводорослей и их симбионтов, макрофитов, простейших, беспозвоночных и растений, а также между различными трофическими уровнями - паразитами, фитофагами, хищниками и жертвами [1, 2]. Терпеновые соединения действуют как средства коммуникации между растениями, растительными сообществами, растениями и насекомыми, оказывают влияние на внутривидовую структуру популяций насекомых (в первую очередь, общественных - муравьев, пчел и термитов) [1, 3, 4]. Будучи вторичными метаболитами микроорганизмов [2, 5], растений [1, 2, 6] и беспозвоночных [7-9], терпеновые соединения принимают участие в формировании ряда жизненных функций организма-продуцента, его межвидовых связей и защитных систем, направленных против врагов, конкурентов или видов-вселенцев. Например, проанализировав межвидовые отношения, существующие в системах «растение-фитофаг», мы выделили ряд групп биологически активных терпеновых соединений - токсины, репелленты, детерренты (антифиданты), стимуляторы и ингибиторы репродуктивной функции, гормоны, ингибиторы роста и развития, антиаттрактанты, пищевые аттрактанты, стимуляторы опыления, половые аттрактанты. При этом терпеновые соединения аналогичного строения могут входить в состав как феромонов тревоги, защитных секретов, половых и пищевых аттрактантов растительноядных организмов, так и вторичных метаболитов
© 2011 Ekosistemy, ikh Optimizatziya i Okhrana, 4: 104-111.
Published by V. I. Vernadskiy Taurida National University, Simferopol, Ukraine.
растений. Ряд соединений известен в качестве агентов, защищающих растения от фитофагов. К ним относятся терпеновые спирты (а-терпинеол, терпен-4-ол), альдегиды (цитраль, цитронеллаль, гераниаль) и т. д. Терпены и терпеноиды характеризуются высоким уровнем видовой специфичности, а в ряде случаев могут служить хемотаксономическими маркерами. Для некоторых растительноядных видов они могут служить репеллентами и детеррентами (антифидантами), например, для колорадского жука [10], для других - токсинами [6], а для определенных видов - аттрактантами [9, 11]. В зависимости от фазы развития растения терпены могут стимулировать питание фитофагов или их отпугивать [12]; аналогичное влияние может оказывать концентрация веществ [12, 13]. Повреждение растений насекомыми стимулирует включение метаболических механизмов, которые способствуют усиленному продуцированию терпенов и формированию защитных систем [14]. Терпеновые соединения могут защищать растения косвенным путем в качестве аттрактантов хищников или паразитоидов, ограничивающих численность и вредоносность фитофагов [15, 16].
Таким образом, благодаря соединениям терпенового ряда и другим вторичным метаболитам, вопреки сложившемуся мнению, происходит не только выбор фитофагом растения-хозяина, но и отбор растительноядных организмов самим растением.
Применение терпенов для ограничения численности целевых организмов весьма интересно и перспективно. Однако их практическое использование тормозится отсутствием стабильных и экономически выгодных источников первичного сырья. Так, для метаболитов насекомых характерно кратковременное действие, причем некоторые их них бифункциональны. Непосредственное использование растений-продуцентов терпеновых соединений затруднено из-за изменчивости содержания, состава и свойств вторичных метаболитов в зависимости от ряда факторов, а выделение этих веществ из растительного сырья многостадийно, требует значительных затрат и сложного аппаратурного оформления. Терпеновые вещества, полученные путем органического синтеза, не свободны от посторонних примесей и могут представлять опасность для широкого круга живых организмов (энтомофагов, пчел, многих гидробионтов и т. д.) и окружающей среды в целом, также реально формирование резистентных рас вредителей.
В качестве альтернативы нами разработана концепция получения терпеновых соединений путем микробного синтеза. В частности, для этой цели могут быть использованы цианобактерии, т. к. в составе их метаболитов обнаружены разнообразные группы терпенов - углеводороды, спирты, эфиры, альдегиды и т. д. [5]. Некоторые из них идентифицированы у насекомых и растений и проявляют высокую биологическую активность в природе. Изучение материалов, отражающих избирательное действие терпеновых соединений во взаимоотношениях между организмами, показывает необходимость исследований аналогичных веществ среди метаболитов микроорганизмов (включая цианобактерии и микроводоросли), растений и беспозвоночных. Основная цель работ в этой области заключается в поиске терпеновых комплексов с высокой биологической активностью,
проявляемой по отношению к растительноядным организмам, и разработке практических аспектов их использования в системах защиты растений [17, 18]. На основании результатов многолетних исследований биологической/биоцидной активности терпеновых соединений нами разработана методологическая база работы с этими веществами, включающая специальные подходы к их выделению, идентификации и тестированию. Для получения исходного сырья - необходимых объемов биомассы цианобактерий и микроводорослей - мы предложили ряд технологий, основанных на добыче природного материала, непрерывном культивировании и использовании отходов переработки биомассы, образующихся в процессе различных производств (например, белково-витаминного концентрата).
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Терпеновые фракции и их отдельные компоненты могут быть выделены из природного микробного, а также растительного или животного материала. Биомассу высушивают лиофильным или тепловым (37°С) способами; такой режим обработки оптимален для сохранения естественного состава терпеновых веществ. Затем следует измельчение сухого материала при помощи лабораторных мельниц и его просеивание через сита диаметром 0,063-0,1 мм. Выделение терпеновых фракций из порошка проводят путем водно-паровой отгонки по методам Гинзберга и Далматова, что способствует получению соединений в чистом виде. Для достижения более полного извлечения фракции используют экстракцию гексаном в аппарате Сокслета.
Качественный и количественный состав компонентов определяют методами газо-жидкостной хроматографии. При низкой концентрации терпеновых соединений в водно-паровом дистилляте проводят его дополнительное концентрирование путем экстракции диэтиловым эфиром с последующим упариванием на водяной бане.
В качестве тест-объектов рекомендуется выбирать широко распространенные, доступные и принятые в практике лабораторных исследований виды различного эволюционного уровня. Например, использование коллекционных культур условно патогенных бактерий и лабораторной популяции мухи-дрозофилы Drosophila melanogaster Meigen (дикий тип) обеспечивает быстрое получение результатов, отражающих уровень биоцидности, который включает проявления антибактериального, детеррентного (антифидантного), энтомоцидного, метатоксического и других ингибирующих эффектов. Желательно также проведение комплексных исследований, ежедневно дающих полную информацию о состоянии тест-объектов. (для бактерий - рост колоний на твердых средах и сохранение жизнеспособности, а для насекомых - поведение, питание, рост, метаморфоз, выживаемость и плодовитость). Биоцидную активность летучих фракций определяют путем их добавления в питательную среду для насекомых. Затем мухами-дрозофилами (группой из четырех самцов и четырех самок в каждой из повторностей в вариантах опытов) заселяют поверхность среды. Для оценки наиболее активных фракций и отдельных компонентов личиночные фазы растительноядных насекомых, собранные в природных и природно-антропогенных
экосистемах, рассаживают в стеклянные сосуды, по 10-15 особей в каждый. В качестве корма используют наиболее типичные растения-хозяева, на листья которых при помощи лабораторного опрыскивателя наносят тестируемые соединения, после чего размещают подопытных насекомых; каждый вариант эксперимента включает от трех до пяти повторностей. Наблюдения за питанием, поведением, метаморфозом и выживаемостью насекомых проводят ежедневно. В контрольных вариантах корм обрабатывается водой или остается без обработки.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Обоснованность предложенного направления подтверждается фактическими данными, полученными в лабораторных, полевых и производственных экспериментах.
Бактериальные тест-объекты. Исследование роли терпеновых соединений в проявлении антибактериальной активности лабораторной культуры цианобактерии Microcystis aeruginosa Kutz. emend. Elenk. показало, что наиболее выраженным бактериостатическим действием на Staphylococcus aureus обладает терпеновая фракция в целом, а также эвгенол. У других бактериальных культур (Proteus mirabilis, Escherichia coli и Vibrio paracholerae) ингибирование роста было значительно слабее (цитронеллол в вариантах с E. coli и V. paracholerae), гераниол, эвгенол и фракция в целом по отношению к V. paracholerae) или же вообще не наблюдалось [19].
Растительноядные насекомые. Природные популяции цианобактерий (доминирующий вид M. aeruginosa - 98,0%), содержащие терпеновые соединения, ингибировали питание, рост, метаморфоз и размножение растительноядных насекомых - колорадского жука Leptinotarsa decemlineata Say, американской белой бабочки Hyphantria cunea Drury, непарного шелкопряда Lymantria dispar L., плодовой моли Hyponomeuta padella L., златогузки Euproctis chrysorrhae L. и кольчатого коконопряда Malacosoma neustria L. Личиночные фазы насекомых, особенно на стадии младших возрастов, были наиболее чувствительны к действию альгометаболитов, и на протяжении этого периода развития большая часть подопытных особей (70,0-100,0%) погибала. Смертность последующих личиночных стадий, куколок и имаго была не столь высока, но в этих случаях наблюдался метатоксический эффект. Например, в природных популяциях колорадского жука происходило снижение общей численности насекомых из-за смертности особей, непосредственно подвергшихся действию цианобактерий, на всех фазах развития (89,3-97,4%) и отдаленного эффекта на второго поколения, который снижал численность популяции на 22,8-62,7% (в контрольном варианте без обработки этот показатель возрос на 717,3%). Биоцидность терпеновых соединений, экстрагированных из биомассы цианобактерий, проявилась при скармливании обработанных ими листьев клена ясенелистного Acer negundo L. гусеницам американской белой бабочки второго возраста. Это приводило к гибели 51,7-76,0% насекомых на 10 сутки; 68,3-91,3% - на 15-е; и 81,7-96,0% на 20-е сутки. В составе фракции были обнаружены линалоол, линалилацетат, терпинеол и Р-фенилэтанол. Из них наиболее активна смесь линалоола и линалилацетата (1:1), от которой на
пятые сутки опыта насекомые полностью погибали. Гистологическое исследование пораженных гусениц выявило дистрофические и некробиотические изменения в жировом теле. У других терпеновых соединений отмечен метатоксический эффект, проявившийся в явлении последействия: выжившие гусеницы уступают в весе контрольным, а личиночно-куколочный и куколочно-имагинальный метаморфозы нарушены. При этом выделенные терпеновые соединения не оказывали отрицательного влияния на колорадского жука, что свидетельствует об избирательном характере их действия. Однако липидно-пигментный комплекс ("альгопаста"), экстрагированный из этого же альгологического материала и содержащий ряд терпеновых соединений (линалоол, ß-фенилэтанол, терпинеол, гераниол и линалилацетат), в лабораторных и полевых условиях вызывал в течение 72 часов гибель 5S,4-75,6% личинок колорадского жука и 57,7-75,5% гусениц американской белой бабочки второго возраста (на пятые сутки - S4,4-1GG,G%) [17, 1S]. Первичные экспериментальные препараты в применяемых концентрациях и дозах безвредны для растений, энтомофагов (жужелиц и кокцинелл) и теплокровных животных. Их биологическая активность сопоставима с действием известных микробных инсектицидов, а в некоторых случаях использование этих средств предпочтительнее. Кроме того, необходимо обратить внимание на поиск и выделение активных веществ с биоцидными свойствами, продуцируемых другими видами цианобактерий и микроводорослей.
Некоторые аспекты биологической активности терпенов представляют особый интерес с точки зрения защиты растений и нуждаются в обсуждении. Эти соединения выполняют разнообразные функции и вызывают ряд реакций со стороны насекомых, которые носят видоспецифичный характер. Речь идет о таких веществах как цитраль, цитронеллол, эвгенол, а-терпинеол, ß-фенилэтанол, лимонен, а-пинен и т. д.
В составе защитных секретов и феромонов тревоги Hymenoptera и некоторых Coleoptera, включая мирмекофилов, присутствуют цитраль, цитронеллаль, различные спирты, в т.ч. линалоол и др. [4]. Биоцидные свойства линалоола подтверждены в экспериментах на непарном шелкопряде [2G]. Эфирное масло цитронеллы, содержащее гераниол, цитронеллол, цитроналлаль, борнеол и другие терпены, отпугивает Tribolium castaneum Hbst., Callosobruchus chinensis L. and Periplaneta americana (L.) [21]. Цитронеллол известен как основная часть (S5,G%) защитного секрета муравья Lasius umbratus Nyl. [22] и как репеллент для некоторых видов комаров. При этом некоторые терпеновые соединения (линалоол, линалилацетат, гераниол, эвгенол и др.) ведут себя как аттрактанты по отношению к ряду членистоногих [9, 12], в т.ч. и полезных насекомых. Например, а-терпинеол и ß-фенилэтанол [11, 23] известны в этом качестве для тутового шелкопряда Bombyx mori L., а гераниол - для медоносной пчелы Apis mellifera L. [24]. Линалоол, нераль и гераниаль были выделены из мандибулярных желез коллетовых пчел [25]. Результаты экспериментальных работ с терпеновыми соединениями свидетельствуют об избирательном характере их действия. Так, терпеновая фракция, выделенная из хвои сосны, проявила антифидантные и энтомоцидные свойства по отношению к американской белой бабочке, но повела себя как
комплекс токсичных веществ для колорадского жука [6]. С другой стороны, эти компоненты могут быть безвредными для тутового шелкопряда и медоносной пчелы [11], что свидетельствует о возможности успешного использования терпенов в биологической защите растений. Прежде всего, такая возможность привлекательна для районов интенсивного шелководства, где применение химических и бактериальных инсектицидов затруднено и нежелательно.
Перспективность направления подтверждается созданием в последние годы новых препаратов для защиты растений. Например, биостат 60% к.э., изготовленный на основе терпеновых соединений растительного происхождения из кубовых остатков и фракций кориандрового масла, по данным Всероссийского НИИ биологической защиты растений, обладает бактерицидной и фунгицидной активностью по отношению к корневым гнилям озимой пшеницы, серой гнили и милдью винограда. Также он характеризуется инсектоакарицидным действием по отношению к широкому кругу фитофагов - чешуекрылым, колорадскому жуку и т. д. (при этом препарат является аттрактантом для энтомофагов колорадского жука из сем. Coccinellidae, Pentatomidae, Chrysopidae). Биостат также характеризуется нематоцидным эффектом. Препарат быстро разлагается в окружающей среде, не накапливаясь в почве, воде, растениях и не оказывая отрицательного влияния на позвоночных и полезных насекомых. В Институте биологии Карельского исследовательского центра РАН экспериментально доказана нематоцидная активность терпеновых соединений коры хвойных деревьев при их внесении в почву для борьбы с Globodera rostochiensis (Wollenweber, 1923) Behrens, 1975, причем параллельно происходит стимулирование развития картофеля.
В других опытах применение эмульсии а-терпинеола на томатах и огурцах подавляло развитие бахчевой и персиковой тлей на 90-95,0%, а паутинного клеща -на 60-70,0%. Водная эмульсия кориандрового масла на 97,0% угнетала большую картофельную тлю, а некоторые его фракции. проявляли фунгицидную активность (курчавость персика, парша семечковых) [26]. Также хорошо зарекомендовали себя системы, основанные на комплексном действии бактериальных инсектицидов и терпеновых соединений [27].
ВЫВОДЫ
1. Терпеновые соединения характеризуются сложным и многосторонним влиянием на на основные жизненные функции живых организмов различного эволюционного уровня.
2. Терпеновые соединения обладают высоком уровнем биоцидной активности по отношению к ряду видов условно патогенных бактерий и растительноядных организмов, проявляя при этом избирательное действие.
3. Наиболее перспективным направлением в области получения терпеновых соединений для практического использования в современных условиях следует признать микробный синтез или использование биомассы цианобактерий.
4. Полученный фактический материал может быть основой для планирования дальнейших комплексных работ, включая экспериментальное oбoснoвание
биохимических и токсико-биологических аспектов механизма действия терпеновых
метаболитов на различные живые системы.
Список литературы
1. Biochemical aspects of plant and animal coevolution / [Ed. by J.D. Harborne]. - New York: Academic Press, 1978. - 435 p.
2. Algal chemical ecology / [Ed. by C. Amsler]. - Berlin-London: Springer, 2008. - 314 p.
3. Prestwich G.D. Interspecific variations of diterpene composition of Cubitermes soldier defence secretions / G.D. Prestwich // Journal of Chemical Ecology. - 1984. - Vol. 10, N 8. - P. 1219-1231.
4. Листов М.В. Химическая защита у членистоногих и изменчивость организмов / М.В. Листов. -Л.: Наука, 1989. - 157 с.
5. Сакевич А.И. Экзометаболиты пресноводных водорослей / А.И. Сакевич. - К.: Наукова думка, 1985. - 197 с.
6. Гольдин Е.Б., Гольдина В.Г. Эфирные масла сосны обыкновенной и защита растений от вредных насекомых / Е.Б. Гольдин, В.Г. Гольдина // С. -х. науки: Науч. тр. Крым. гос. аграрного ун-та. -Вып. 75. -Симферополь, 2002. - С. 50-53.
7. Labdane diterpenes from the marine pulmonate gastropod Trimusculus peruvianus / [A. San-Martin, E. Quezada, P. Soto et al.] // Can. J. Chem.-Rev. Can. Chim. - 1996. - Vol. 74, N 12. - P. 2471-2475
8. A new meroditerpenoid dimer from an undescribed Philippine marine sponge of the genus Strongylophora / [M. Balbin-Oliveros, R.A. Edrada, P. Proksch et al.] // Journal of Natural Products. -1998. - Vol. 61, N 7. - P. 948-952
9. Plant terpenes affect intensity and temporal parameters of pheromone detection in a moth / [V. Party, C. Hanot, I. Said, Renou M. ] // Chemical Senses. - 2009. - Vol. 34, N 9. - P. 763-774.
10. Panasiuk O. Response of Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata (Say), to volatile components of tansy, Tanacetum vulgare / O. Panasiuk // Journal of Chemical Ecology. - 1984. - Vol. 10, N 9. - P. 1325-1333.
11. Hamamura Y. The substances that control the feeding behaviour and the growth of the silkworm Bombyx mori L. / Y. Hamamura // Control of insect behaviour by natural products. - New York -London: Academic Press, 1970. - P. 55-80
12. Behavioural responses of Bemisia tabaci B-biotype to three host plants and their volatiles / [F-Q. Cao, W-X. Liu, Z-N. Fan et al.] // Acta Entomologica Sinica. - 2008. - Vol. 51, N. 8. - P. 830-838.
13. Fan J.T. Influences of host volatiles on feeding behaviour of the Japanese pine sawyer, Monochamus alternatus. / J.T. Fan, J.H. Sun // Journal of Applied Entomology. - 2006. - Vol. 130, N 4. -P. 238-244.
14. Real-time monitoring of herbivore induced volatile emissions in the field / [A. Schaub, J.D. Blande, M. Graus et al.] // Physiologia Plantarum. - 2010. - Vol. 138, N 2. - P. 123-133.
15. Ali J.G. Subterranean herbivore-induced volatiles released by citrus roots upon feeding by Diaprepes abbreviatus recruit entomopathogenic nematodes / [J.G. Ali, H.T. Alborn, L.L. Stelinski] // Journal of Chemical Ecology. - 2010. - Vol. 36, N 4. - P. 361-368.
16. Mumm R. Variation in natural plant products and the attraction of bodyguards involved in indirect plant defense / R. Mumm, M. Dicke // Can. J. Zool. - 2010. - Vol. 88, N 7. - P. 628-667.
17. Gol'din E.B. Insecticidal activity of harmful cyanobacteria: the role of terpene substances / E.B. Gol'din, V.G. Gol'dina // Harmful Algal Blooms 2000 (Eds. G.M. Hallegraeff et al.). - Paris: IOC of UNESCO, 2000. - P. 403-406.
18. Гольдин Е.Б. Терпены природного происхождения и проблемы защиты растений / Е.Б. Гольдин, В.Г. Гольдина // С. -х. науки: Науч. тр. Крым. гос. аграрного ун-та. - Вып. 76. - Симферополь, 2004. - С. 174-178.
19. Гольдин Е.Б. Антибактериальная активность альгологически чистых культур цианобактерий и микроводорослей / Е.Б. Гольдин // Мгкробюл. журн. - 2003. - 65, № 4. - С. 68-76.
20. Biological activity of linalool / [T. Stevic, O. Tomasi, M. Kostic et al.] // 3rd Conference on Medicinal and Aromatic Plants of Southeast European Countries. - Nitra, 2004. - P. 72-73.
21. Saraswathi L. Repellent effect of cytronella oil on certain insects / L. Saraswathi, R.A. Purushotham // Pesticides. - 1987. - Vol. 21, N 7. - P. 23-24.
22. Blum M.S. Chemical releasers of social behaviour. II. Terpenes in the mandibular glands of Lasius umbratus / M.S. Blum et al. // Annals of the Entomological Society of America. - 1968. - Vol. 61, N 6. - P. 1354-1359.
23. Molecular basis of female-specific odorant responses in Bombyx mori / [A.R. Anderson, K.W. Wanner, S.C. Trowell et al.] // Insect Biochemistry and Molecular Biology. - 2009. - Vol. 39, N 3. -P. 189-197.
24. Koltermann R. Periodicity in the activity and learning performance of the honeybee / R. Koltermann // Experimental analysis of insect behaviour. - Berlin - Heidelberg - New York, 1974. - P. 218-227
25. Hefetz A. Linalool, neral and geranial in the mandibular glands of Colletes bees - an aggregation pheromone / A. Hefetz, S.W. Batra, M.S. Blum // Experientia. - 1979. - Vol. 35, N 3. - P. 319-320.
26. Надыкта В. Д. Биозащита растений / В. Д. Надыкта, В.Я. Исмаилов, В.Г. Коваленков // Защита и карантин растений. - 1999. - № 12. - С. 21-22.
27. Гримальский Г.М. Комбинированное действие бактериальных препаратов и терпеноидов / Г.М. Гримальский, Г.М. Емельянчик // Защита растений. -1984. -№ 5. - С. 29.
Гольдш €. Б., Гольдша В. Г. Еколого-бшлопчне значення терпешв та ix практичне використання: методолопчш аспекти // Екосистеми, 1х оптимiзацiя та охорона. ймферополь: ТНУ, 2011. Вип. 4. С. 104-111.
На пiдставi результата багаторiчних.дослiджень запроваджено аналiзу бюцидно! активност терпенових сполук та створено методолопчно! бази роботи з цими речовинами, що вмтстить спещальш тдходи до 1х видшення, вдентифжаци та тестування
Ключовi слова: терпеновi сполуки, бюцид на активнiсть, цiанобактерii, мшроводоросп, рослиноiднi органiзми, умовно патогенi бактерп.
Gol'din E. B., Gol'dina V. G. Ecological and biological importance of terpenes and their practical using: methodological aspects // Optimization and Protection of Ecosystems. Simferopol: TNU, 2011. Iss. 4. P. 104-111.
Biocidal activity of terpene compounds was analysed on the basis of results of long-term investigations. The methodological foundation of terpene research was designed, including their isolation, identification and testing.
Key words: terpene compounds, biocidal activity, cyanobacteria, microalgae, herbivorous organisms, conditionally pathogenic bacteria.
Поступила в редакцию 05.08.2011 г.
