CC BY
54
%%ф
_____________________________Ветеринария -И*
постепенно распространяющейся от центральных до 3. Степень выраженности структурных изменений в периферических зон печеночных долек. Через 14 суток печени отражает характер последействия препарата, а активизируются процессы репаративной регенерации, не уровень его накопления в органе. однако в течение месяца не происходит полного восстановления поврежденной ткани органа.
Литература
1. Бойко Т. В., Герунова Л. К. Механизм действия и перспективы применения неоникотиноидов - инсектоака-рицидов нового поколения // Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность : материалы междунар. науч.-практич. конф., посвящ. 50-летию Федерального центра токсикологической, радиационной и биологической безопасности. Казань, 2010. С. 36-39.
2. Илларионов А. И., Деркач А. А. Токсическое действие нитро- и цианзамещенных неоникотиноидных инсектицидов на медоносную пчелу // Вестник Воронежского государственного агроуниверситета. 2009. № 2 (21). С. 16-24.
3. Сухорученко Г. И., Новожилов К. В. Приоритеты экологотоксикологических исследований на современном этапе развития химического метода защиты растений // Химический метод защиты растений: состояние и перспективы повышения экологической безопасности : мат-лы международ. научн.-практ. конф. 6-10 дек. 2004 г. СПб. : ВИЗР, 2004. С. 308-312.
ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТОВ ЭКЗОГЕННОГО ИНТЕРФЕРОНА НА ВИРУС ВИРУСНОЙ ДИАРЕИ — БОЛЕЗНИ СЛИЗИСТЫХ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Т. И. ГЛОТОВА,
доктор биологических наук, заведующая лабораторией вирусологии,
О. В. КУНГУРЦЕВА,
кандидат биологических наук, старший научный сотрудник,
А. Г. ГЛОТОВ,
доктор ветеринарных наук, заведующий лабораторией биотехнологии — диагностическим центром,
Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: вирус вирусной диареи, цитопатогенный биотип, нецитопатогенный биотип, противовирусное действие, крупный рогатый скот, экзогенный интерферон, культура клеток, тканевое цитопатическое действие.
Keywords: bovine viral diarrhea virus, cytopathogenic biotype, non cytopathogenic biotype, antiviral effect, cattle, exogenous interferon, cell culture, tissue cytopathic effect.
Вирус вирусной диареи — болезни слизистых оболочек (ВД-БС) широко распространен у крупного рогатого скота (КРС) во всем мире. В зависимости от воздействия на культуры клеток, он представлен 2 биотипами: цитопатогенным (цп), характеризующимся быстрым литическим циклом внутриклеточной инфекции, и неци-топатогенным (нцп), вызывающим инфицирование восприимчивых клеток без видимых морфологических изменений.
Преобладание той или иной формы болезни у КРС также зависит от биотипа вируса, ее вызвавшего. Так, у серонегативных животных, инфицированных цитопатогенными штаммами, развиваются характерные клинические признаки, заканчивающиеся выздоровлением. Напротив, у животных, инфицированных нецитопатогенными штаммами, особенно с момента внутриутробного развития, формируется персистентная форма ВД-БС, которая может длиться пожизненно. Сочетание введения цитопатогенного и
нецитопатогенного штаммов вируса ВД-БС КРС может привести к смертельной форме болезни.
Многочисленными диагностическими исследованиями, проведенными на большом клиническом материале от больных животных, установлено широкое распространение ВД-БС КРС в животноводческих хозяйствах региона Сибири [1-2].
Установлено сходство структурных и биологических свойств вируса вирусной диареи — болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота (ВД-БС КРС) с вирусом гепатита С человека (НС^. Известно, что вирус Н^ чувствителен к воздействию интерферона и препараты интерферона и другие цитокины успешно используются при терапии гепатита С [3-4]. Установлено также, что бычий ИФН-а способен подавлять репликацию и распространение вируса ВД-БС в культуре клеток почки КРС [5].
Данные о чувствительности вируса ВД-БС КРС к действию интерферонов носят ограниченный характер. В
Ветеринария
связи с этим большой интерес представляет изучение чувствительности штаммов вируса ВД-БС к интерферону (ИНФ), показавших различную вирулентность для телят [6].
Цель работы — изучить противовирусную активность человеческих и рекомбинантных цитокинов в отношении штаммов и изолятов вируса ВД-БС КРС, обладающих различной вирулентностью для телят.
Материалы и методы исследований.
Для изучения противовирусного действия цитокинов использовали цитопатогенные штаммы: ТМ, ВК-1, изоляты: Т1 и Кремль вируса ВД-БС КРС. Штамм ТМ, изоляты Т1 и Кремль выделены в 2001 г. от больных и инфицированных вирусом животных. Они проявили различную вирулентность в отношении естественно восприимчивых животных. Штамм ТМ, выделенный из легких больного теленка во время вспышки респираторного заболевания, вызвал у серонегативных к вирусу телят 4-6-месячного возраста характерные признаки острого респираторного заболевания. Изолят Кремль, полученный из вагинальных выделений коровы с гинекологической патологией, и Т1, выделенный из спермы персистентно инфицированного быка-производителя, показали меньшую вирулентность для телят этого возраста. Они вызвали у экспериментально инфицированных животных угнетение общего состояния, кратковременное повышение температуры тела, чихание и ринит, а также лейкопению. Штамм ВК-1 вызывал клинические признаки болезни при экспериментальном заражении телят различного возраста [7].
Инфекционную активность вируса определяли в чувствительной перевиваемой линии культуры клеток коронарных сосудов теленка (КСТ), сертифицированной как вирус ВД-БС КРС негативной. В качестве ростовой среды использовали питательную среду «Игла МЕМ» с однократным и двойным набором аминокислот и витаминов с добавлением 5-10 % сыворотки крови лошади (с целью избежания риска контаминации вирусом) производства ООО «БиолоТ», 0,06 % L-глутамина, 100 мкг/мл канамицина. Клетки культивировали при 37°С и 5 % СО2. Поддерживающей служила среда «Игла МЕМ» без добавления сыворотки.
Определение инфекционной активности выделенных изолятов проводили микрометодом в 96-луночных культуральных планшетах (Costar). Титр вируса выражали в ТЦД50/01см3 (50 % тканевая цитопатическая доза). Для определения противовирусной активности препаратов клетки КСТ суспендировали в среде с различными их концентрациями и без, затем вносили по 100 мкл на лунку 96-луночных культуральных планшетов, культивировали 24 часа при 37°С, после чего вносили 100 мкл вируссодержащей жидкости, содержащей 103ТЦД50/0 1см3 Для сравнения периодически отбирали 100 мкл культуральной среды из лунок с клетками, обработанными различными концентрациями препаратов интерферона и не обработанными контрольными для титрования вируса. Титры вируса в опытных лунках сравнивали с титрами вируса в контрольных лунках.
Использовали человеческий лейкоцитарный ИФН (ФГУП НПО «Микроген»), препарат «Роферон», реком-бинатный ИФН-6-2а («Ф. Хоффманн-Ля Рош Лтд»), «Реаферо»н, рекомбинантный ИФН-6-2в («Вектор-Медика»), С 13-0404. Титры ИФН выражали как наивысшее разведение, вызвавшее не менее чем 50 % снижение 100 ТЦД 50/0 1см3 вируса везикулярного стоматита (ВВС).
Результаты исследований.
Установили, что препараты интерферона вызывали статистически достоверное снижение инфекционной активности исследованных штаммов и изолятов вируса ВД-БС КРС (Р < 0,05). Препарат «Роферон», содержащий ИФН-а-2а, проявил выраженную противовирусную активность в отношении штаммов и изолятов вируса ВД-БС КРС в концентрации 102 ед./см3.
Концентрация ИФН-а-2а 104ед./см3 приводила к максимальному снижению инфекционной активности исследуемых штаммов и изолятов вируса ВД-БС КРС. Так, отмечали снижение инфекционной активности у штамма ТМ на 2,3 1дТЦД50/01см3, ВК-1 —
на 3,3 ^^о/о,^^ у изолята Кремль — на 3,9 |дТЦД50/о,1см3.
Наибольшая чувствительность к препарату отмечена у изолята Т1 (снижение инфекционной активности на 4,3 1дТЦД50/01 см3), а наименьшая у более вирулентного для телят штамма ТМ.
Подобные результаты были получены при изучении противовирусной активности препарата «Реаферон», содержащего ИФН-а-2в. Наибольшую активность препарат проявил в концентрации 104 ед./см3, инактивируя
2,3 1дТЦД50Ю,1с„3 штамма вируса ВД ТМ; 3,3 1дТЦД50Ю,1с„3
штамма ВК-1; 3,8 1дТЦД50/01см3 изолята Кремль;
3.7 1дТЦД50Ю,1с„3 изолята Т1.
Наши результаты согласуются с данными исследователей [8], которые в опытах in vitro показали, что препараты, содержащие а-интерферон в концентрации 104 ед./см3, инактивируют соответственно 105,2 ТЦД50 штамма Singer и 106 штамма Nadl вируса ВД-БС КРС.
Антивирусную активность, продуцируемую в клетках бычьего происхождения, идеально изучать с использованием интерферонов гомологичного происхождения. Т. к. в настоящее время производство коммерчески доступного препарата бычьего лейкоцитарного интерферона прекращено, исследовали противовирусную активность человеческого лейкоцитарного ИНФ, гетеро-логичного КРС.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что лейкоцитарный интерферон обладает противовирусной активностью в отношении вируса ВД-БС КРС, хотя его минимальная эффективная концентрация была довольно высока (102—103 ед./см3).
При концентрации лейкоцитарного интерферона 104 ед./см3 отмечали максимальное снижение инфекционной активности исследуемых штаммов и изолятов вируса ВД-БС КРС (штамма ТМ — на 2,8 1дТЦД50/01см3, ВК-1 — на 3,5 1дТЦД50/01см3, изолята Кремль — на
3.8 1дТЦД50/01см3. Наибольшая чувствительность к препарату отмечена у изолята Т1 (снижение инфекционной
активности на 4,3 |дТЦД50/0,1с„3).
В результате проведенных исследований установлено, что препараты интерферона обладают выраженной противовирусной активностью в отношении штаммов и изолятов вируса ВД-БС КРС. Более вирулентный штамм ТМ вируса ВД-БС КРС менее чувствителен к действию ИНФ. Лейкоцитарный и рекомбинантные интерфероны проявили более выраженную активность в отношении менее вирулентных для телят штамма ВК-1 и изолятов Т1 и Кремль.
Выводы.
Хотя данная работа и ограничена экспериментами in vitro, установлено, что размножение штаммов и изо-лятов вируса ВД-БС КРС подавлялось исследованными препаратами интерферона.
§ Фф
________________________________Ветеринария -И*
Различные препараты экзогенного интерферона лечения вирусной диареи — болезни слизистых оболо-целесообразно использовать для профилактики или чек крупного рогатого скота.
Литература
1. Глотов А. Г. [и др.]. Этиологическая структура массовых респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота в хозяйствах, занимающихся производством молока // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2008. № 3 (183). С. 72-78.
2. Глотов А. Г. Выделение на территории Российской Федерации нецитопатогенного изолята 2-го генотипа вируса диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота // Вопросы вирусологии. 2009. № 5. С. 43-47.
3. Baron S. The interferons. Mechanisms of action and clinical applications // J. Am. Med. Assoc. 1991. Vol. 266. P. 1375-1383.
4. Georgiades J. A. A new approach to chronic viral disease therapy by cytokines // Arch. Immunol. Ther. Exp. 1993.
Vol. 41. P. 173-178.
5. Ohmann B. H. Influence of interferons al and у and of tumor necrosis factor on persistent infection with bovine viral diarrhea virus in vitro // J. Gen. Virol. 1988. V. 69. P. 1399-1403.
6. Глотов А. Г., Глотова Т. И., Рябчикова Е. И., Сергеев А. Н. Выделение и характеристика изолятов вируса диареи крупного рогатого скота // Вопросы вирусологии. 2006. № 1. С. 42-45.
7. Жидков С. А. и соавт. Роль вирусной диареи в этиологии респираторных и желудочно-кишечных болезней телят // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 1995. № 3. С. 50-53.
8. Escuret V. [et al.]. Study of the antiviral mechanism of action of ribavirin in the bovine viral diarrhea virus model // Gastroenterology Clinique & Biologique English. 2002. V. 26. Р 584-590.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА СЕЛЕКТИВНОИ ДЕКОНТАМИНАЦИИ ПРИ ОТЪЕМЕ ПОРОСЯТ
Н. В. ДАНИЛЕВСКАЯ,
доктор ветеринарных наук, профессор,
заведующая кафедрой фармакологии и токсикологии имени И. Е. Мозгова,
Р. Ф. ТУХФАТОВА,
кандидат биологических наук, доцент,
Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии
г. Москва, ул. А. Скрябина, д. 23; тел. 8(495)5100366
Ключевые слова: «Тиамулокс-комби», пробиотик, поросята, прирост живой массы, гематология. Keywords: «Tiamulox-Combi», probiotic, pigs, weight gain, hematology.
Перед ветеринарными врачами, работающими в свиноводстве, стоит сложная задача — ограничить использование синтетических ветеринарных препаратов большинства фармакологических групп, в первую очередь антибиотиков. На средних и крупных свинокомплексах Российской Федерации, где высока концентрация животных на ограниченных площадях, особенно важны рациональные подходы к лечению и профилактике инфекционных болезней. Один из критических этапов в технологии выращивания свиней — период отъема [5]. В связи с переводом в новое помещение, перегруппировкой, сменой кормов и обслуживающего персонала у поросят возникает технологический стресс, отмечают рост заболеваемости и уменьшение темпов роста [2, 3]. Т. к. стресс снижает естественную резистентность и показатели гуморального иммунитета, создаются условия для активизации условно-патогенной микрофлоры, что приводит к расстройству пищеварения или респираторной патологии [1]. Сложности усугубляются тем, что бактериальная инфекция предрасполагает к развитию
вирусных заболеваний, т. е. могут возникать устойчивые к антибактериальной терапии ассоциации возбудителей, что приводит к сложностям в дальнейшем лечении, снижению экономических результатов производства [4].
Целью настоящей работы являлось испытание в промышленных условиях эффективности ранее отработанной в условиях эксперимента схемы применения при отъеме поросят нового комплексного антибактериального лекарственного средства «Тиамулокс-Комби» («Tiamulox granulatis pro miscere cum cubis») с одновременным формированием нормобиоза пробиотиком — прямым донором нормальной микрофлоры.
Материалы и методы исследования.
В условиях свинокомплекса Уфимского района Республики Башкортостан на поросятах крупной белой породы был поставлен эксперимент по отработке технологической схемы профилактического применения антибактериальной обработки и пробиотикотерапии при отъеме поросят и передаче их на доращивание.
