CC BY
63
при наибольших концентрациях используемого соединения (1 мг/мл FeC + 40 мкг/мл DOX). При этом различия между группой FeC+DOX были статистически значимы по сравнению со всеми остальными используемыми группами.
При исследовании выживаемости опухолевых клеток в тесте с трипановым синим было показано, что максимальное количество мертвых (некротических) клеток и минимальное количество живых клеток наблюдается в группе с добавлением наночастиц железа в соединении с доксорубицином (85-92% мертвых клеток от
общего числа клеток). В то же время общее число клеток (живые + мертвые) в остальных группах ^ОХ; FeC) незначительно отличалось от группы FeC+DOX, а количество мертвых клеток в этих группах было значительно меньше.
Выводы. Полученные данные свидетельствуют о том, что наночастицы в соединении с доксорубицином способны более эффективно тормозить рост опухолевых клеток карциномы Эрлиха, чем один доксорубицин. При этом механизм гибели опухолевых клеток, по-видимому, связан с некротической гибелью клеток.
ЧАСТОТА МУТАЦИИ ГЕНА BRAF V600E(T1799A) ПРИ ПАПИЛЛЯРНОЙ КАРЦИНОМЕ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В СИБИРСКОМ РЕГИОНЕ РОССИИ
Е.Ю. БУРАВЛЕВА, Е.С. МАЛАХИНА, Е.А. ХРАПОВ, М.Л. ФИЛИПЕНКО
ИХБФМ СО РАН, г. Новосибирск
Актуальность. Рак щитовидной железы - наиболее частая опухоль эндокринной системы. В общей структуре онкологической заболеваемости злокачественные опухоли щитовидной железы составляют 1-3%. Наиболее распространенным морфологическим вариантом рака щитовидной железы является папиллярная карцинома, которая составляет 75% от всех случаев заболевания. Частота случайного выявления онкологических заболеваний щитовидной железы при лечении эутиреоидного узлового зоба составляет 0,4-6%, а частота опухолей при токсическом зобе 0,5-21,5%. Диагностика гиперпластических и опухолевых процессов в щитовидной железе затруднена. В начальных стадиях болезни ошибки диагностики составляют 50-100%, а при поступлении больных в клинику наблюдаются в 33,2-85% случаев. В связи с этим уделяется большое внимание различным молекулярным маркерам, характеризующим биологические свойства опухоли. Молекулярные дефекты, найденные в папиллярной карциноме, выявлены в генах, кодирующих рецептор тиро-зинкиназы (RET,NTRK1) и в двух внутриклеточных эффекторах: ГТФ-связанном белке RAS, серин-треониновой киназе BRAF. Соматическая мутация в гене BRAFV600E(T1799) расценивается как наиболее распространенный молеку-
лярный дефект при спорадической папиллярной карциноме (39-83%), характеризует более агрессивное течение заболевания (метастазирование, экстратиреоидную инвазию) и определяется уже на I стадии опухолевого процесса.
Цель. Разработка метода выявления с помощью «real-time» ПЦР и исследование частоты соматической мутации гена BRAFV600E(T 1799A) при папиллярной карциноме щитовидной железы в Западно-Сибирском регионе России.
Материал и методы. Материалом для молекулярно-генетического исследования послужили 103 аспирата из узловых образований щитовидных желез, полученные при ТАБ под контролем УЗИ. Соматическую мутацию BRAFV600E определяли методом двунаправленной аллельспе-цифичной амплификации с детекцией результатов в режиме реального времени («real-time» ПЦР), ПДРФ-анализом (полиморфизм длины рестрикционных фрагментов) продуктов полимеразной цепной реакции специфического участка гена BRAF с использованием подобранных праймеров и соответствующего фермента рестрикции. Результаты анализа верифицировали прямым секвенированием полученных фрагментов ПЦР.
Результаты. Всего обследовано 103 пациента, средний возраст 55+3 года. В группу сравнения включили 8 больных (7,8%) с установленным ци-
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2009. Приложение № 1
тологическим диагнозом папиллярная карцинома. Группу контроля составили 95 человек с прочими цитологическими вариантами (фолликулярная опухоль -20,4%, медуллярная карцинома - 2%, АИТ - 9,7%, коллоидный зоб - 61,2%). Показано, что
метод выявления мутации BRAFV600E с помощью «real-time» ПЦР обладает высокой специфичностью и чувствительностью. Частота соматической мутации составила 50%, что соответствует аналогичным показателям для европейской популяции.
АНАЛИЗ АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ ФОЛАТНОГО ЦИКЛА С ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬЮ К РАЗВИТИЮ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ В ЗАПАДНО-СИБИРСКОМ РЕГИОНЕ РОССИИ
А.С. ВАЙНЕР1, Н.А. ЗАРУБИНА2, Е.Н. ВОРОНИНА3, У.А. БОЯРСКИХ3, Т.В. СИНКИНА2, А.Ф. ЛАЗАРЕВ2, В.Д. ПЕТРОВА2, М.Л. ФИЛИПЕНКО3
Новосибирский государственный университет1,
Алтайский филиал Российского онкологического научного центра им. Н.Н. Блохина РАМН, г. Барнаул2 Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, г. Новосибирск3
Актуальность. Метаболизм фолатов является важным звеном клеточного метаболизма: производные фолиевой кислоты поставляют одноуглеродные фрагменты для таких жизненно важных процессов, как регенерация метионина, превращение уридинмонофосфата в тимидинмо-нофосфат, биосинтез пуриновых нуклеотидов, метилирование ДНК. Гены фолатного цикла могут быть рассмотрены в качестве генов-кандидатов развития онкологических заболеваний, поскольку недостаточное метилирование ДНК может приводить к инактивации протоонкогенов и нарушению хромосомной сегрегации, а подавление синтеза тимидилата - к ошибочной встройке dUMP и повреждению ДНК.
Целью нашей работы являлось изучение роли аллельных вариантов генов фолатного цикла C677T и A1298C гена MTHFR (метилен-тетрагидрофолатредуктазы), A66G гена MTRR (редуктазы метионин-синтазы), G1258A гена MTHFD (метилентетрагидрофолатдегидроге-назы), T833C/844INS68 гена CBS (цистатионин-Р-синтазы) и A2756G гена MTR (метионин-синтазы) в формировании предрасположенности к развитию рака молочной железы.
Материал и методы. Определение полиморфных вариантов генов MTHFD и CBS проводилось методом ПЦР-ПДРФ анализа, а генов MTHFR, MTRR и MTR - методом ПЦР в режиме реального времени с использованием
конкурирующих TaqMan-зондов, комплиментарных полиморфной последовательности ДНК. Группа женщин со спорадической формой рака молочной железы и контрольная группа были сформированы в рамках эпидемиологического исследования, проводимого Алтайским филиалом РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН и Алтайским краевым онкологическим диспансером. Все женщины принадлежали к европеоидной расе русской этнической группы и проживали на территории Алтайского края РФ. В экспериментальную выборку было включено 670 больных в возрасте от 45 лет (средний возраст - 56 ± 8 лет). Контрольная группа состояла из 480 женщин (средний возраст - 54 ± 13), случайно выбранных из списка доноров крови и не имеющих рака молочной железы.
Результаты. И в контрольной, и в экспериментальной группах распределение генотипов для всех исследуемых полиморфных локусов соответствовало распределению Харди-Вайнберга. Нами не было выявлено статистически значимых различий частоты встречаемости аллелей или генотипов полиморфных локусов исследуемых генов между контрольной группой и группой больных раком молочной железы.
Выводы. Полученные нами результаты могут говорить о том, что данные полиморфизмы не оказывают влияние на развитие рака молочной железы в Западно-Сибирском регионе России.
СИБИРСКИМ ОНКОЛОГИЧЕСКИМ ЖУРНАЛ. 2009. Приложение № 1
