CC BY
6
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Циркулирующая опухолевая ДНК характеризуется генетическими изменениями (набор определенных мутаций, микросателлитная нестабильность, хромосомные перестройки), которые присутствуют только в опухолевой ткани, что позволяет отличить ее от нормальной сцДНК. В данной работе мы попытались дать относительную количественную оценку ДНК опухоли в тотальной сцДНК.
Цель работы. Оценить диагностические возможности исследования сцДНКупациентов с онкогематологическими заболеваниями.
Материалы и методы. В исследование включены 12 пациентов ФГБУ «НМИЦ гематологии»: 4 — с первичной медиасти-нальной B-клеточной лимфомой (ПМВКЛ), б — с диффузной В-крупноклеточной лимфомой (ДБККЛ) и 2 — с множественной миеломой (ММ) с плазмоцитомой (П). Плазму получали из цельной крови; сцДНК выделяли коммерческим набором (Ouagen, Германия) согласно протоколу производителя. STR-профили оценивали с помощью ПЦР с панелью праймеров к 19 тет-рануклеотидным STR-маркерам и маркеру амелогенина COrDIS Plus (ООО «Гордиз», Россия). Фрагментный анализ ПЦР-продуктов выполняли на генетическом анализаторе «Нанофор-05» (СИНТОЛ). Анализ STR-профилей выполняли с помощью программы GeneMapper v.4 (Applied Biosystems, США), сравнивая биоптаты опухолей, сцДНК и контрольную ДНК из бук-кального эпителия пациентов, ПК, КМ. B-клеточную клональность в биопта-те и сцДНК у пациентов с ПМВКЛ и ДВККЛ исследовали методом фраг-ментного анализа (праймеры Biomed-2). Мутации в гене MYD88 определяли методом АС-ПЦР, в генах К RAS, NRAS при ММ — секвенированием по Сэнгеру.
Результаты и обсуждение. У всех пациентов, кроме одного (пациент № 4), в биоптатах выявлены потеря гетерози-готности (LOH, loss of heterozygosity) или появление нового аллеля со вставкой +4 нуклеотида (EMAST, elevated
microsatellite alteration at selected tetranucleotides) (табл.). У б пациентов эти события нашли только в биоптатах (пациенты № 1, 2, 5, 7, 8, 11), у 3 аллельная нагрузка по найденным мутациям была ниже, чем в биоптате (пациенты № б, 9, 12). У 2 пациентов с ПМВКЛ (№ 3, 4) нагрузка мутантных аллелей в сцДНК была выше, чем в биоптате, причем в одном случае мутации присутствовали только в сцДНК (пациент № 4). У пациента № 10 (ДВККЛ) STR-профили биоптата и сцДНК не совпали.
Заключение. В большинстве случаев из-за невысокого содержания опухолевой ДНК в сцДНК для молекулярного анализа необходимы высокочувствительные методы, исключающие конкурентную ПЦР. Однако иногда количество ДНК опухоли в сцДНК превышает содержание ее в биоптате. Несовпадение мутационных профилей биоптата опухоли и сцДНК можетуказывать на существование в организме разных опухолевых клонов или второй опухоли.
Таблица. Распределение STR-локусов с потерей гетерозиготности (LOH) и нестабильностью (EMAST)
F s х >
¡1 Ii
1 бноптат Vk+
сцДНК Vk+ H/11
2 бноптат IgHt LOH39% LOH28%
сцДНК IgHt н/и н/и
3 бноптат lgH+ L0H18% LOH22% EMAST30%
■ оуШК IfiH- LOH29% LÜH3fi% EMÄST52%
4 бноптат lg№ н/и н/и
■ сцДНК IRH- LOffi9% LOH43%
5 бноптат lgH+ L0H31% LOH36% ШН50% LOH46%
сцДНК lgHt н/и н/и н/и н/и
6 бноптат lgHt LOH33% LOH78%
сцДНК lgH+ L0H17% LOH29%
7 бноптат IgHt LOH77% EMAST72%
сцДНК IgHt н/и н/и
8 бноптат lgH+ LOH28%
сцДНК lgH+ н/и
9 бноптат IgHf MYD88 1001 ü LOH83% LOH83% LOH72%
сцДНК igH+ MYD88 68?i ; LOH37% LOH43% LOH49%
10 бноптат igH+ H/H EMAST43% н/и н/и LOH35%
сцДНК IgH+ LOH48% н/и LOH36% LOH39% н/и
11 бноптат NRASQ61E L0H91% LOH97%
сцДНК мало и/и н/и
12 бноптат LOH84% EMAST47% LOH83» i, LOH77% ШН80%
сцДНК LOH32% EMAST28% н/и H/H L0H4Q%
Примечание: н/и — неинформативно; определяемый маркер совпадает с маркером в контрольной ДНК.
Панкрашкина М. М.1, Виноградова О. Ю.1,2,3, Черников М. В.4, Шихбабаева Д. И.1, Кочкарева Ю. Б.1, Муха Л. А.1, Перова В. П.4,
Птушкин В. В.123
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПЕРЕКЛЮЧЕНИЯ АГОНИСТОВ РЕЦЕПТОРОВ ТРОМБОПОЭТИНОВ В СЛУЧАЯХ РЕЗИСТЕНТНОСТИ
ИММУННОЙ ТРОМБОЦИТОПЕНИИ
'Московский городской гематологический центр ГБУЗ «Городская клиническая больница им. С.П. Боткина Департамента здравоохранения города Москвы», 2ФГБУ «НМИЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева» Минздрава России, 3ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Минздрава России, кафедра гематологии, онкологии и лучевой терапии, 4Научно-исследовательский институт организации здравоохранения и медицинского менеджмента Департамента здравоохранения города Москвы
Введение. Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, или первичная иммунная тромбоцитопения (ИТП) — орфанное заболевание, сопровождающееся тромбоцитопенией. Одним из новых и перспективных методов лечения. ИТП в последние годы стало использование агонистов рецепторов тромбопоэтина (аТПОр). Учитывая различия в механизме действия препаратов, проводятся попытки переключения с одного препарата на другой. Получены данные о том, что в случаях первоначальной или развившейся резистентности к одному из препаратов, а также непереносимости (аТПОр), возможно переключение с одного на другой. Однако данные немногочисленных публикаций об эффективности данного подхода при резистентности ИТП разнятся от 50 до 93%.
Цель работы. Оценить возможность переключения с одного аТПОр на другой путем оценки достижения тромбоцитарного ответа при смене терапии.
Материалы и методы. Терапия аТПОр была проведена 397 пациентам с диагнозом первичной ИТП, получившим 1 или более линий терапии. Ромиплостим получили 293 пациента, эльтромбопаг — 104 больных. В группе, получавшей терапию ромиплостимом, тромбоцитарного ответа не достиг 51 (17%) пациент. Повторное назначение
(аТПОр) — эльтромбопага в этой группе было выполненоу 24 (47%) пациентов. В группе, получавшей терапию эльтромбопагом, тромбоцитарного ответа не достигли 37 (35%) пациентов, из них 32 (86%) получили в дальнейшем повторное назначение (аТПОр) — ромиплостимом. Среди них в группе повторного назначения ромиплостима лиц мужского пола было 13 (40%), женского — 19 (60%), медиана возраста на момент начала терапии аТПОр составила 55 (18-81) лет, медиана уровня тромбоцитов на момент начала терапии аТПОр составила 24 (1-47)х109 /л, число линий до начала терапии аТПОр: 1 у 23 (72%) пациентов, 2 и более линий терапии — 9 (28%) пациентов. Среди них в группе повторного назначения эльтромбопага лиц мужского пола было 10 (42%), женского — 14 (58%), медиана возраста на момент начала терапии аТПОр составила 57 (29-77) лет, медианауровня тромбоцитов на момент начала терапии аТПОр составила 21 (5-43)х109 /л, число линий до начала терапии аТПОр: 1 у 15 (63%) пациентов, 2 и более линий терапии — 9 (37%) пациентов. Медиана длительности терапии при применении ромиплостима составила 116 (4—368), эльтромбопага — 26 (2—252) недель соответственно. Характеристики пациентов представлены в таблице. Обе группы оказались сопоставимы между собой поуказанным параметрам.
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2022; ТОМ 67; №2 |
Результаты и обсуждение. Из 32 пациентов, переключенных с эльтромбопага на ромиплостим, тромбоцитарного ответа достигли 23 (72%) больных. Полный ответ на лечение получен у 14 (44%) больных и частичный ответ у 9 (28%) пациентов. Из 24 пациентов, переключенных с ромиплостима на эльтромбопаг,
тромбоцитарный ответ достигнут у 12 (50%) больных, при этом полный ответ — у 10 (42%) пациентов, 2 (8%) пациента имели частичный ответ на лечение. Результаты терапии после смены аТПОр представлены на рис.
Заключение. Исследование показало возможность достижения тромбоцитарного ответа и его сохранение у пациентов с ИТП в случае неудачи терапии (аТПОр) при предшествующей резистентности к одной или более линиям терапии.
Таблица. Характеристики пациентов
Показатель Ромиплостим-2 (п=32) Элтромбопаг-2 (п=24)
Мужчины, п (%) / Женщины, п (%) 13 (40%) / 19 (60%) 10 (42%) / 14 (58%)
Медиана возраста начала терапии аТПОр, лет 55 (18 - 81) 57(29-77)
Медиана Р1.Т на начало терапии аТПОр, х109 /л 24 (1 - 47) 21 (5 - 43)
Число линий терапии ИТП до начала аТПОр, п (%) 1 2 и более 23 (72%) 9 (28%) 15 (63%) 9 (37%)
Спленэктомия, п (%) 4 (17%) 6 (25%)
Петинати Н. А.1, Дризе Н. И.1, Арапиди Г. П.2, Шендер В. О.2, Лагарькова М. А.2, Кузьмина Л. А.1, Паровичникова Е. Н.1, | Савченко В. Г.1
РАЗЛИЧИЯ В СЕКРЕТОМЕ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК ЭФФЕКТИВНЫХ И НЕЭФФЕКТИВНЫХ ПРИ ПРОФИЛАКТИКЕ ОСТРОЙ РЕАКЦИИ ТРАНСПЛАНТАТ ПРОТИВ ХОЗЯИНА
'ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, 2ФГБУ «Федеральный научно-клинический центр физико-химической медицины
Федерального медико-биологического агентства»
Введение. Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки (МСК) здоровых доноров применялись для профилактики развития острой реакции трансплантат против хозяина (РТПХ) после алло-генной трансплантации костного мозга. Введение МСК пациентам было не всегда эффективно, у некоторых пациентов развилась острая
РТПХ.
Цель работы. Изучение различий в секретируемых белках между эффективными и неэффективными в профилактике РТПХ образцами МСК.
Материалы и методы. Исследовали секретом вводимых пациентам МСК. Было исследовано 2 образца МСК, после введения которых у пациентов развилась острая РТПХ, и 5 образцов, после введения ко -торых этого не произошло. Для анализа МСК культивировали в среде аМЕМ с 10% эмбриональной телячьей сыворотки. На 2-м пассаже конфлюентные культуры МСК отмывали 5 раз фосфатным буфером, а затем переводили на бессывороточную среду RPMI1640 без фенолового красного на 24 часа; супернатанты исследовали для определения секретируемых этими клетками белков. Анализ секретома проводили с использованием масс-спектрометра TripleTOF 5600+ с источником ионов NanoSpray III, соединенных с NanoLC Ultra 2D+ nano-HPLC System. Для характеристики идентифицированных белков использовали он-лайн-сервис STRING-db и базу данных GO (Gene ontology).
Результаты и обсуждение. Всего было проанализировано 1965 белков. Анализ секретома исследованных образцов МСК выявил существенные различия между эффективными и неэффективными образцами. Было выявлено 109 белков, секреция которых наблюдалась только в эффективных образцах МСК (рис. А). Обращает на себя внимание отсутствие в неэффективных образцах секреции таких важных для иммуномо-дулирующей функции
МСК белков как РБСРРА, ТОТа, ЭРР2 и РВ№. Кроме того, 307 белков слабее секретировались неэффективными МСК (рис. Б). Важнейшими из них представляются белки рибосом, факторы трансляции и особенно белки, связанные с образованием экзосом, а также белки межклеточных взаимодействий и фокальных контактов. К 323 белкам, сильнее секретируемым в неэффективных образцах, относятся белки, сопровождающие ответ на ТСРЬ, т.е. участвующие в регуляции состояния покоя стволовых кроветворных клеток и некоторых иммунологических реакциях (рис. В). Оказалось, что 460 белков секретируются только неэффективными МСК (рис. Г). Подавляющее большинство этих белков ассоциировано с мембран-связанными органеллами. Кроме того, были выявлены белки экзосом, которые не секретировались эффективными МСК. Особо интересно, что неэффективные МСК секретируют группу белков, связанных с ацетилированием, вероятно, участвующих в эпигенетической регуляции.
Заключение. Эффективные и неэффективные МСК, использованные для профилактики острой реакции трансплантат против хозяина, значительно различаются по уровню и составу секретируемых белков.
Работа была выполнена при поддержке гранта РФФИ 19-29-04023.
