CC BY
24
Раздел 9. Пульмонология
ОСОБЕННОСТИ ПОЛИМОРФИЗМА ALA16VAL ГЕНА СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗЫ 2 (SOD2) У ДЕТЕЙ С БРОНХОЛЕГОЧНОЙ ДИСПЛАЗИЕЙ
Гусева О.Е., Лебедько О.А., Кузнецова М.С., Наговицына Е.Б.
Хабаровский филиал ДНЦ ФПД — НИИ ОМиД, г. Хабаровск
Введение. Определение основных механизмов повреждения легочной ткани у недоношенных детей с бронхолегочной дисплазией (БЛД) с позиций генетической детерминации является актуальнейшей задачей современных исследователей. Установлено, что наличие однонуклеотидных замен в генах, кодирующих супероксиддисмутазу, может влиять на оксидативный статус недоношенного ребенка и способствовать усилению патологического воздействия супероксид-анион радикала на ткань легкого.
Цель: изучить особенности полиморфизма Ala16Val гена супероксиддисмутазы 2 (SOD2) у детей с различной степенью тяжести бронхолегочной дисплазии, классической формы.
Материалы и методы. Обследовано 15 пациентов с диагнозом: Бронхолегочная дисплазия недоношенных, классическая форма. Молекулярно-гене-тическое исследование осуществляли с помощью тест-систем ООО НТП «Литех» методом ПЦР. Для оценки соответствия распределений генотипов ожидаемым значениям при равновесии Харди-Вайнберга использовали критерий х2 Пирсона.
Результаты. Анализ полиморфизма гена SOD2 в положении Ala16Val у пациентов с БЛД выявил следующее распределение. Частота гетерозиготного варианта А/V у пациентов составила 40%, монозиготного варианта V/V — 20% и варианта А/А — 40%, соответственно.
При изучении зависимости степени тяжести БЛД с выявленным распределением полиморфизмом гена SOD2 в положении Ala16Val установили следующее. При легкой степени БЛД тяжести (n=6) гетерозиготный вариант определялся у 66,6% пациентов, вариант А/А — у 33,3%. При средней степени тяжести БЛД (n=8) распределение полиморфизмов гена SOD2 в положении Ala16Val отмечалось в равной пропорции — по 37,5% между вариантами А/А и V/V, соответственно, и в 25% — при варианте А/V. При тяжелой степени тяжести БЛД (n=1) у пациента был выявлен полиморфизм А/А.
Заключение. Полученные данные не выявили ассоциации полиморфизма Ala16Val гена SOD2 с тяжестью течения классической формы бронхоле-гочной дисплазии у детей.
ДЕТЕКЦИЯ МУТАЦИЙ ПРИ МУКОВИСЦИ-ДОЗЕ В ГЕНЕ CFTR У НОВОРОЖДЁННЫХ ДЕТЕЙ В ХАНТЫ-МАНСИЙСКОМ АВТОНОМНОМ ОКРУГЕ - ЮГРЕ
Донников М.Ю.1,2, Мещеряков В.В.2, Колбасин Л.Н.1 'БУ ХМАО-Югры «Окружной кардиологический диспансер «Центр диагностики и сердечнососудистой хирургии», г. Сургут 2БУ ВО «Сургутский государственный университет», г. Сургут
Цель: ранняя молекулярно-генетическая диагностика мутаций в гене CFTR у новорождённых детей с повышенным уровнем иммунореактивного трип-синогена по результатам неонатального скрининга на муковисцидоз.
Задачи: разработка и тестирование комбинации молекулярно-генетических методов выделения ДНК из сухих пятен крови, ПЦР-амплификации 27 экзо-нов и экзон-интронных границ гена CFTR, проведение анализа кривых плавления высокого разрешения, селективное секвенирование экзонов с отличными от референсного паттернами плавления, детекция гомозиготных мутаций.
Материалы и методы: ДНК из сухих пятен крови выделяли набором "QIAamp DNA Micro kit" (Qiagen); анализ кривых плавления проводили с использованием ПО "Precision Melt Software" на приборе CFX96 (Bio-Rad), секвенирование проводилось на генетическом анализаторе "GenomeLab GeXP" (Beckman-Coulter).
Результаты: проведен ретроспективный анализ 40 образцов ДНК у детей с подтвержденным диагнозом муковисцидоз и установленными мутациями в гене CFTR. В работе использовали ДНК, выделенную из сухих пятен крови, полученных при проведении неонатального скрининга в ХМАО в период 2009—2016 гг. Спектр выявленных мутаций по частоте аллелей распределялся следующим образом: 1) delF508 — 52,5%; 2) Е92К — 10,0%; 3) dele2,3 - 3,75%; 4) 1677delTA, L138ins, S466X — по 2,5%; 3) 21 редкая мутация (R31C, 175delC, L218X, L233R, W277R, R347H, G509N, G542X, L568F, E527R, R668C, Y849X, R1066C, R1070W, W1282X, N1303K, W1310X, 394delTT, 621+1G>T, G1222VfsX44, 1342-13G/T) -по 1,25%. Проблема детекции гомозиготных мутаций (в частности, для самой частой мутации delF508) была решена путем гетерозиготной конверсии (смешивания ДНК исследуемого образца с ДНК дикого типа). Таким образом, чувствительность и специфичность комбинации используемых методов составила 100%; эффективность методики — 98% (не выявляются протяженные делеции/дупликации гена).
Заключение: разработанная методика потенциально позволяет в течение 2—3 рабочих дней на уровне региональной медико-генетической консультации, оснащенной оборудованием для проведения
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИК ПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 2017; 62:(4) ROSSIYSKIY VESTNIK PERINATOLOGY IPEDIATRII, 2017; 62:(4)
ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ПЕДИАТРИИ И ДЕТСКОЙ ХИРУРГИИ
ПЦР и секвенирования, выявлять до 98% мутаций в гене CFTR без дополнительного вызова пациента для забора венозной крови, используя в качестве материала только пятна сухой крови из пятки новорождённого, полученной при проведении неонатального скрининга.
ВОЗМОЖНОСТИ МОДИФИЦИРОВАННОЙ ТЕРАПИИ ДЕТЕЙ С ВИРУСИНДУЦИРОВАННЫМ ФЕНОТИПОМ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ
Зайцева О.В.1, Снитко С.Ю.1, Локшина Э.Э.1,
Малиновская В.В.2, Дмитриева Е.В.2
'ФГБОУ ВО МГМСУ им. Евдокимова А.И.
Минздрава России, г. Москва
2ГУ НИИ эпидемиологии и микробиологии
почетного академика Н.Ф. Гамалеи РАМН, г. Москва
Высокий уровень заболеваемости бронхиальной астмой (БА) отмечается во всем мире, одним из самых частых фенотипов БА у детей является вирусин-дуцированная астма (ВИБА).
Цель: изучить иммунный статус у детей с ВИБА и оценить эффективность комплексной терапии с включением рекомбинантного а2Ь-интерферона (ИФН) и препаратов антиоксидантного действия (ПАД) (Виферон®).
Материалы и методы: В исследование были включены 39 детей с ВИБА в возрасте от 3 до 7 лет. 1 группа — дети с ВИБА на фоне ОРВИ (п=28), 2 группа — дети с ВИБА в стадии ремиссии (и=11). Дети 1А группы получали комплексную терапию БА с включением рекомбинантного а2Ь-ИФН и ПАД в течение 10 дней, дети 1В и 2 группы получали только стандартную базисную терапию БА. Комплекс обследования детей включал: показатели субпопуляций лимфоцитов периферической крови, индекс имму-норегуляции, ИФН, общий ^Е, показатели анти-оксидантной активности. Катамнез детей составил 6 месяцев.
Результаты: У всех детей с ВИБА отмечена дисфункция системы ИФН. У детей с ВИБА на фоне ОРВИ получены достоверно более низкие значения CD3+, CD3+CD8 по сравнению со 2 группой (р<0,05). Достоверной разницы в маркерах антиок-сидантной активности в изучаемых группах получено не было. На фоне комплексной терапии с включением рекомбинантного а2Ь-ИФН и ПАД в 1А группе выявлено достоверное повышение уровня ИФНа, уровней CD3+, CD3+CD4+, индекса иммунорегуля-ции, а также снижение уровня CD3-CD19+ и общего ^Е (¿<0,05). Комплексная терапия с включением рекомбинантного а2Ь-ИФН и ПАД привела к сокращению частоты вирусиндуцированных обострений (с 3,6±0,5 до 2,0±0,7 эпизодов в течение 6 месяцев) и продолжительности приступов БА у 78% детей, способствовала достижению контроля над заболеванием у 66,6% детей.
Выводы: Выявленные изменения продемонстрировали признаки дисфункции иммунной системы в группе детей с вирусиндуцированной БА. Включение рекомбинантного а2Ь-ИФН и ПАД в комплексную терапию детей с ВИБА оказывает положительный терапевтический и протективный эффект, повышает резистентность к респираторным инфекциям и снижает частоту и длительность виру-синдуцированных обострений БА.
ЗНАЧЕНИЕ МЕТОДА КОМПЬЮТЕРНОЙ БРОН-ХОФОНОГРАФИИ В ДИАГНОСТИКЕ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ У ДЕТЕЙ
Кузнецова М.С., Гусева О.Е., Савицкая Е.А., Лебедько О.А.
Хабаровский филиал ДНЦ ФПД — НИИ ОМиД, г. Хабаровск
Введение. Ограниченные возможности использования объективных методов оценки функции внешнего дыхания зачастую приводят к гиподиагностике бронхиальной астмы у дошкольников. Интерес к частотно-амплитудным характеристикам дыхательной волны позволил создать метод компьютерной брон-хофонографии (БФГ), который прост в использовании и не требует обучения больного специальным дыхательным маневрам.
Цель: выявление объективных критериев нормы и информативность метода БФГ при диагностике бронхиальной обструкции у детей с бронхиальной астмой.
Материалы и методы. Оценка акустических параметров проводилась с помощью аппаратно-диагно-стического комплекса «Паттерн» (Россия) методом БФГ Сканирование респираторного цикла осуществлялось в частотном диапазоне от 200 Гц до 12600 Гц. Для подтверждения наличия бронхообструктивного синдрома дополнительно обследовали методом импульсной осциллометрии (ИОМ) с помощью диагностической установки MasterScreen IOS (Германия). В исследование были включены две группы детей в возрасте 3—6 лет: 1 группа — соматически здоровые (и=166), 2 группа — дети с бронхиальной астмой в периоде обострения (и=40).
Результаты. У соматически здоровых детей показатели спокойного дыхания в базовом частотном диапазоне (0,2—1,2 кГц — 95% ДИ) составили 1,25/8,71 мкДж, в общем диапазоне (1,2—12,6 кГц — 95% ДИ) — 0,11/3,57 мкДж, в высокочастотном (5,0— 12,6 кГц — 95% ДИ) — 0,01/0,36 мкДж, в среднечастот-ном (1,2-5,0 кГц — 95% ДИ) — 0,10/3,8 мкДж. У детей с клиническими симптомами бронхиальной обструкции определены значимые амплитуды спектральной мощности в высокочастотном диапазоне, показатели составляли 4,00/8,70 мкДж. Сопоставление данных БФГ у исследуемых групп выявило существенные различия акустических параметров в высокочастот-
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИК ПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 2017; 62:(4) ROSSIYSKIY VESTNIKPERINATOLOGIIIPEDIATRII, 2017; 62:(4)
