Эффективность различных методов этиологической диагностики у часто болеющих детей с хронической Эпштейна-Барр и цитомегаловирусной инфекциями

Бабаченко И.В.; Левина А.С.; Седенко О.В.; Шарипова Е.В.; Власюк В.В.; Мурина Е.А.; Осипова З.А.

under the Siberian Branch of the Russian Academy of Medical Sciences, Research Institute of Mother and Child Health Care, City of Khabarovsk.

Taking into account continuing spread of anemia in pregnant women, high sensitivity of the red blood system to the environment peculiarities, including trace element content changes, some specific

features of erythrocytes transformation in women in gestation and non-gestation periods were investigated. Sensitive coefficients of erythrocytes membranes for heavy metals influence were detected.

Key words: pregnant women, anemia, erythrocytes, transformation, heavy metals.

ДИАГНОСТИКА

И.В. Бабаченко, А.С. Левина, О.В. Седенко, Е.В. Шарипова, В.В. Власюк, Е.А. Мурина, З.А. Осипова

ЭФФЕКТИВНОСТЬ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ЭТИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ У ЧАСТО БОЛЕЮЩИХ ДЕТЕЙ С ХРОНИЧЕСКОЙ ЭПШТЕЙНА-БАРР И ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИЯМИ

ФГУ "НИИДИ Росздрава", Санкт-Петербург

Герпесвирусы (ГВ) широко распространены в человеческой популяции, пожизненно персисти-руют в организме человека и способны поражать практически все органы и системы хозяина, вызывая латентную, острую или хроническую формы инфекции.

Герпесвирусные инфекции (ГВИ) относят к оппортунистическим инфекциям, которые клинически проявляются только в условиях первичного или вторичного иммунодефицита. С другой стороны, инфицирование ГВ предопределяет формирование вторичного иммунодефицитного состояния вследствие их персистенции и размножения в иммунокомпетентных клетках, что способствует хроническому рецидивирующему течению этих заболеваний [3].

Неспецифичность клинических проявлений хронической формы Эпштейна-Барр вирусной (ВЭБ) и цитомегаловирусной (ЦМВ) инфекций у детей, схожесть с другими персистирующими инфекциями, в том числе, хламидийной, иерси-ниозной, частое наличие микст-инфекции не позволяют провести их дифференциальную диагностику без помощи современных лабораторных методов этиологической диагностики.

В современные стандарты этиологической диагностики герпесвирусных инфекций включены серологические методы; иммуноферментный анализ (ИФА); молекулярно-биологическая - полимеразная цепная реакция (ПЦР).

ГВ обладают механизмами "ускользания" от иммунной системы, позволяющими им длительно персистировать в организме, формируя нестерильный иммунитет [2]. Сохраняющиеся в тече-

ние всей жизни, иногда в довольно высоких титрах, вируснейтрализующие антитела хотя и препятствуют распространению вируса, сдерживая его репликацию, но не предупреждают возникновения рецидивов. Таким образом, специфический гуморальный ответ, формирующийся при ГВИ, отражает инфицированность организма патогеном, а не защищенность от него. Выявление антител класса IgG не характеризует активности вирусной инфекции. В результате развивающейся иммуносупрессии, что часто наблюдается при длительной персистенции возбудителей, антитела к вирусам (^М и IgG) могут не выявляться или определяться в невысоких титрах, характерных для латентной инфекции. Это снижает значимость серологической диагностики при хронических ГВИ инфекциях, так как не позволяет дифференцировать латентную и хроническую инфекции, прогнозировать течение заболевания, определять тактику терапии больных детей.

Широко используемый молекулярно-биологический метод, основанный на выявлении амп-лифицированных фрагментов ДНК в полимеразной цепной реакции ПЦР, недостаточно эффективен при хроническом течении инфекции, когда возбудитель располагается преимущественно внутриклеточно. Частота выделения ДНК вирусов в биологических средах (кровь, слюна, моча) составляет от 11% до 62% в зависимости от тяжести заболевания [5].

Перспективным для диагностики ГВИ является иммуноцитохимический (ИТТХ) метод, позволяющий определять антигены ГВ во взвеси лимфоцитов крови или в эпителиальных клетках

носоглотки. ИЦХ метод обладает высокой специфичностью, дает возможность визуализировать антигенные комплексы герпесвирусных белков со специфическими моноклональными антителами в клетках-мишенях больных, определять активность инфекции по количеству пораженных клеток и массивности их поражения [1, 4, 6]. Однако метод не имеет широкого внедрения в практику и мало используется отечественными специалистами для диагностики герпесвирусных инфекций, в том числе, у часто болеющих детей в Санкт-Петербурге.

Цель работы: оценить информативность различных методов диагностики при хроническом течении ВЭБ и ЦМВ инфекции у детей.

Материалы и методы. Под наблюдением находились 100 детей от 1 года 2 месяцев до 14 лет (средний возраст 5,4±0,7), страдавших частыми и длительно протекавшими респираторными заболевания в течение длительного срока: от 6 месяцев до 9 лет (в среднем 30,3 месяцев). Клиническими критериями включения в группу наблюдения были симптомы хронического инфекционного моно-нуклеоза: затрудненное носовое дыхание, боли в горле, лимфопролиферативный синдром, астения, постоянные или периодические подъемы температуры до субфебрильных или фебрильных цифр. Все дети многократно получали антибиотикотера-пию и лечение иммуномодулирующими препаратами. Диагноз хронической ГВИ подтверждали с помощью лабораторных данных: специфических изменений гемограммы (лимфоцитоз, моноцитоз, наличие атипичных мононуклеаров), выявления специфических антител к ЦМВ и/или ВЭБ класса ^ М, а также класса IgG в высоких титрах при одновременном обнаружении антигена вируса в крови и носоглоточных мазках-отпечатках при иммуноцитохимическом исследовании или методом полимеразной цепной реакции.

При проведении этиологической диагностики использовали ИЦХ, ИФА, ПЦР.

ИЦХ (иммуноцитохимический или иммуно-пероксидазный) метод использовали в качестве диагностического экспресс метода исследования лимфоцитов периферической крови или мазков из носоглотки, учитывая тропизм ГВ к клеткам крови и цилиндрическому эпителию. В исследуемом материале выявляли антигены LMP-1 ВЭБ и рр 65 ЦМВ с использованием специфических моноклональных антител.

ПЦР (полимеразную цепную реакцию) проводили согласно инструкции в условиях специализированной лаборатории, при этом в качестве материала для исследования использовали кровь

и слюну пациентов. При ЦМВИ в ряде случаев исследовали мочу. Наличие положительной реакции свидетельствовало об активности хронической инфекции.

ИФА (иммуноферментный анализ) проводили с помощью стандартных тест-систем ЗАО "Век-тор-Бест" (Новосибирск) согласно инструкции. Определяли антитела класса ^ М к капсидному антигену (УСА), ^ G к раннему антигену (ЕА) и ядерному (нуклеарному) антигену ^А) ВЭБ; ^ М и ^ G к ЦМВ.

Результаты исследования и их обсуждение. По возрастному составу преобладали дети дошкольного возраста (72%). Среди детей дошкольного возраста преобладали мальчики (75%). Среди школьников распределение по половому составу было равномерным.

У двух третьих из числа наблюдаемых детей не диагностировали острого инфекционного мо-нонуклеоза (ИМ) в анамнезе или в период наблюдения. Среди проявлений хронической ВЭБИ или ЦМВИ у детей дошкольного возраста наиболее часто регистрировали хронический аденоидит (64%), у детей старшего возраста - лимфаденопа-тию (54%). У трети детей вне зависимости от возраста отмечали гипертрофию небных миндалин 2-3 степени. Гепатомегалию чаще наблюдали у детей младше 7 лет (28%). У половины пациентов отмечали подьемы температуры до субфебриль-ных (30%) или до фебрильных цифр (20%). На выраженную астению жаловались в основном дети старшего возраста (32%).

У всех наблюдаемых пациентов с хронической ВЭБИ и ЦМВИ регистрировали рецидивирующие заболевания дыхательных путей. Наиболее часто отмечали хроническую патологию глоточной и небных миндалин (аденоидиты (56%), рецидивирующие ангины (23%) или хронический тонзиллит (13%), реже - рецидивирующие отиты (17%), острый стенозирующий ларинготрахеит (7%), синуиты (8%), бронхиты и пневмонии (19%).

У большинства часто болеющих детей выявляли одновременное инфицирование несколькими вирусами. Сопоставление эффективности различных лабораторных методов показало, что у 83% больных выявлены маркеры ВЭБ-инфекции, у 75%

- ЦМВ-инфекции, причем у 58% регистрировали маркеры как ВЭБ, так и ЦМВ инфекции, у 25% -моно ВЭБ инфекции, у 17% - моно ЦМВ. Выявление активной ВЭБ-инфекции на фоне инфицирования ЦМВ без признаков активации (только ^ G к ЦМВ) отмечено у 19% обследованных.

При серологической верификации ВЭБИ антитела ^М к УСА были положительными у 23%,

ДО к ЕА-EBV - у 69% и ДО к NA-EBV у 81% детей. У 32% больных ДНК ВЭБ выявлена в ПЦР при исследовании крови, у 83% - ПЦР слюны. Методом ИЦХ антигены ВЭБ выявляли в 67% случаев в лимфоцитах крови, а в 43% - носоглоточных мазках-отпечатках. Антитела к ЦМВ класса ^М выявлены у 37% детей, класса IgG - у 59%, из них одновременно М и G - у 21%. При исследовании крови методом ПЦР ни у одного ребенка не выявили ДНК ЦМВ, в то же время в слюне реакция была положительной в 47% случаев, в моче

- 38%. Методом ИЦХ антиген ЦМВ в крови выявляли в 3 раза реже чем в носоглоточных мазках-отпечатках (13% против 38%, р<0,05).

Вывод. Таким образом, диагностическая значимость различных лабораторных методов этиологической диагностики у часто болеющих детей сопоставима. Для оптимизации этиологической диагностики необходимо комплексное обследование пациентов методами, позволяющими выявлять как антигены и ДНК вирусов в разных биологических средах (кровь, слюна, мазки-отпечатки), так и антитела к ним. Для выявления активности хронической ВЭБИ оптимально исследование крови методами ИФА, ПЦР и ИЦХ. Для повышения эффективности диагностики перспективно дополнительное исследование слюны в ПЦР и носоглоточных мазков-отпечатков ИЦХ методом. Для оценки активности хронической ЦМВИ ПЦР и ИЦХ крови мало информативны, большую диагностическую значимость имеют ИЦХ носоглоточных мазках-отпечатках, ПЦР слюны, серологическое исследование крови.

ЛИТЕРАТУРА

1. Александрова Н.В. Способ диагностики инфекции, вызванной вирусом Эпштейна-Барр / Н.В. Александрова, Р.А. Насыров, В.В. Иванова, О.В.Родионова // Патент на изобретение №°2002103970 от 19.02.2005.

2. ИсаковВ.А. Герпесвирусные инфекции человека:

руководство для врачей / В.А. Исаков, Е.И. Архипова, Д.В. Исаков. СПб.: СпецЛит, 2006. 302 с.

3. Серебряная Н.Б. Новые подходы к терапии герпесвирусной инфекции / Н.Б.Серебряная, В.Н. Егорова. Санкт-Петербург: Новая альтернативная полиграфия, 2007. 28 с.

4. CartunRW. Immunohistochemistry of infectious diseases // The Journal of Histotechnology. 1995. Vol.18.-№3. Р.195-202.

5. Kanegane H. Infectious mononucleosis as a disease of early childhood inJapan caused by primary Epstein-Barr virus infection / H. Kanegane, С. Kanegane, А Yachie // Acta Paediatr. Jpn. 1997. Vol.39, №2. P.166-171.

6. Krugmann J. Longer failure-free survival interval of Epstein-Barr virus-associated classical Hodgkin's lymphoma: A single-institution study / J Krugmann, A Tzankov, A Gschwendtner // Mod Pathol Vol. 16.P.566-573, 2003.

I.V.Babachenko, A.S.Levine, O. V. Sedenko,

E.V. Sharipov, V.V. Vlasyuk,E.A.Murina, Z.A. Osipova EFFECTIVENESS OF VARIOUS METHODS OF DIAGNOSTIC ETIOLOGICAL AMONG SOME ILL CHILDREN WITH CHRONIC EPSTEIN-BARR AND TSITOMEGALOVIRUSNOY INFECTIONS.

FGU "MIDIHealth",St.Petersburg

The study was conducted to assess the informativeness of different diagnostic methods in chronic during Epstein-Barr virus (VEBI) and tsitomegalovirusnoy infection (TSMVI) in children. The authors obtained results that led to the conclusion that the diagnostic significance of various laboratory methods for etiologic diagnosis of the ill children are often comparable. To optimize the etiological diagnosis should be a comprehensive study of patients in ways that identify as antigens and DNA viruses in different biological media (blood, saliva, swabs, fingerprints) and antibodies to it. To identify the activity of chronic study blood VEBI best methods ELISA, PCR and ITSH. To increase the efficiency of diagnosis promising a further study by PCR in saliva and nosoglotochnyh smears, fingerprints ITSH method. To assess the activity of chronic TSMVI PCR and blood ITSH little informative, great diagnostic significance have ITSH nosoglotochnyh-fingerprint smears, saliva samples by PCR, serological study of blood.

Key words: chronic Epstein-Barr virus infection, chronic cytomegalovirus infection, diagnosis.

УДК 616.36-002.2:615.24/.342-009.16

Д.К. Васильева, Л.А.Алексеева, Л.Г.Горячева, Т.В.Бессонова ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВ НИЗКОЙ И СРЕДНЕЙ МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССЫ КРОВИ У ДЕТЕЙ КАК ЛАБОРАТОРНОГО КРИТЕРИЯ СТЕПЕНИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТАХ В И С

ФГУ "НИИ детских инфекций", Санкт-Петербург

Парентеральные вирусные гепатиты во всем мире по-прежнему остаются одной из ведущих медико-социальных проблем. В связи с успешной вакцинацией против гепатита В заболевае-

мость этим гепатитом заметно снижается, но на первый план выдвигаются хронические гепатиты (ХГ), как основные заболевания печени с их неблагоприятным исходом в цирроз и гепатокар-

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Бабаченко И. В., Левина А. С., Седенко О. В., Шарипова Е. В., Власюк В. В.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Бабаченко И. В., Левина А. С., Седенко О. В., Шарипова Е. В., Власюк В. В.