CC BY
55
Акушерство и гинекология
удК 612.2/.3 : 616.523 - 036.65 : 577.175.53/.534 и.в. довжикова
дегидроэпиандростерон и кортизол в плаценте при обострении герпетической инфекции
Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН, г. Благовещенск
В развитии патологии беременной, плода и новорожденного большое место отводится герпес-вирусной инфекции. Вирусы герпеса обладают способностью перемещаться в организме, вовлекая в инфекционный процесс различные органы и системы. Зародышевые ткани являются благоприятной средой для репликации вирусных частиц, которые могут оказывать как прямое, так и косвенное повреждающее на них действие. одним из проявлений этого процесса может явиться нарушение метаболизма гормонов в плаценте [3, 5].
одним из стероидных гормонов, по содержанию которого оценивают течение беременности и состояние плода, является дегидроэпиандростерон, предшественник для синтеза эстрогенов. Работы многих авторов касаются взаимосвязи этого гормона с кортизолом. кортизол обладает мощным многосторонним воздействием на обмен жиров, белков, углеводов [7].
В литературе недостаточно освещены вопросы, касающиеся особенностей влияния герпетической инфекции на содержание стероидных гормонов во время беременности. имеются лишь единичные работы, рассматривающие гормональный профиль в плазме периферической крови [1, 2, 5]. Работ же, посвященных изучению гомоге-ната плаценты, а также исследованию ферментов, отвечающих за гормоногенез, при обострении герпетической и других инфекций, в доступной нам современной литературе мы не обнаружили.
Цель нашей работы — проанализировать содержание кортизола и дегидроэпиандростерона в плаценте при обострении герпес-вирусной инфекции во время беременности.
материалы и методы
Материалом для исследования послужили 32 зрелые плаценты, взятые при родах от практически здоровых ма-
резюме
Биохимическими и гистохимическими методами выявлено повышение содержания кортизола и снижение количества дегидроэпиандростерона в ворсинчатых хорионах и плацентах от женщин, перенесших обострение герпетической инфекции во время беременности.
Ключевые слова: дегидроэпиандростерон, кортизол, плацента, герпес.
I.V. Dovzhikova
dehydroepiandrosterone and Cortisol in the placenta at the time of acute condition of herpetic infection
Far eastern research center of respiratory pathology and physiology Siberian Branch of Russian Academy of Medical Sciences, Blagoveshchensk
Summary
By biochemical and histochemical methods, the increase of cortisol and the decrease of dehydroepiandrosterone in the villous chorions and placentas of women suffering from acute herpetic infection during pregnancy were revealed.
Key words: dehydroepiandrosterone, cortisol, placenta, herpes.
терей (14 случаев) и женщин, перенесших герпетическую инфекцию в третьем триместре беременности (титр антител — 1:12 800) (18 случаев). А также 3 3 ворсинчатых хориона, полученных при проведении абортов от беременных с обострением герпеса (15 случаев) и не имевших такового (18 случаев). Титр антител к вирусу герпеса — 1:12800.
Таблица 1
содержание дегидроэпиандростеронсульфата в гомогенате плаценты при обострении герпетической инфекции (мкмоль/л)
Группа исследования Ворсинчатый хорион 8-9 нед. Ворсинчатый хорион 9-10 нед. Зрелая плацента
Контрольная 2,09±0,09 2,25±0,06 1,40±0,03
Герпетическая инфекция 1,01±0,07 1,17±0,02 0,70±0,02
В зависимости от срока и течения беременности материал был разделен на группы: контрольную и основную. Для исключения влияния других факторов помимо герпетической инфекции, мы не включали женщин, имеющих иные острые и хронические инфекционные заболевания.
Диагностику герпетической инфекции осуществляли путем определения антител класса М и G к вирусу простого герпеса иммуноферментным методом с помощью стандартных тест-систем ЗАо «Вектор-Бест» (г. Новосибирск) на аппарате спектрофотометр «Stat-Fax 2100» (USA). исследование гормонов дегидроэпиандростерон-сульфата и кортизола в плацентарном гомогенате проводили методом иммуноферментного анализа, используя наборы ЗАо «Алкор Био» (г. Санкт-Петербург) на спектрофотометре «Stat-Fax 2100» (USA).
Плаценту забирали в течение 10-15 мин после родов. Ee поверхность со стороны базальной пластинки отмывали большим количеством физиологического раствора (ФР). Плодовая часть плаценты срезалась скальпелем пластинками площадью до 2-3 см, толщина срезаемого слоя не превышала 1 мм. кусочки ткани помещали в 200 мл ФР, отмывали от клеток крови, перемешивая 15 мин на магнитной мешалке. Для получения экстрактов отмытые кусочки плаценты слегка подсушивали на фильтровальной бумаге, взвешивали, растирали пестиком в фарфоровой ступке и гомогенизировали до однородной кремообразной массы. к полученному гомогенату добавляли ФР в объеме, равном изначальному весу ткани (на 1 г — 1 мл ФР). Взвесь помещали в пластиковые пробирки Falcon и подвергали замораживанию при -20°С в течение суток. Затем гомогенат размораживали и центрифугировали при 4000 об/мин при температуре +4°С. надосадочную жидкость разливали мелкими аликвотами и хранили при -20°С до проведения иФА.
определение 11 ß-гидроксистероиддегидрогеназ производилось по методу З. лойда [4] в модификации лаборатории механизмов этиопатогенеза и восстановительных процессов дыхательной системы при НЗЛ ТУ ДНЦ ФПд Со РАМН. Субстратом для выявления 11 ß-гидроксис-тероиддегидрогеназы II типа являлись 0,1 М растворы гидрокортизона («Hemofarm», Сербия) и 11 ß-гидрокси-этиохоланолона («Serva», USA). Для определения локализации энзима в качестве акцептора применялась соль тетразолия фирмы «ICN Biomedicals» в конечной концентрации 5 мМ. Как ко-фактор использовали НАДФ в конечной концентрации 1 мМ. инкубационный раствор готовился на основе 0,1 М фосфатного буфера рН 7,4. Инкубацию проводили при 37°С в течение 30 мин. По окончании инкубации срезы промывали дистиллированной водой, фиксировали в 10% нейтральном формалине и заключали в глицерин-желатин. определение фермента
Таблица 2
содержание кортизола в гомогенате плаценты при обострении герпетической инфекции (нмоль/л)
Группа исследования Ворсинчатый хорион 8-9 нед. Ворсинчатый хорион 9-10 нед. Зрелая плацента
Контрольная 154,8±1,67 161,7±1,85 395,3±1,51
Герпетическая инфекция 439,6±2,98 468,7±3,75 639,2±2,70
Примечание. Уровень достоверности р<0,001 для всех значений таблицы.
11 ß-гидроксистероиддегадрогеназы I типа производилось по аналогичной схеме, только субстратом для инкубационного раствора служил 0,1 М раствор 11 ß-кетоэтиохола-нолона («Serva», USA) соответственно. Для исключения участия других факторов в восстановлении тетразолиевой соли проводили контрольные опыты. Количество образующихся продуктов реакции проводили путем подсчета на программе компьютерной цитофотометрии методом измерения на стандартную единицу площади 0,01 (зонд) в 100 различных точках объекта. Для исключения участия других факторов в восстановлении тетразолиевой соли проводили контрольные исследования.
результаты и обсуждение
Было проведено исследование содержания дегидро-эпиандростерона в плацентарном гомогенате, полученном от женщин, перенесших обострение герпеса, которое показало существенное уменьшение количества данного гормона (табл. 1). Уровень этого гормона снижался практически в 2 раза. При обострении герпеса в первом триместре (8-9 нед. беременности) концентрация дегид-роэпиандростерона уменьшалась до 1,01±0,07 мкмоль/л (контроль — 2,09±0,09 мкмоль/л); на сроке 9-10 нед. — до 1,17±0,02 мкмоль/л (контроль — 2,25±0,06 мкмоль/л). В зрелой плаценте концентрация дегидроэпиандростеро-на после вспышки герпес-вирусной инфекции снизилась до 0,70±0,02 мкмоль/л (контроль — 1,40±0,03 мкмоль/л).
Основное физиологическое действие дегидроэпианд-ростерона связано с регуляцией различных звеньев репродуктивной системы [6, 7]. В эмбриональном периоде снижение его содержания приводит к нарушению процесса гормонообразования в плаценте. Изменение уровня эстрогенов считается одним из факторов развития плацентарной недостаточности, повышает степень риска для плода и негативно влияет на процесс родов [7].
При изучении влияния вспышки герпетической инфекции было установлено увеличение содержания кор-тизола в гомогенате плаценты (табл. 2). Исследование ворсинчатого хориона, после обострения герпетической инфекции в первом триместре беременности, показало значительное повышение уровня этого стероида в 2,8 раза. Его концентрация возрастала на сроке 8-9 нед. беременности до 439,6±2,98 нмоль/л (контроль — 154,8±1,67 нмоль/л) и до 468,7±3,75 нмоль/л на 9-10 нед. беременности (контроль — 161,7±1,85 нмоль/л). Возрастание титра антител к вирусу простого герпеса (1:12800) в третьем триместре при обострении герпетической инфекции сопровождалось ростом концентрации гормона в 1,6 раза (639,2±2,70 нмоль/л) по сравнению с контролем (395,3±1,51 нмоль/л).
Для выяснения возможной причины повышенного содержания гормона было решено проанализировать один из ключевых моментов обмена данного стероида: активность фермента, отвечающего за превращение кортизола в неактивный кортизон — 11 Р-гидроксистероиддегидро-геназы II типа. Гистохимически в контрольной группе энзим выявлялся в симпласте ворсинок плаценты, начиная с середины второго месяца внутриутробного развития. Цитофотометрически его содержание в контроле составило 126,70±2,79 усл. ед. В плацентах беременных после вспышки герпесной инфекции наблюдалось снижение активности 11 Р-гидроксистероиддегидрогеназы (36,72±1,59 усл. ед.). Это отражалось на содержании глюкокортикоид-ных гормонов, так как недостаточность 11 Р-гидроксисте-роиддегидрогеназы сказывается на их гиперпродукции.
Нами была проанализирована и активность фермента, отвечающего за другое направление превращений глюко-кортикоидов: 11-кето-формы в 11-гидроксильную форму
— 11 Р-гидроксистероиддегидрогеназы I типа (11Р-ке-тоэтиохоланолондегидрогеназы). В контрольной группе активность энзима в симпласте и цитотрофобласте ворсинок хориона начинала проявляться с 7 нед. гестации (41,0±0,85 усл. ед.). По мере увеличения срока беременности активность фермента нарастала. При обострении герпетической инфекции интенсивность гистохимической реакции на выявление 11 Р-гидроксистероиддегид-рогеназы данного вида резко возрастала (159,7±2,95 усл. ед.), что предполагает увеличение выработки кортизола.
Таким образом, вспышка герпетической инфекции сопровождалась изменениями в работе разных видов 11Р-гидроксистероиддегидрогеназ. Считается, что низкий уровень активности в плаценте ферментов, инакти-вирующих кортикостероиды, приводит к воздействию на плод высоких концентраций глюкокортикоидов [9, 10, 12, 15]. Высокий уровень кортизола в крови плода может привести к некоторым патологическим процессам во взрослом возрасте: гипертензии, диабету, ожирению [8-10, 13, 15]. Однако возможны и другие причины столь значительного повышения уровня кортизола. одним из соединений, способных изменять баланс глюкокортико-идов, считается и дегидроэпиандростерон. По данным литературы [6, 11], последний усиливает процесс их превращения в неактивные формы. Мы полагаем, что снижение уровня дегидроэпиандростерона, которое было отмечено при обострении герпетической инфекции, также являлось причиной увеличения уровня кортизола. Кроме этого, по мнению ряда ученых [11, 14] соотношение дегидроэпиандростерон/кортизол характеризует устойчивость организма к различным нарушениям (стресс, инфекция). В нашем случае это соотношение значительно уменьшалось. Так, при беременности 8-9 нед. в контрольной группе соотношение данных гормонов составило 0,0145±0,0008, при обострении герпетической инфекции — 0,0023±0,0001; при беременности 9-10 нед. в контрольной группе — 0,0139±0,001, при обострении герпетической инфекции — 0,0025±0,00007. В зрелой плаценте, взятой при родах в срок, в контрольной группе
— 0,0035±0,00015, при обострении герпетической инфекции — 0,0010±0,00009. Подобная ситуация создает
большую опасность для беременности, так как снижение устойчивости в соотношении гормонов влечет за собой развитие высокой степени риска (например, повышение чувствительности к другим инфекционным процессам).
Литература
1. Андриевская И.А. Морфофункциональная характеристика плаценты при нарушении обмена гормонов и биогенно-активных веществ у беременных с герпес-вирусной инфекцией: Автореф. дис. ... канд. биол. наук.
- Иркутск, 2004. - 21 с.
2. Базина М.И. Беременность и роды при внутриутробных инфекциях: Автореф. дис. . канд. мед. наук.
- Омск, 1999. - 20 с.
3. Вареница А.Н., Герасимова А.А., Демкин В.В. и др. Герпес-вирусная инфекция и беременность // Рос. вестник акушера-гинеколога. - 2006. - №5. - С. 8-11.
4. Лойда З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. - М.: Мир, 1982. 259 с.
5. Луценко М.Т., Довжикова И.В., Соловьева А.С. и др. Фетоплацентарная система при герпесной инфекции.
- Благовещенск, 2003. - 200 с.
6. Роживанов Р.В., Вакс В.В. Дегидроэпиандросте-рон: физиологическая роль и возможности применения в качестве медикаментозного средства // Проблемы эндокринологии. - 2005. - Т. 51, №2. - С. 46-51.
7. Шмагель К.В., Черешнев В.А. Стероидные гормоны: физиологическая роль и диагностическое значение в период беременности // Успехи физиологических наук.
- 2004. - Т. 35, №3. - С. 61-71.
8. Alexander В.Т. Fetal programming of hypertension // Am. J. Physiol. Regulatory Integrative Сотр. Physiol.
- 2006. - Vol. 290, №1. - P.R1 - R10.
9. Dodic M., Peers A., Coghlan J.P. et al. Can excess glucocorticoid, in utero, predispose to cardiovascular and metabolic deseasec in middle age? // Trends in Endocrinology and Metabolism. - 1999. - Vol. 10. - P. 86-91.
10. Dodic M., Hantzis V., Duncan J. et al. Programming effects of short prenatal exposure to cortisol // The FASEB Journal. - 2002. - Vol. 16, №9. - P. 1017-1026.
11. Hechter O., Grossman A., Chatterton R.T. Jr. Relationship of dehydroepiandrosterone and cortisol in disease // Med. Hypothes. - 1997. - Vol. 49, №1. - P. 85-91.
12. Moritz K.M., Johnson K., Douglas-Denton R. et al. Maternal glucocorticoid treatment programs alterations in the renin-angiotensin system of the ovine fetal kidney // Endocrinology. - 2002. - Vol. 143, №11. - P. 4455-4463.
13. Myatt L. Placental adaptive responses and fetal programming. // J. Physiol. - 2006. - Vol. 572, №1. - P.25-30.
14. Ozasa H., Kita M., Inoue T. et al. Plasma dehydroepiandrosterone-to- cortisol ratios as an indicator of stress in gynecologic patients // Gynecol. Oncol. - 1990.
- Vol. 37, №2. - P. 178-182.
15. Yang K. Placental 11 beta-hydroxysteroid dehydrogenase: barrier to maternal glucocorticoids // Reviews of Reproduction. - 1997. - Vol. 2. - P. 129-132.
Координаты для связи с автором: Довжикова И.В. e-mail: [email protected]
□□□
