Дисбиотические изменения микрофлоры кишечника у здоровых людей Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

© коллектив авторов, 2013 УДК 612.336.31.08

Е. А. Беляева1, в. м. Червинец1, Ю. в. Червинец1, А. м. Самоукина1, Е. С. михайлова1, А. И. Пятова1, А. Ю. миронов

дисбиотические изменения микрофлоры кишечника у здоровых людей

1Кафедра микробиологии и вирусологии с курсом иммунологии ГБОУ вПО Тверская госмедакадемия минздравсоцразвития России, 2ГБОУ вПО Первый мГмУ им. И. м. Сеченова минздравсоцразвития России

Исследовали видовой и количественный состав микрофлоры кишечника у студентов-добровольцев в возрасте от 18 лет до 21 года. У 75% выявлены дисбиотические нарушения различной степени. В ассоциации микроорганизмов при нормобиозе и

I степени дисбактериоза преимущественно входили представители нормофлоры, а при II и III степени дисбиотических нарушений - как представители нормофлоры, так и условно-патогенные микроорганизмы.

Ключевые слова: микробиоценоз кишечника, дисбактериоз, условно-патогенные микроорганизмы, ассоциации микроорганизмов

Ye.A. Beliayeva, V.M. Tchervinets, Yu.V. Tchervinets, A.M. Samoukina, Ye.S. Mikhailova, A.I. Pyatova, A.Yu. Mironov THE DISBIOTIC CHANGES OF INTESTINES MICROFLORA IN HEALTHY PEOPLE The article presents the results of study of species and quantitative composition of intestinal flora in volunteer students aged 18-21 years. The disbiotic abnormality of different degrees was diagnosed in 75% of students. The associations of microorganisms, in case of normobiosis and disbacteriosis degree I included predominantly representatives of normoflora, in case of disbiotic abnormality II and III degrees included both representatives of normoflora and opportunistic pathogenic microorganisms.

Key words: microbiocenosis of intestines, disbacteriosis, opportunistic pathogenic microorganism, associations of microorganisms

Пищеварительный тракт представляет собой одну из наиболее сложных экосистем. Микрофлора желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) находится в постоянном динамическом равновесии с разнообразными факторами внешней среды, собственного организма и естественной резистентности [1, 3]. Гармоничное соотношение различных компонентов микробиоценоза, эубиоз или эуби-отическое соотношение, отражает нормальное микроэкологическое состояние как в органе, так и в организме в целом. Микрофлора кишечника является важнейшим звеном в системе защиты организма и сохранения гоме-остаза, а также представляет собой высокочувствительную индикаторную систему, которая реагирует количественными и видовыми сдвигами на нарушения этого равновесия [2].

Цель настоящего исследования - изучение видового и количественного состава микробиоценоза кишечника здоровых людей.

Материалы и методы. Обследованы 156 здоровых студентов-добровольцев (120 девушек и 36 юношей) в возрасте от 18 лет до 21 года. На момент обследования никаких жалоб на нарушение функций пищеварительного тракта они не предъявляли.

Видовой и количественный состав просветной микрофлоры изучали с использованием классических бактериологических методов. Степень дисбиотических нарушений микробиоты толстой кишки определяли согласно отраслевому стандарту «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» [1, 3, 4]. Выделен-

ные микроорганизмы идентифицировали по морфологическим, тинкториальным, культуральным и биохимическим свойствам. Количество бактерий определяли путем подсчета колониеобразующих единиц на 1 г фекалий (^ КОЕ/г).

Результаты и обсуждение. При бактериологическом исследовании кала (рис. 1) в 79% случаев высевались лактобациллы в среднем количестве 7,25 ^ КОЕ/г, в 61% - стрептококки (7,17 ^ КОЕ/г), в 55% -бифидобактерии (7,72 ^ КОЕ/г), в 42% - бактероиды (7,25 ^ КОЕ/г), в 35% - бациллы (7,86 ^ КОЕ/г), в 26% - актиномицеты (7,74 ^ КОЕ/г), в 26% - пепто-стрептококки (7,15 ^ КОЕ/г), в 17% - кандиды (6,43 ^ КОЕ/г), в 11% - энтеробактерии (7,58 ^ КОЕ/г), в 5% - стафилококки (6,43 ^ КОЕ/г), в 5% - лептотрихи (7,33 ^ КОЕ/г), в 5% - клостридии (7,04 ^ КОЕ/г), в 3% - превотеллы (7,35 ^ КОЕ/г), в 1% - листерии

(7,94 ^ КОЕ/г).

%

90-,

v/\ vA 77Л VA VA [771

- 1 „ 1 „1 - I ,-1 ~ < -.1 „ I, „ I, .. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

Для корреспонденции:

Беляева Екатерина Андреевна, аспирант каф. микробиологии и вирусологии

Адрес: 170100, Тверь, ул. Советская, 4 Телефон: (8920) 697-13-50 E-mail: [email protected]

Рис. 1. Спектр и частота выделения микроорганизмов ЖКТ у 156 здоровых людей (в %).

1 - Lactobacillus spp.; 2 - Enterococcus spp.; 3 - Bifidobacterium spp.; 4 - Bacteroides spp.; 5 - Bacillus spp.; 6 - Actinomyces spp.; 7 -Peptostreptococcus spp.; 8 - Candida spp.; 9 - Enterobacteriaceae; 10 - Leptotrichia spp.; 11 - Staphylococcus spp.; 12 - Clostridium spp.; 13 -Prevotella spp.; 14 - Listeria spp.

КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА, № 3, 2013

15%

25%

Ассоциации микроорганизмов у лиц с разной степенью дис-бактериоза

Отсутствие дисбактериоза

I степень дисбактериоза

II степень дисбактериоза

III степень дисбактериоза

52%

Рис. 2. Степени дисбактериоза у 156 здоровых людей.

Нормальный биоценоз выявили у 25% студентов, у 52% определили I степень дисбиотических изменений, у 15% - II степень, у 8% - III степень (рис. 2).

В ассоциации микроорганизмов входило от 2 до 8 родов. Ниже представлены наиболее распространенные ассоциации (рис. 3).

При нормобиоценозе (в отсутствие дисбактериоза) в ассоциации микроорганизмов входило от 2 до 6 родов, чаще всего встречались представители нормальной микрофлоры родов Lactobacillus, Bifidobacterium, Enterococcus, реже Bacteroides и Peptostreptococcus, а иногда условно-патогенные микроорганизмы (УПМ) родов Actinomyces и Bacillus. При I степени дисбактериоза количество микроорганизмов, входивших в ассоциации, составило от 2 до 8, и они также представлены в основном представителями нормофлоры родов Lactobacillus, Bifidobacterium, Enterococcus, реже Bacteroides и УПМ рода Actinomyces, еще реже Bacillus и Candida и представителями нормальной микрофлоры peptostreptococcus. II степень дисбак-териоза характеризовалась ассоциациями от 3 до 7 родов. Преимущественно это рода как нормофлоры (Lactobacillus, Bifidobacterium), так и УПМ (Bacillus, candida), также часто встречались Enterococcus, Bacteroides, Actinomyces, peptostreptococcus и Clostridium. При III степени дисбиотических нарушений в ассоциации входили 3-4 микроорганизма - чаще всего УПМ родов Bacillus, Actinomyces и Candida, а также представители нормальной микрофлоры Bacteroides, Enterococcus, peptostreptococcus.

Степень дисбактериоза

Ассоциация родов микроорганизмов

0 Lactobacillus + Bifidobacterium;

Lactobacillus + Actinomyces + Bifidobacterium;

Lactobacillus + Bacillus + Bacteroides + Enterococcus + Bifidobacterium;

Lactobacillus + Bacillus + Enterococcus + Peptostreptococcus + Bifidobacterium;

Lactobacillus + Actinomyces + Enterococcus + Bifidobacterium;

Lactobacillus + Peptostreptococcus + Bifidobacterium;

Lactobacillus + Bacteroides + Enterococcus + Peptostreptococcus + Bifidobacterium

1 Lactobacillus + Bacillus + Bacteroides + Enterococcus; Lactobacillus + Enterococcus + Bifidobacterium; Lactobacillus + Actinomyces;

Lactobacillus + Actinomyces + Enterococcus; Lactobacillus + Bacillus + Bacteroides; Lactobacillus + Enterococcus + Peptostreptococcus; Enterococcus + Bifidobacterium; Actinomyces + Bifidobacterium; Lactobacillus + Enterococcus;

Lactobacillus + Candida + Enterococcus + Bifidobacterium; Lactobacillus + Bacteroides + Actinomyces; Lactobacillus + Bacteroides + Enterococcus

II Lactobacillus + Bacteroides + Candida + Enterococcus;

Lactobacillus + Bacillus + Bacteroides + Actinomyces + Enterobacteriaceae;

Lactobacillus + Staphylococcus + Bacillus + Actinomyces + Enterococcus;

Bacillus + Actinomyces + Enterobacteriaceae + Peptostreptococcus + Clostridium + Bifidobacterium

III Bacillus + Bacteroides + Candida + Enterococcus; Bacillus + Bacteroides + Enterococcus + Clostridium

9 1

™ ГХИ КХИ m m KX. „/■ I ™ I ™ ГХИ m m m m „ ^ ™ ™ ГХИ m m

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23

Рис. 3. Частота встречаемости ассоциаций микроорганизмов.

1 - LB + BFD; 2 - LB + ВАС + BACT + ЕС; 5 - LB + ЕС + BFD; 4 - LB + ACT; 5 - LB + ACT + BFD; 6 - LB + BAC + BACT + ЕС + BFD; 7 - LB + ACT + ЕС; 8 - LB + BAC + BACT; 9 - LB + ЕС + PSTR; 10 - LB + BAC + ЕС + PSTR + BFD; 11 - ЕС + BFD; 12 - ACT + BFD; 13 - LB + ЕС; 14 - LB + BACT + ACT; 15 - LB + BACT + ЕС; 16 - LB + BACT + ACT; 17 - ACT + ЕС + BFD; 18 - LB + BACT + ЕС; 19 - LB + PSTR + BFD; 20 - BACT + ЕС + BFD; 21 - LB + BACT + CAND + ЕС; 22 - LB + BACT + ЕС + PSTR + BFD; 23 - LB + BACT + ACT + ЕС + BFD.

Такие рода нормофлоры, как Lactobacillus и Bifidobacterium, при III степени дисбактериоза не обнаружены в ассоциациях

микроорганизмов (см. таблицу).

Заключение. В сравнительном аспекте изучено состояние микрофлоры кишечника у здоровых людей 18-21 года. Дисбио-тические изменения выявлены у 75%. В ассоциации микроорганизмов при нормобиозе и I степени дисбактериоза преимущественно входили представители нормофлоры, при II степени дис-биотических нарушений - как представители нормофлоры, так и УПМ. III степень характеризовалась увеличением количества УПМ.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бондаренко В. М., Мацулевич Т. В. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2007: 8-35.

2. Конев Ю. В. Нарушение микробиоценоза кишечника и его лечение. Справочник поликлинического врача. 2007; 7; 34-8.

3. Малое В. А., Гюлазян Н. М.Микробиоценоз желудочно-кишечного тракта: современное состояние проблемы. Лечащий врач. 2007: 6: 10-4.

4. Отраслевой Стандарт "Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника" (ОСТ 91500.11.0004-2003, утвержден Приказом Министерства здравоохранения РФ № 231 от 09.06.2003). М.; 2003.

Поступила 06.06.12

© КОЛЛЕКТИв АвТОРОв, 2013

А. Н. Наркевич, А. П. Кочеткова, Л. в. Ларионова, Д. И. Симакова, Е. Ю. Люкшина, Л. К. Лысова, А. Н. Терентьев, А. И. Шелохович, О. Г. Сокиркина

конструирование полимерных иммуноглобулиновых препаратов для идентификации различных сероваров Legionella pneumophila в реакции слайд-агглютинации

ФКУз Ростовский-на-Дону противочумный институт Роспотребнадзора

В представленном исследовании решалась задача разработки полимерного диагностического препарата для идентификации эпидзначимых серогрупп Legionella pneumophila, сочетающего скорость учета реакции (1-5 мин) коагглютинирующих препаратов с цветной визуализацией и демонстративностью реакции агломерации объемной с полимерными диагностикумами. Для этого специально синтезированные полимерные микросферы сенсибилизировали сыворотками, обогащенными антителами к липополисахариду соответствующего серовара L. pneumophila. Полученные иммуноглобулиновые диагностические препараты выявляют возбудителя легионеллеза в реакции слайд-агглютинации на стекле в течение 1-5 мин. Полимерные диагностические препараты дают положительную реакцию с культурой соответствующего ему серовара и не дают реакции с другими гомо- и гетерологичными возбудителями инфекционных заболеваний.

Ключевые слова: полимерные диагностические препараты, серовары, слайд-агглютинация

G.L. Karbyshev, A.N. Narkevitch, A.P. Kochetkova, L.V. Larionova, D.I. Simakova, Ye.Yu. Lyukshina, L.K. Lysova, A.N. Terentiyev,

A.I. Shelokhovitch, O.G. Sokirkina THE DEVELOPMENT OF POLYMER IMMUNOGLOBULIN PREPARATIONS TO IDENTIFY DIFFERENT SEROVARS LEGIONELLA PNEUMOPHILIA IN REACTION OF SLIDE-AGGLUTINATION The article deals with the results of study targeted to develop polymer diagnostic preparation to identify epidemically significant serogroups Legionella pneumophilia. The preparation combines rate of record (1-5 min) of reaction ofparagglutinining preparations with color visualization and demonstrative of reaction ofvolume agglomeration with polymer diagnosticums. The specially synthesized polymer microspheres were sensibilized with serums enriched with antibodies to lipopolysaccharide of corresponding serovar L. pneumophilia. The derived immunoglobulin diagnostic preparations detect agent of legionellesis in the reaction of slide-agglutination on glass during 1-5 min. The polymer diagnostic preparations provide positive reaction with culture of corresponding serovar and no reaction with other gomologic and geterologic agents of infectious diseases.

Key words: polymer diagnostic preparation, serovar, slide-agglutination

Г. Л. Карбышев,

Уже в первые годы изучения возбудителя легионеллеза установлено, что, несмотря на сходство различных штаммов легионелл по питательным потребностям и гомологии ДНК, сыворотки к различным серогруппам Legionella pneumophila взаимодействуют только с гомологичными серогруппами [5, 8, 10].

S. Otten и соавт. [9] показали, что серогруппспецифи-ческие антигены, выделенные из различных серогрупп L. pneumophila, имеют липополисахаридную природу.

С. Ciesielski и соавт. [3] описали характеристики липополисахарида (ЛПС) и других видов легионелл и продемонстрировали его взаимосвязь с серогрупповой специфичностью.

Для корреспонденции: Ларионова Людмила Владимировна, науч. сотр Адрес: 344002, Ростов-на-Дону, ул. М. Горького, 117/40 Телефон: (8863) 240-91-13 E-mail: [email protected]

D. Jürgens и соавт. [6] изучили перекрестно-реагирующие липополисахаридные антигены и показали, что электрофорез и иммуноблоттинг можно использовать в серологическом типировании легионелл.

За последние годы такие методы, как иммунофер-ментный анализ, иммуноблоттинг, полимеразная цепная реакция, стали обычными в практике клинико-диагностических лабораторий. Однако при этом в определенной мере сужается сфера их применения до специализированных лабораторий.

В этом контексте агглютинационные тесты, наиболее часто используемые бактериологами, несмотря на существующие представления об их архаичности, не утратили своей актуальности и в современных условиях. Они имеют не только четко очерченную нишу применения в лабораторной диагностике, но и пути к совершенствованию и оптимизации.

В РостНИПЧИ разработан и сконструирован набор коагглютинирующих диагностикумов (КоА) для серологической идентификации L. pneumophila некоторых