CC BY
14УДК: 616.314.17-002+616.155.194.8]:616.155.3
ДИСФУНКЦИЯ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПАРОДОНТА У БОЛЬНЫХ ЖЕЛЕЗОДЕФИЦИТНОЙ АНЕМИЕЙ
Славинский И. А., Каде А. Х.
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Кубанский государственный
медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 350063, ул. Седина, 4, Краснодар, Россия.
Для корреспонденции: Славинский Иван Александрович, аспирант кафедры пропедевтики и профилактики
стоматологических заболеваний ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России. E-mail: [email protected]
For correspondence: Ivan A. Slavinsky, PhD student of the Department of propaedeutics stomatology and preventive maintenance of
stomatologic diseases of the Kuban State Medical University. E-mail: [email protected]
Information about authors:
Slavinsky I.A., http://orcid.org/0000-0003-3554-1416
Kade A.Kh., http://orcid.org/0000-0003-2787-3808
РЕЗЮМЕ
Цитохимическое исследование с количественной оценкой результатов посредством компьютерного анализа клеточного изображения выявило дисфункцию нейтрофильных лейкоцитов у пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта в сочетании с железодефицитной анемией. Эта дисфункция обусловлена угнетением железосодержащих компонентов антибактериальных систем нейтрофилов -миелопероксидазы и НАДФН-оксидазы. Стойкая ремиссия у больных возникает после комплексного гематологического лечения препаратами железа с поддерживающей пародонтологической терапией.
Ключевые слова: воспалительные заболевания пародонта, железодефицитная анемия, нейтрофильные лейкоциты, миелопероксидаза, НАДФН-оксидаза.
SUMMARY
DYSFUNCTION OF NEUTROPHILIC LEUKOCYTES AT PARODONT INFLAMMATORY DISEASES IN
PATIENTS WITH IRON DEFICIENCY ANEMIA
Slavinsky I. A., Kade A. Kh.
Kuban State Medical University. Krasnodar, Russia.
Cytochemical research with quantitative assessment of the results by computer cell image analysis revealed the dysfunction of neutrophils in patients with parodont inflammatory diseases combined with iron deficiency anemia. This dysfunction is due to inhibition of iron-containing components of the neutrophils' antimicrobial systems - myeloperoxidase and NADPH-oxidase. Stable remission in patients develops after comprehensive hematologic treatment with iron drugs and supportive periodontal therapy.
Key words: parodont inflammatory diseases, iron deficiency anemia, neutrophilic leukocytes, myeloperoxidase, NADPH-oxidase.
Воспалительные заболевания пародонта имеют широкое распространение. Это наиболее частая причина потери зубов вследствие деструктивного процесса с развитием стойких нарушений функции зубочелюстной системы [1] и с появлением в ротовой полости очагов хронической инфекции [2]. Болезни пародонта трудно поддаются лечению, для них характерен длительный период реабилитации. Патология пародонта нередко сочетается с заболеваниями других систем организма. Значительно повышается сложность лечения при наличии у больных железодефицитной анемии.
Нейтрофильные лейкоциты принимают участие в поддержании иммунного гомеостаза. Стимулирующие сигналы вызывают активацию этих клеток, которая проявляется усилением метаболизма, миграцией из сосудистого русла и образованием активных форм кислорода [3]. Радикалы кислорода путём экзоцитоза могут поступать в окружающие
ткани и вызывать их повреждение. При заболеваниях пародонта механизмы повреждения волокнистых структур периодонтальной связки связаны главным образом с коллагеназой и эластазой, которые выделяются во внеклеточный матрикс нейтрофилами воспалительного инфильтрата [4].
Железодефицитная анемия (ЖДА) - широко распространённое заболевание, при котором у больных развивается не только анемический, но и сидеропенический синдром [5]. Поскольку железо входит в состав ферментных систем, обеспечивающих тканевое дыхание и реакции иммунитета, у больных снижается резистентность к инфекцион-но-воспалительным заболеваниям [6, 7]. Выявлены нарушения в иммунной системе, приводящие к развитию вторичного иммунодефицита [8, 9]. Имеются немногочисленные данные о нарушении фагоцитарной и бактерицидной функции нейтро-фильных лейкоцитов в условиях дефицита железа
[10]. Тем не менее, до настоящего времени не расшифрованы те патогенетические механизмы, которые лежат в основе существенного увеличения тяжести течения и низкой эффективности лечения воспалительных болезней пародонта у больных с ЖДА.
Оценка функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов крови направлена на получение новых данных о состоянии этих клеток при дефиците в организме железа, выявление особенностей патогенеза и уточнение тактики лечения воспалительных заболеваний па-родонта у пациентов с ЖДА.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
В статье представлены результаты клинико-цитохимического мониторинга состояния тканей пародонта и нейтрофильных лейкоцитов крови у стоматологических больных, которые находились под диспансерным наблюдением по поводу хронического катарального гингивита и хронического генерализованного пародонтита.
Среди 73 пациентов с хроническим катаральным гингивитом 39 человек имели нормальный уровень гемоглобина в крови, а 34 страдали ЖДА. Из 35 больных хроническим генерализованным пародонтитом нормальный уровень гемоглобина крови был у 19 человек, а ЖДА - у 16. Для сравнения цитохимических показателей исследованы нейтрофильные лейкоциты 42 здоровых людей без признаков патологии пародонта - контрольная группа (КГ).
Лечение пациентов включало в себя удаление зубных отложений, проведение местной противовоспалительной, антимикробной и кератопласти-ческой терапии. При необходимости проводили ортопедическое и хирургическое лечение. Диагноз железодефицитной анемии подтверждался гематологическими анализами, а также определением уровня сывороточного железа, ферритина, насыщения трансферрина железом. Больные с ЖДА проходили курс лечения у врачей-гематологов и терапевтов. Эффективность пародонтологическо-го лечения определяли на основании результатов визуально-инструментальной оценки состояния десны, мониторинга индексной оценки состояния пародонта, рентгенологической оценки состояния альвеолярной кости.
Для цитохимического определение активности миелопероксидазы использовали дианизиди-новый метод [11]. Активность НАДФН-оксидазы выявляли с помощью НСТ-теста [12]. Определение активности щелочной фосфатазы производили реакцией азосочетания [13, 14]. Компьютерная морфометрия произведена с помощью системы для анализа клеточного изображения, которая состоит из микроскопа «Бимам Р-13» с микрофотонасадкой
МФН-11-1, цветной телевизионной камеры стандарта S-VHS, которая имеет матрицу 0,5 дюйма и кодирующий мозаичный фильтр. Выходной сигнал видеокамеры передавали в компьютер через фреймграббер FlyVideo. Ввод, обработку и автоматический анализ клеточного изображения производили посредством компьютерной программы «CitoW» (Москва). Для суммарной характеристики результатов компьютерной морфометрии продукта цитохимических реакций в нейтрофильных лейкоцитах применен вычисляемый интегральный цитохимический показатель (ИЦП) - произведение оптической плотности цветного продукта реакции и его суммарной площади в цитоплазме [11, 14]. Этот показатель отражает общую активность фермента в измеренных компьютером нейтрофильных лейкоцитах.
Результаты компьютерного анализы клеточного изображения подвергнуты статистической обработке с помощью программы «Microsoft Excel». Вариационные ряды измерений преобразовывали в сводные электронные таблицы и производили консолидацию этих таблиц. Выполняли расчет среднего арифметического значения (X), средней ошибки среднего арифметического (m), стандартного отклонения (а), объема выборки (n). Для определения статистической достоверности различий между средними величинами двух выборок вычисляли критерий Стьюдента (t) с показателем достоверности различия (р).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Хронический катаральный гингивит (таблица 1). У пациентов без ЖДА до лечения ИЦП активности миелопероксидазы снижен в 1,4 раза по сравнению с КГ (p<0,001). Активность НАДФН-оксидазы увеличена в 1,4 раза (p<0,001), щелочной фосфатазы - повышена в 2,6 раза (p<0,001). Через 1 месяц после начала лечения визуально-инструментальная оценка состояния тканей пародонта выявила признаки ремиссии. Показатели функционально-метаболической активности нейтро-филов крови больных подверглись существенным изменениям в направлении их нормализации. Активность миелопероксидазы увеличилась в 1,4 раза (p<0,001), в то время как активность НАДФН-оксидазы снизилась в 1,4 раза (p<0,001). Эти показатели не имеют статистически значимых отличий от таковых КГ (р>0,05). Активность щелочной фосфатазы снизилась в 2,5 раза (p<0,001) и приблизилась к нормальному значению (p<0,01).
У пациентов, страдающих ЖДА, до лечения активность миелопероксидазы в нейтрофильных лейкоцитах снижена в 2,1 раза по сравнению с ней-трофилами здоровых людей (p<0,001). Активность НАДФН-оксидазы снижена в 2,3 раза (p<0,001), а щелочной фосфатазы - повышена в 2,2 раза
(р<0,001). При сравнении показателей с таковыми у больных без ЖДА обращают на себя внимание следующие особенности. При наличии ЖДА снижение активности миелопероксидазы более выра-
жено. Активность НАДФН-оксидазы снижена, а не повышена (2,67±0,05 против 8,71±0,11 отн. ед.). Активность щелочной фосфатазы повышена в обоих случаях.
Таблица 1.
Активность ферментов нейтрофильных лейкоцитов крови у больных хроническим катаральным
гингивитом
Показатель п Миелопероксидаза НАДФН-оксидаза Щелочная фосфатаза
Х± т р от КГ Х± т р от КГ Х± т р от КГ
Здоровые люди (КГ) 42 5,34±0,06 6,17±0,07 3,06±0,04
ХКГ без ЖДА до лечения 39 3,81±0,05 < 0,001 8,71±0,11 < 0,001 7,99±0,09 < 0,001
ХКГ без ЖДА после лечения 39 5,29±0,06 > 0,05 6,25±0,08 > 0,05 3,24±0,02 < 0,01
ХКГ + ЖДА до лечения 34 2,60±0,03 < 0,001 2,67±0,05 < 0,001 6,77±0,06 < 0,001
ХКГ + ЖДА после лечения 34 3,17±0,04 < 0,001 2,91±0,06 < 0,001 3,37±0,06 > 0,05
ХКГ + ЖДА после лечения с железом 29 5,26±0,06 > 0,05 5,68±0,09 > 0,05 3,17±0,06 > 0,05
Примечание. ХКГ - хронический катаральный гингивит. ЖДА - железодефицитная анемия. КГ - контрольная группа.
При осмотре через 1 месяц после начала лечения отсутствие ремиссии наблюдалось у большинства больных этой группы. Показатели активности железосодержащих ферментов нейтрофилов крови в процессе лечения не претерпели существенных изменений. Таким образом, лечение не только не сопровождалось нормализацией активности железосодержащих ферментов (миелопероксидазы и НАДФН-оксидазы), но даже не появилось сколько-нибудь выраженной тенденции к их нормализации.
Через 4 месяца после начала лечения препаратами железа у всех пациентов наблюдалась ремиссия гингивита. В нейтрофильных лейкоцитах крови произошла нормализация всех исследованных показателей функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов. ИЦП миелопероксидазы, НАДФН-оксидазы и щелочной фосфатазы не обнаружили статистически значимых отличий от нейтрофилов лиц КГ (р>0,05). Представленные данные свидетельствуют о том, что стандартное стоматологическое лечение у больных хроническим катаральным гингивитом, страдающих ЖДА, в большинстве случаев оказывается неэффективным. Добиться стойкой ремиссии у таких пациентов можно только при сочетании стоматологического и гематологического лечения с применением препаратов железа.
Хронический генерализованный пародонтит
(таблица 2). У пациентов без ЖДА до лечения выявлены глубокие изменения показателей функционально-метаболической активности нейтрофиль-ных лейкоцитов крови. Активность миелоперокси-дазы значительно снижена - в 4,9 раза (р<0,001) по сравнению с нейтрофилами здоровых людей. Активность НАДФН-оксидазы повышена в 2,5 раза (р<0,001). Активность щелочной фосфатазы в 4,1 раза (р<0,001) выше, чем в КГ.
Через 2 месяца после начала лечения из 19 больных у 18 наблюдалась ремиссия. Её отсутствие у 1 пациента было вызвано плохим уровнем гигиены полости рта, патологией прикуса и отказом от прохождения повторного курса лечения. В нейтро-фильных лейкоцитах периферической крови больных активность маркеров функционально-метаболической активности обнаружила выраженную тенденцию к нормализации. В процессе лечения активность миелопероксидазы возросла в 3,3 раза (р<0,001), активность НАДФН-оксидазы снизилась в 2,0 раза (р<0,001), активность щелочной фосфата-зы уменьшилась в 2,2 раза (р<0,001). Тем не менее, полной нормализации показателей мы не наблюдали. Активность всех ферментов статистически значимо отличалась от КГ.
Таблица 2.
Активность ферментов нейтрофильных лейкоцитов крови у больных хроническим генерализованным
пародонтитом
Показатель п Миелопероксидаза НАДФН-оксидаза Щелочная фосфатаза
Х± т р от КГ Х+ т р от КГ Х+ т р от КГ
Здоровые люди (КГ) 42 5,34+0,06 6,17+0,07 3,06+0,04
ХГП без ЖДА до лечения 19 1,09+0,01 < 0,001 15,40+0,25 < 0,001 12,49+0,27 < 0,001
ХГП без ЖДА после лечения 19 3,59+0,04 < 0,01 7,76+0,18 < 0,01 5,88+0,14 < 0,01
ХГП + ЖДА до лечения 16 0,39+0,01 < 0,001 2,35+0,08 < 0,001 12,05+0,24 < 0,001
ХГП + ЖДА после лечения 16 0,45+0,01 < 0,001 2,66+0,08 < 0,001 5,70+0,15 < 0,01
ХГП + ЖДА после лечения с железом 15 3,83+0,04 < 0,01 7,23+0,12 < 0,01 5,84+0,15 < 0,01
Примечание. ХГП - хронический генерализованный пародонтит. ЖДА - железодефицитная анемия. КГ - контрольная группа.
У больных с ЖДА до лечения нейтрофильные лейкоциты крови обнаружили значительно изменённый уровень показателей своей функционально-метаболической активности. Активность мие-лопероксидазы была резко снижена - в 13,7 раза (р<0,001). Уровень активности НАДФН-оксидазы понизился в 2,6 раза (р<0,001). Активность щелочной фосфатазы увеличилась в 3,9 раза (р<0,001). Обследование после 2 недель пародонтологиче-ского лечения показало отсутствие эффекта даже на фоне улучшения уровня гигиены полости рта. Осмотр через 2 месяца также обнаружил отсутствие признаков ремиссии. Пациенты предъявляли жалобы на сохраняющуюся кровоточивость десен, подвижность и гиперестезию зубов, боли в деснах. Сохранялись пародонтальные карманы глубиной от 2 до 5,5 мм, в ряде случаев с признаками абсцедирования, а также подвижность зубов 1-2 степени у больных пародонтитом средней степени тяжести. В нейтрофилах крови больных за время лечения активность железосодержащих ферментов (миелопероксидазы и НАДФН-оксидазы) не подверглась статистически значимым изменениям.
Все больные хроническим генерализованным пародонтитом легкой и средней степени тяжести в сочетании с ЖДА были направлены на лечение у врачей-терапевтов и гематологов с назначением препаратов железа. Этим пациентам также был проведен курс поддерживающей пародонтологи-ческой терапии. При осмотре через 4 месяца после начала лечения препаратами железа у большинства
пациентов этой группы наблюдалась ремиссия хронического генерализованного пародонтита. У больных практически отсутствовала кровоточивость при зондировании зубодесневого желобка и подвижность зубов; десна была бледно-розового цвета, физиологической конфигурации, плотно прилегала к зубам; пародонтальные карманы не определяли или они были небольшой глубины (2,5-3,5 мм) и без гнойного отделяемого.
В крови больных после лечения препаратами железа выявлены выраженные изменения показателей функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов в направлении их нормализации. При сравнении с данными, полученными до начала лечения, установлено, что активность миелопероксидазы возросла в 9,8 раза (р<0,001), активность НАДФН-оксидазы также увеличилась в 3,1 раза (р<0,001), активность щелочной фосфа-тазы снизилась в 2,1 раза (р<0,001). По сравнению с показателями КГ активность миелопероксидазы оставалась сниженной в 1,4 раза (р<0,01), активность НАДФН-оксидазы была снижена в 1,2 раза (р<0,01), активность щелочной фосфатазы - повышена в 1,9 раза (р<0,01). Эти различия были аналогичны тем, которые установлены после лечения больных пародонтитом без ЖДА.
ОБСУЖДЕНИЕ
Результаты клинико-цитохимического исследования в динамике воспалительных заболеваний пародонта указывают на высокий уровень функционально-метаболической активности ней-
трофильных лейкоцитов в крови больных, что значительно более выражено при хроническом генерализованном пародонтите, чем при хроническом катаральном гингивите. Эти изменения свидетельствуют об избыточной активации ней-трофилов в системном кровотоке, приводящей к их дегрануляции ещё до выхода в ткани паро-донта. Цитохимические показатели изменяются параллельно с клиническими индексами оценки состояния тканей пародонта.
С наступлением ремиссии после пародонтоло-гического лечения нормализация индексов оценки состояния тканей пародонта (PMA, PBI, CPITN и OHI-S) происходит вместе с оптимизацией функционально-метаболической активности нейтрофи-лов крови. У пациентов с хроническим катаральным гингивитом все показатели возвращаются к нормальным значениям. При хроническом генерализованном пародонтите возникает выраженная тенденция к их нормализации.
Почему течение воспалительных заболеваний пародонта существенно утяжеляется ЖДА, а стоматологическое лечение становится практически бесперспективным? Известно, что нейтро-фильные лейкоциты несут в своей зернистости компоненты антибактериальных систем, которые содержат железо и зависимы от его содержания в организме. Это, прежде всего, миелопероксидаз-ная и НАДФН-оксидазная системы нейтрофилов [15, 16]. ЖДА вызывает глубокую депрессию ней-трофильных лейкоцитов, что значительно более выражено при хроническом генерализованном пародонтите, чем при хроническом катаральном гингивите. В нейтрофилах больных активность миелопероксидазы снижается. Активность НАДФН-оксидазы обнаруживает инверсию своего изменения - снижение вместо повышения, имеющего место у пациентов без ЖДА. Активность не содержащей железо щелочной фосфата-зы при обоих заболеваниях остаётся повышенной.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
У большинства пациентов, страдающих ЖДА, стандартное стоматологическое лечение не привело к нормализации индексов оценки состояния тканей пародонта. И при хроническом катаральном гингивите, и при хроническом генерализованном пародонтите показатели активности мие-лопероксидазы и НАДФН-оксидазы нейтрофилов крови оставались на низком уровне, не обнаруживая статистически значимых изменений в процессе лечения. Стойкая ремиссия после комплексного лечения с применением препаратов железа сопровождалась повышением активности миелоперок-сидазы и НАДФН-оксидазы до уровня показателей, характерных для больных без ЖДА.
Таким образом, у пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта в сочетании с ЖДА выявлена глубокая дисфункция нейтрофильных лейкоцитов, которая обусловлена угнетением железосодержащих компонентов их антибактериальных систем - миелопероксидазы и НАДФН-оксидазы. По-видимому, этот дефект функционирования нейтрофилов крови оказывает существенное влияние на тяжесть поражения тканей пародонта и приводит к неэффективности пародонтологиче-ского лечения.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Yoshimura K., Miyamoto Y., Kamijo R. Mechanisms for bone resorption induced by periodontal pathogens. Clin. Calcium. 2012;22(11):1685-1692. doi: CliCa121116851692.
2. Макеева И.М., Даурова Ф.Ю., Бякова С.Ф., Ипполитов Е.В., Гостев М.С., Поликушина А.О., Шубин Е.А. Чувствительность микробных ассоциаций экссудата пародонтального кармана и одон-тогенного очага к антибактериальным препаратам. Стоматология. 2016;95(3):26-30.
3. Borregaard N. Neutrophils, from marrow to microbes. Immunity. 2010;33(5):657-670. doi: 10.1016/j. immuni.2010.11.011.
4. Sima C., Glogauer M. Neutrophil Dysfunction and Host Susceptibility to Periodontal Inflammation: Current State of Knowledge. Current Oral Health Reports. 2014;2:95-103. DOI: 10.1007/s40496-014-0015-x.
5. Means R.T. Iron deficiency anemia. Hematology. 2013;18(5):305-306. doi: 10.1179/102453321 3Z.000000000197.
6. Усова Н. Ю., Балабина Н. М. Факторы риска развития железодефицитной анемии. Сибирский медицинский журнал. 2011;103(4):7-10.
7. Chakraborty S., Tewari S., Sharma RK., Narula S.C., Ghalaut P.S., Ghalaut V. Impact of iron deficiency anemia on chronic periodontitis and superoxide dismutase activity: a cross-sectional study. J. Periodontal. Implant. Sci. 2014;44(2):57-64. doi:10.5051/ jpis.2014.44.2.57.
8. Short M.W., Domagalski J.E. Iron deficiency anemia: evaluation and management. Am. Fam. Physician. 2013;87(2):98-104.
9. Das I., Saha K., Mukhopadhyay D., Roy S., Raychaudhuri G., Chatterjee M., Mitra P.K. Impact of iron deficiency anemia on cell-mediated and humoral immunity in children: A case control study. J. Nat. Sci. Biol. Med. 2014;5(1):158-163. doi:10.4103/0976-9668.127317.
10. Yazdani M., Merrikhi A., Beni Z.N., Barada-ran A., Soleimani N., Musazade H. Association
between neutrophil geletinase-associated lipocalin and iron deficiency anemia in children on chronic dialysis. J. Res. Med. Sci. 2014;19(7):624-628.
11. Славинский А.А., Никитина Г.В. Компьютерный анализ изображения нейтрофильных лейкоцитов: миелопероксидаза. Клиническая лабораторная диагностика. 2000;1:21-24.
12. Parvaneh N., Teimourian S. Effectiveness of nitroblue tetrazolium (NBT) test. Arch. Iran. Med. 2008;11(1):129-130.
13. Шубич М.Г. Цитохимическое определение щелочной фосфатазы лейкоцитов. Лабораторное дело. 1965;1:10-14.
14. Славинский А.А., Никитина Г.В. Компьютерный анализ изображения нейтрофильных лейкоцитов: щелочная фосфатаза. Клиническая лабораторная диагностика. 2002;1:40-43.
15. Malam Z., Parodo J., Waheed F., Szaszi K., Kapus A., Marshall J.C. Pre-B cell colony-enhancing factor (PBEF/Nampt/visfatin) primes neutrophils for augmented respiratory burst activity through partial assembly of the NADPH oxidase. J. Immunol. 2011;186(11):6474-6484. doi: 10.4049/jimmu-nol.1003706.
16. Parker H., Dragunow M., Hampton M.B., Kettle A.J., Winterbourn C.C. Requirements for NADPH oxidase and myeloperoxidase in neutrophil extracellular trap formation differ depending on the stimulus. J. Leukoc. Biol. 2012;92(4):841-849. doi: 10.1189/ jlb.1211601.
REFERENCES
1. Yoshimura K., Miyamoto Y., Kamijo R. Mechanisms for bone resorption induced by periodontal pathogens. Clin. Calcium. 2012;22(11):1685-1692. doi: CliCa121116851692.
2. Makeeva I.M., Daurova F.Yu., Byakova S.F., Ippolitov E.V., Gostev M.S., Polikushina A.O., Shubin E.V. Sensitivity of microbial associations of periodontal lesions to antibacterial agents. Stomatologiya. 2016;95(3):26-30 (In Russian).
3. Borregaard N. Neutrophils, from marrow to microbes. Immunity. 2010;33(5):657-670. doi: 10.1016/j.immuni.2010.11.011.
4. Sima C., Glogauer M. Neutrophil Dysfunction and Host Susceptibility to Periodontal Inflammation: Current State of Knowledge. Current Oral Health Reports. 2014;2:95-103. DOI: 10.1007/s40496-014-0015-x.
5. Means R.T. Iron deficiency anemia. Hematology. 2013; 18(5):305-306. doi: 10.1179/102453321 3Z.000000000197.
6. Usova N.U., Balabina N.M. Risk factors of development of iron defciency anemia. Sibirskii meditsinskii zhurnal. 2011;103(4):7-10 (In Russian).
7. Chakraborty S., Tewari S., Sharma RK., Narula S.C., Ghalaut P.S., Ghalaut V. Impact of iron deficiency anemia on chronic periodontitis and superoxide dismutase activity: a cross-sectional study. J. Periodontal. Implant. Sci. 2014;44(2):57-64. doi:10.5051/ jpis.2014.44.2.57.
8. Short M.W., Domagalski J.E. Iron deficiency anemia: evaluation and management. Am. Fam. Physician. 2013;87(2):98-104.
9. Das I., Saha K., Mukhopadhyay D., Roy S., Raychaudhuri G., Chatterjee M., Mitra P.K. Impact of iron deficiency anemia on cell-mediated and humoral immunity in children: A case control study. J. Nat. Sci. Biol. Med. 2014;5(1):158-163. doi:10.4103/0976-9668.127317.
10. Yazdani M., Merrikhi A., Beni Z.N., Baradaran A., Soleimani N., Musazade H. Association between neutrophil geletinase-associated lipocalin and iron deficiency anemia in children on chronic dialysis. J. Res. Med. Sci. 2014;19(7):624-628.
11. Slavinsky A.A., Nikitina G.V. Computer analysis of the neutrophilic leukocyte image: myeloperoxidase. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2000;1:21-24 (In Russian).
12. Parvaneh N., Teimourian S. Effectiveness of nitroblue tetrazolium (NBT) test. Arch. Iran. Med. 2008;11(1):129-130.
13. Shubich M.G. Cytochemical detection of alkaline phosphatase of leukocytes. Laboratornoe delo. 1965;1:10-14 (In Russian).
14. Slavinsky A.A., Nikitina G.V. Computer analysis of the neutrophilic leukocyte image: alkaline phos-phatase. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. 2002;1:40-43 (In Russian).
15. Malam Z., Parodo J., Waheed F., Szaszi K., Kapus A., Marshall J.C. Pre-B cell colony-enhancing factor (PBEF/Nampt/visfatin) primes neutrophils for augmented respiratory burst activity through partial assembly of the NADPH oxidase. J. Immunol. 2011;186(11):6474-6484. doi: 10.4049/jimmu-nol.1003706.
16. Parker H., Dragunow M., Hampton M.B., Kettle A.J., Winterbourn C.C. Requirements for NADPH oxidase and myeloperoxidase in neutrophil extracellular trap formation differ depending on the stimulus. J. Leukoc. Biol. 2012;92(4):841-849. doi: 10.1189/ jlb.1211601.
