CC BY
50
ИММУНОЛОГИЯ. ИММУНОГЕНЕТИКА (IMMUNOLOGY. IMMUNOGENETICS)
Вестник Челябинского государственного университета.
2015. № 21 (376). Биология. Вып. 3. С. 9-11.
УДК 575.224.22
ББК 28.04-52.5
ЧАСТОТА МУТАЦИИ CCR5del32 СРЕДИ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ДОНОРОВ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТНОЙ СТАНЦИИ ПЕРЕЛИВАНИЯ КРОВИ
А. А. Бархатова2, И. В. Шмунк1'4, Г. А. Рудакова , Т. А. Суслова1'3
ФГБОУ ВПО «Челябинский государственный университет», Челябинск, Россия 2МУЗ «Верхнеуральская центральная районная больница», Верхнеуральск, Россия 3ГБУЗ «Челябинская областная станция переливания крови», Челябинск, Россия 4ГБУЗ «Челябинская областная клиническая больница», Челябинск, Россия
Представлены данные о частоте встречаемости аллеля ССЯ^е132. Аллельные варианты генетической системы ССЯ5 определялись полимеразной цепной реакцией в режиме реального времени с использованием набора реагентов производства «ДНК-технология» (Россия). Статистические расчёты проводились по стандартным генетическим программам. Определена частота мутантного аллельного варианта ССЯ^е132 у потенциальных доноров регистра доноров стволовой клетки Челябинской областной станции переливания крови.
Ключевые слова: ВИЧ, ССЯ5, полиморфизм.
Введение. Одна из самых серьёзных проблем здравоохранения на сегодняшний день — пандемия ВИЧ. Более 30 млн чел. живут с этой инфекцией, и их количество продолжает увеличиваться [1].
Устойчивость человека к данному вирусу и предрасположенность к развитию СПИДа зависят от ряда генов. В частности, это гены рецепторов хемокинов CCR5 и CCR2, а также ген хе-мокина SDF1. Для аллелей ССИ^е132, ССЯ2-641 и SDF1-3'A показана наиболее достоверная ассоциация генотипа с устойчивостью или восприимчивостью к ВИЧ-инфекции. Защитный эффект первых двух полиморфизмов носит доминантный характер, последнего же — рецессивный. Результат: повышенная устойчивость носителей определённых комбинаций аллелей указанных генов к развитию СПИДа [3].
В последние годы особенно интересным направлением является потенциальная возможность лечения СПИДа, что основано на пересадке ВИЧ-резистентных гемопоэтических стволовых клеток с мутацией CCR5de132. Для такого лечения необходимы гомозиготные носители данной мутации.
У таких «мутантов» нарушен синтез хемоки-новых рецепторов, через которые вирус обычно проникает в Т-хелперные лимфоциты. Согласно
литературным данным, в России гетерозиготными мутантами являются более 10 % населения, но невосприимчивы к ВИЧ лишь гомозиготы, ко -торых в нашей стране всего 1-2 °% [2; 4].
Очевидно, что необходимо создание регистра потенциальных доноров ВИЧ-устойчивых гемопоэтических клеток на базе уже существующих регистров доноров.
Цели и задачи исследования. Целью данного исследования является поиск доноров, устойчивых к инфицированию вирусом иммунодефицита человека, то есть носителей мутации CCR5del32 среди имеющихся в базе данных потенциальных доноров стволовых клеток Челябинской областной станции переливания крови (ЧОСПК).
Материалы и методы исследования. Исследование проводили в группе потенциальных доноров стволовых клеток русской национальности в третьем поколении, не связанных кровным родством.
Для исследования использовали образцы ДНК, выделенные набором реактивов для выделения ДНК (Protrans, Германия). Генотипиро-вание проводили методом ПЦР в режиме реального времени на термоциклере Bio-Rad CFX96 Touch (США) с применением тест-системы, разработанной И. А. Кофиади (Институт иммунологии ФМБА России).
10
А. А. Бархатова, И. В. Шмунк, Г. А. Рудакова, Т. А. Суслова
Для расчёта частоты встречаемости аллелей использована формула f = п / 2И [3].
Результаты исследования. На наличие мутации CCR5del32 проверено 89 доноров, из них выявлено носителей мутации: 8 гетерозигот (9 %) и 1 гомозигота (1 %).
Частота встречаемости аллелей и генотипов представлена в таблице.
На рисунке представлено распределение частот аллеля ССИ^е132 в популяциях, изученных И. А. Кофиади; серым цветом выделен результат нашего исследования: встречаемость 0,06 для русских в третьем поколении, проживающих на территории Челябинской области.
Полученные нами данные сопоставимы с аналогичными данными в популяциях Российской Федерации, согласно которым частота гомозиготных носителей мутантного аллеля составляет 1 %, а гетерозиготных — 5-10 %.
Частота аллелей и генотипов генетической системы CCR5 в популяции русских, доноров ЧОСПК
Параметр Частота генотипа/аллеля
Мутантный аллель CCR5del32 0,06
Нормальный аллель CCR5 ins 0,94
Генотип CCR5 ins\ ins 0,90
Генотип CCR5 ins\ del32 0,09
Генотип CCR5 del32\ del32 0,01
Вывод. В связи с низкой частотой гомозиготных носителей мутации CCR5del32 необходим поиск таких доноров в российских регистрах, насчитывающих десятки тысяч доноров. Подобное исследование впервые проводилось среди доноров регистра Челябинской областной станции переливания крови.
Распределение частот аллеля CCR5del32 Список литературы
1. ВИЧ-инфекция [Электронный ресурс] : информ. бюл. № 38. - М., 2013. - URL: http://hivrussia.ru/ files/bul_38.pdf
2. Зубов, В. В. Перспективы создания регистра ВИЧ-резистентных доноров / В. В. Зубов, Ю. Г. Иоффе, Д. Ю. Ключников // Биомика. - 2014. - Т. 6, № 1. - С. 52-63.
3. Кофиади, И. А. Генетическая устойчивость к заражению ВИЧ и развитию СПИД в популяциях России и сопредельных государств : автореф. дис. ... канд. биол. наук / И. А. Кофиади. - М., 2008. - 23 с.
4. ВИЧ-инфекция в Российской Федерации в 2013 г. [Электронный ресурс] : справка. - URL: http:// www.hivrussia.org/files/spravka311213.doc
Сведения об авторах
Бархатова Анастасия Анатольевна — биолог клинико-диагностической лаборатории Верхнеуральской центральной районной больницы, Верхнеуральск, Россия. [email protected]
Шмунк Ирина Васильевна — кандидат биологических наук, биолог лаборатории клинической микробиологии Челябинской областной клинической больницы, доцент кафедры микробиологии, иммунологии и общей биологии Челябинского государственного университета, Челябинск, Россия. [email protected]
Частота мутации CCR5del32 среди потенциальных доноров стволовых клеток.
11
Рудакова Галина Аркадьевна — главный врач Челябинской областной станции переливания крови, Челябинск, Россия. [email protected]
Суслова Татьяна Александровна — кандидат медицинских наук, заведующая отделом молекулярно-био -логической диагностики Челябинской областной станции переливания крови, доцент кафедры микробиологии, иммунологии и общей биологии Челябинского государственного университета, Челябинск, Россия. Ыа_сИе1@ mai1.ru
Bulletin of Chelyabinsk State University. 2015. No. 21 (376). Biology. Issue 3. Pp. 9-11.
THE FREQUENCY OF CCR5DEL32 MUTATION
IN STEM CELL POTENTIAL DONORS OF CHELYABINSK REGION BLOOD STATION
A. A. Barkhatova
Verkhneuralsk Central District Hospital, Verkhneuralsk, Russia. [email protected]
I. V. Shmunk
Chelyabinsk Regional Hospital, Chelyabinsk State University, Chelyabinsk, Russia. [email protected]
G. A. Rudakova
Chelyabinsk Regional Transfusion Station, Chelyabinsk, Russia. [email protected]
T. A. Suslova
Chelyabinsk Regional Transfusion Station, Chelyabinsk State University, Chelyabinsk, Russia. [email protected]
The authors present the data on allele CCR5del32 frequency in this article. Allelic variants of the CCR5 genetic system were defined by PCR Real Time with the reagent kit of "DNA-technology". Statistical calculations were performed by standard genetical programs. The frequency of mutant allele variant CCR5del32 was determinated for potential donors of Stem cell donor Registry of GBUZ "Chelyabinsk Regional Blood Transfusion".
Keywords: HIV, CCR5, polymorphism.
References
1. HIV. Newsletter no. 38. Available at: http://hivrussia.ru/files/bul_38.pdf, accessed 15.10.2015. (In Russ.).
2. Zubov V.V., Joffe Yu.G., Kluchnikov D.Yu. Perspektivy sozdaniya registra VICh-rezistentnykh donorov [The prospect of creating a register of HIV-resistant donor]. Biomika [Biomika], 2014, vol. 6, no. 1, pp. 52-63. (In Russ.).
3. Kofiadi I.A. Geneticheskaya ustojchivost' k zarazheniyu VICH i razvitiyu SPID v populyaciyakh Rossii i sopredel 'nykh gosudarstv [Genetic resistance to HIV infection and development of AIDS in populations of Russia and Neighboring Countries. Abstract of thesis]. Moscow, 2008. (In Russ.).
4. VICH-infekciya v Rossijskoy Federacii v 2013 g. [Enquiry "HIV infection in the Russian Federation in 2013"]. Available at: http://www.hivrussia.org/files/spravka311213.doc, accessed 15.10.2015. (In Russ.).
