CC BY
19
EKO^OriH, ririGHA TEAPHH, EETEPHHAPHA CAfflTAPM, EETEPHHAPHO-CAHITAPHA I PA^IO^OriHHA EKCnEPTH3A
ECOLOGY, HYGIENE OF ANIMAL, VETERINARY SANITATION, VETERINARY-SANITARY AND RADIOLOGICAL EXAMINATION
УДК 637.072:576.08
Адаменко Л.В., асистент ([email protected]) ©
Нащональний утверситет бюресурЫв i природокористування Украгни, м. Кигв
РОЗРОБКА МЕТОД1В ВИЗНАЧЕННЯ ЗАЛИШКОВИХ КШЬКОСТЕЙ ДЕЗ1НФЕКЦ1ЙНИХ ЗАСОБ1В МЕТОДАМИ IN VITRO
В cтаттi наведет розроблен методи еизначення залишкоеих ктькостей дезтфекцтних та мийно-дезтфекцтних заcoбie на технoлoгiчнoмy обладнанн тдприемств з виробництва, переробки та транспортування харчових прoдyктie шляхом визначення гх цитoтoкчичнocтi.
Ключовi слова: молоко, цитотоксичтсть, культура клтин, дезтфекцтний зааб, безпечтсть.
Вступ. Невщ'емним складником технологи отримання продукци тваринництва гарантовано! якост е дотримання надежно! ппешчно! практики (GMP) тд час всього технолопчного процесу, важливим компонентом яко! е саштарна обробка технодогiчного обладнання [1].
Сучаснi дезiнфекцiйнi засоби, яю використовуються для саштарно! обробки дошьного та технодогiчного обладнання молокопереробних тдприемств е багатокомпонентними. До них входять не лише дiючi речовини дезшфекцшних засобiв, а i поверхнево-активнi речовини, стабшзатори тощо. Застосування таких засобiв дозволяе поеднати в однiй операци миття та дезiнфекцiю, скоротити тривалють саштарно! обробки i витрати води. Варто зауважити, що проводити саштарну обробку дошьного та технодогiчного обладнання необхщно проводити вiдповiдно до технолопчних iнструкцiй [2]. При порушеннi режимiв заключного змивання дезiнфекцiйних засобiв з поверхонь технолопчного обладнання ймовiрнiсть потрапляння ксенобiотикiв у молоко та молочш продукти значно зростае.
© Адаменко Л.В., 2011
Внаслщок потрапляння до харчових продукпв 3aco6iB для миття i дезшфекци за даними шоземно! лiтератури виникае до 25 % випадюв харчових отруень [3].
Статистичних даних щодо Укра!ни з цього питання не юнуе, оскiльки чинними нормативно-правовими актами не передбачено дослщження продукцп тваринництва, в т. ч. молока, на наявшсть дезiнфекцiйних, мийно-дезшфекцшних засобiв, !х залишкiв та метаболтв. Дана проблема в Укра!ш е практично невивченою внаслiдок вiдсутностi ефективних методiв визначення мiкроконцентрацiй деззасобiв у молощ.
1снуюча методика визначення залишкових кiлькостей дезiнфекцiйних та мийно-дезiнфекцiйних засобiв на технологiчному обладнаннi пiдприемств з виробництва, переробки та транспортування харчових продукив грунтуеться н визначеннi рН поверхш за допомогою смужок паперу ушверсального iндикатора з дiапазоном величин ввд 2 до 11. За змшою кольору iндикатора встановлюють наявшсть залишюв дезiнфекцiйних та мийно-дезiнфекцiйних засобiв [4]. Але, оскiльки значна частина сучасних мийних та мийно-дезiнфекцiйних засобiв у робочих концентрацiях мае рН близьке до рН питно! води (6,0-9,0), даний споЫб е недостатньо ефективним, i тому достовiрно неможливо встановити наявнiсть дезiнфекцiйних та мийно-дезшфекцшних засобiв на технологiчному обладнаннi.
1снують методики визначення дезiнфекцiйних та мийно-дезшфекцшних засобiв у останнiй порци змивно! води. Але цi методики е специфiчними для кожного дезiнфекцiйного засобу, !х дшчо! речовини, або хiмiчного класу.
Метою нашо! роботи було розробка методу визначення залишюв дезшфекцшних та мийно-дезiнфекцiйних засобiв на технолопчному обладнаннi для виробництва, переробки та транспортування харчових продукив.
Матер1али та методи. Дослiджуванi клiтини А-549 (отримаш з Банку клiтинних лiнiй 1ЕПОР iм. Р.С.Кавецького НАН Укра!ни), дезшфекцшш засоби.
Результати дослщження. Метод включае взяття змивiв з поверхонь технолопчного обладнання, внесення змивiв до ростового середовища для культивування культур клпин, культивування та оцiнку цитотоксичного впливу змивiв на культуру клiтин.
Даний споаб грунтуеться на визначеннi цитотоксично! ди залишкiв дезiнфекцiйних та мийно-дезшфекцшних засобiв в тестi на кл^инних культурах з урахуванням кiлькостi кл^ин та !х метаболiчного стану. Змши метаболiчного стану оцiнювали за зниженням сумарно! активностi мiтохондрiальних дегiдрогеназ в мiкротетразолiевому тестi (МТТ-тест), який вщображае iнгiбування iнтенсивностi клiтинного дихання.
Спочатку шляхом експерименту було пiдiбрано метод визначення цитотоксичност мiкроконцентрацiй ксенобiотикiв, а поим розроблено метод виявлення залишюв дезшфекцшних та мийно-дезшфекцшних засобiв на технолопчному обладнанш для виробництва, переробки та транспортування харчових продукив.
Культури кл^ин клiтини А-549 (отриманi з Банку кл^инних лiнiй 1ЕПОР iм. Р.С.Кавецького НАН Укра!ни) культивували в повному поживному середовищi RPMI 1640 ("SIGMA", США), що мiстить 4 ммоль/л Ь-глютам^, 10 % ембрюнально! сироватки теляти ("SIGMA", США), 40 мкг/мл гентамщину у
зволоженш атмосферi з 5% СО2 при 37°С в матрациках (8еП:еЬаЬ, Укра1на). Замiну середовища проводили кожнi 2 доби. Переав клiтин здiйснювали за допомогою розчину Версена при утвореннi клiтинами на субстрат суцiльного моношару (4-5-та доба росту) Для дослщження чутливост клiтин до дезiнфекцiйних препаратiв суспензш клiтин висаджували на 96-лунковi планшети в концентрацп 5х103 -1х104 клiтин/лунку в 100 мкл повного поживного середовища. Через 24 год. вносили дослщжуваш змиви з поверхш технолопчного обладнання площею 100 см2, проведет деюшзованою дистильованою водою до ростового середовища для культивування клпин в кшькосп 2 % та шкубували клiтини за стандартних умов 24 год., тсля чого фарбували клiтини за допомогою МТТ.
Нами було проведено дослщження щодо виявлення дезшфекцшних та мийно-дезшфекцшних засобiв на тест моделях з нержавшчо! сталi пiсля проведення дезшфекци в лабораторних умовах. Тест-моделi обробляли окремими дезшфекцшними та мийно-дезiнфекцiйними засобами вiдповiдно до методичних рекомендацш з 1х застосування для дезшфекци технологiчного обладнання у харчовш промисловостi та молочного i дошьного обладнання.
Контроль залишкiв дезшфекцшних та мийно-дезшфекцшних засобiв проводили за рН за допомогою смужок паперу ушверсального iндикатора.
Потiм брали змиви та проводили цитотоксичнеi дослiдження. Кшьюсть клiтин, яка вижила пiсля культивування у ростовому середовищi з додаванням змивiв наведена у табл. 1.
Таблиця 1.
Дослщження змив1в з технологiчного обладнання тсля дезшфекцп. M±m. n=7
Назва ДЗ Юльшсть клггин, яш вижили, % до контрольних проб Концентращя ДЗ у змивах, мкл/л
Бюдез 61,41±1,94*** 36,47±8,32
В1ркон 81,59±7,24* 120,66±12,58
Неохлор 88,45±8,86 33,12±4,82
Фан 80,51±2,90*** 106,91±17,9
Примiтки: *Р < 0,05; **Р < 0,01; ***Р < 0,001 - ввдносно до контролю
Кшьюсть кл1тин, яю вижили при культивуванш ïx у ростовому середовищ1 з додаванням змив1в з тест-модел1 тсля обробки в1рконом-С, неохлором, та фаном складае бшьше 80 %. Але кшьюсть кл1тин, яю вижили при культивуванш ïx у ростовому середовищ1 з додаванням змив1в з тест-модел1 тсля обробки бюдезом складае лише 61,41±1,94 %. Таким чином, тсля остаточного змивання е залишки дезшфекцшних засоб1в, яю е небезпечними для здоров'я людини i тому необхщно провести повторне змивання залишюв, а в подальшому збшьшити час остаточного обполшкування теxнологiчного обладнання.
Ц дослiдження достатнi для якiсного визначення залишюв дезшфекцшних та мийно-дезшфекцшних засобiв на технолопчному обладнаннi для виробництва, переробки та транспортування харчових продукив.
З метою кiлькiсного визначення залишюв дезшфекцшних та мийно-дезшфекцшних засобiв на технолопчному обладнанш для виробництва, переробки та транспортування харчових продукив необхщно проводити додатково дослщження цитотоксичност дезшфекцшного (мийно-дезiнфекцiйного) засобу, яким проводили дезшфекцш. Для цього готували робочий розчин дезшфекцшного засобу, з яких робили десятикратш розведення та вносили ïx до лунок тiеï ж
плашки, що i змиви у юлькост 100 мкл. 1нкубування проводили так як описано вище. Кшьюсть клпин, яю вижили, обчислювали вiдносно контролю. За отриманими даними цитотоксичност змивiв встановлювали кiлькiсть дезiнфекцiйного засобу у змивах з технолопчного обладнання.
Висновок. Таким чином розроблений метод можна придатний для виявлення на технолопчному обладнанш залишкових кiлькостей дезiнфекцiйних засобiв та встановлення !х концентраци у змивах. Для пщтвердження наявностi та встановлення бiльш точно1 концентраци можна застосовувати специфiчнi методи виявлення хiмiчних речовин.
Вщповщно до чинного ДСТУ 3662-97 [5] в молощ-сировиш не допускаеться вмiст iнгiбувальних речовин, тому розроблений метод можна використовувати арб^ражними лабораторiями ветеринарно1 медицини та лабораторiями та науковими установами про розробщ дезшфекцшних засобiв та контролi iх безпеки та якоси, при розробцi шструкцш щодо застосування розроблених дезiнфекцiйних засобiв для саштарно1 обробки.
Л1тература
1. Адаменко Л.В. Належна практика виробництва молока / Адаменко Л.В., Якубчак О.М., Сириця О.В. // Матерiали VII Мiжнародного конгресу спецiалiстiв ветеринарно1 медицини. - 2009 р.- С. 144-145
2. Список зареестрованих ветеринарних препара^в 2009-2010 рр. станом на 28.01.2011 р. [Електоронний ресурс]. Режим доступу // http://vet.gov.ua/db/drugs - 16 с.
3. Змарлщью С. Виявлення в молощ залишюв ветеринарних лтв та шших забруднень. / Змарлщью С. // Гшена. - 2001. - №3. - С. 8.
4. Методи визначення та ощнки показниюв безпеки i якост дезiнфiкуючих, мийно-дезiнфiкуючих засобiв, що застосовуються пiд час виробництва, зберiгання, транспортування та реалiзацil продукци тваринного походження. Методичш рекомендаций, затвердженi Рiшенням науково-методично1 ради Державного комiтету ветеринарно1 медицини Украши, протокол №1, 23.12.2009 р. I. Я. Коцюмбас, О. I. Серпенко, О. М. Якубчак, Л. В. Адаменко, О. В. Косенко та ш. - К., 2009 - 125 с,
5. ДСТУ3662-97 „Молоко незбиране. Вимоги при закутвлГ'. чинний вщ 2002- 01.-01. Затв. наказом Держстандарту Украши № 736 вщ 05.12.1997 р. - К., 1998 - 16 с.
Summary
Adamenko L.V. [email protected] National University life and environment sciences of Ukraine, Kiev DEVELOPMENT OF METHODS OF RESIDUES DEZINFEEKTSIYNYH
METHODS OF IN VITRO
The article contains the methods of determining residual amounts of disinfection and cleaning-disinfection of production equipment for companies with production, processing and transporting food by determining their tsytotokchychnosti.
Key words: Milk, cytotoxicity, cell culture, a means of disinfection, safety.
Рецензент - к.вет.н., проф. Козак М.В.
