CC BY
26
УДК 619:618.15,19:579.62:636.2
Шуманськнй Ю.1., к.вет.н. ([email protected]) Федоров О.П., мол.наук. сп. ([email protected]) Киричук Т.А., пошукач © Тернопыъсъка дослгдна станщя, Тернопыъ, Украгна
БЮПЛ1ВКА У ВЕТЕРИНАРНОМУ АКУШЕРСТВ1 - ОСОБЛИВА ОРГАН13АЦ1Я ЖИТТЯ
Устатт1 наведет дат про застосування ¡муностимулюючого препарату для кор1в у сухосттний перюд та змти мшрофлори молочног залози та тхви коргв, здатност1 видгленог мтрофлори формувати мгкробну бгоплгвкку. Метою нашог роботы було визначити склад мтрофлори тхви та молочног залози кор1в у пер1од сухостою при застосувант ¡муностимулюючого препарату "СтоГа" та здаттстъ мтрофлори утворювати бюпл1вку на абюгенних поверхнях. Вивчено здаттстъ мтрооргатзм1в формувати бюпл1вки та визначено гх щыътстъ у чашках Петр1, за внесения добовог тест-культуру бактерш у концентрацИ 105 КУО/см3, з наступним додаванням 5,0 см3 МПБ та ткубуванням за £ 30 °С протягом 24-48 год. Запропоновано оцтювати здаттстъ формувати бюпл1вки вгзуалъно та мжроскотчно, а щыътстъ бюпл1вок визначати в одиницях, спектрофотометрично, за оптичною густиною промивного розчину спирту — до 0,5 од. низъка щыътстъ, в/д 0,5 до 1 од. — середня, в/д 1 — висока.
Резулътати проведеного дослгдження показали, що при застосувант ¡муностимулюючого препарату в оргатзм1 тварини активуютъся захист властивост1 слизових оболонок молочног залози г тхви коргв, про що свгдчитъ зростання р1вня гх нормалъног мтрофлори. Здаттстъ мтрооргатзм1в утворювати бюпл1вки на бюгенних г абюгенних поверхнях суттево вгдргзняетъся та залежитъ в/д видумгкрооргангзмгв.
Ключов1 слова: корови, сухосттний пергод, молочна залоза, тхва, мжрофлора, гмуностимулююч1 препарати, мгкробна бгоплгвка.
УДК 619:618.15,19:579.62:636.2
Шуманский Ю.И., Федоркив А.П., Киричук Т.А.
Тернополъская опытная станция, Тернополъ, Украина
БИОПЛЕНКА В ВЕТЕРИНАРНОМ АКУШЕРСТВЕ - ОСОБЕННАЯ
ОРГАНИЗАЦИЯ ЖИЗНИ
В статье приведены данные о применении иммуностимулирующего препарата для коров в сухостойных период и изменения микрофлоры молочной железы и влагалища коров, способности выделенной микрофлоры формировать микробную биопливкку. Целью нашей работы было определить состав микрофлоры влагалища и молочной железы коров в период сухостоя при применении иммуностимулирующего препарата "Стога" и способность микрофлоры образовывать биопленку на абиогенных поверхнях. Изучено
© Шуманський Ю.1., Федорюв О.П., Киричук Т.А., 2014
406
способность микроорганизмов формировать биопленки и определены их плотность в чашках Петри, за внесение суточной тест-культуру бактерий в концентрации 105 КОЕ / см3, с последующим добавлением 5,0 см3 МПБ и инкубирования no t 30 ° С в течение 24-48 часов. Предложено оценивать способность формировать биопленку визуально и микроскопически, а плотность биопленок определять в единицах, спектрофотометрически, по оптической плотности промывочного раствора спирта - до 0,5 ед. низкая плотность от 0,5 до 1 ед. - Средняя, от 1 - высокая.
Результаты проведенного исследования показали, что при применении иммуностимулирующего препарата в организме животного активируются защитные свойства слизистых оболочек молочной железы и влагалища коров о чем свидетельствует рост уровня их нормальной микрофлоры. Способность микроорганизмов образовывать биопленки на биогенных и абиогенных поверхностях существенно отличается и зависит от вида микроорганизмов.
Ключевые слова: коровы, сухостойных период, молочная железа, влагалище, микрофлора, иммуностимулирующие препараты, микробная биопленка.
UDC 619:618.15,19:579.62:636.2
Shumanskyy Y.I., Fedorko O.P., Kirichuk T.A.
Ternopil Research Station, Ternopil, Ukraine
BIOFILM IN VETERINARY OBSTETRICS - A SPECIAL ORGANIZATION OF LIFE
The article presents data on the use of immune-boosting drug for cows in the dry period and changes in the microflora of breast and vagina of cows, the ability to form microbial flora isolated bioplivkku. The aim of our study was to determine the composition of the microflora of the vagina and breasts dead cows during the application of immunostimulatory drugs "stacks" and the ability of microorganisms to form bioflm on abiogenically poverhnyah.Vyvcheno ability of microorganisms to form biofilms and their density determined in petri dishes by making daily test culture bacteria at a concentration of 105 CFU / cm 3, followed by the addition of 5.0 cm3 MPB and incubating for t 30 ° C for 24-48 h. Proposed that the ability to form bioplivkyvizualno and microscopically, and the density of biofilms determine in units spectrophotometer, the optical density of wash solution of alcohol - up to 0.5 units. low density of 0.5 to 1 unit. - average, 1 - high.
Results of the study showed that the application of immunostimulatory drugs in the animal activated the protective properties of the mucous membranes of breast and vagina cows as evidenced by the growth of their normal microflora. The ability of microorganisms to form biofilms on the surfaces of biogenic and abiogenic significantly different and depends on the type of microorganisms.
Key words: cows, dry period, breast, vagina, microflora, immune-boosting drugs, microbial biofilm.
Вступ. У структур! акушерсько-гшеколопчно! патологи 60-80% займають запальш захворювання. Важливу роль у виникненш запальних процеавяк статево! сфери так i молочно! залози ввдграе мжрофлора. У nixBi мютиться
407
велика кшькють мжрооргашзм1в, багато з яких знаходяться в ствдружносп. Внаслщок порушення нормально! мшрофлори виникають pi3Hi запальш процеси, що призводить до ïx хрошзаци та виникнення неплщност1 [2,9]. Для боротьби i3 даними захворюваннями використовують антимжробш препарата р1зних груп i, незважаючи на великий виб1р i широкий спектр антим1кробно1 дп останшх, питания ефективност1 л1кування залишаеться актуальним [7]. Одним i3 пояснень низького ефекту вщ застосування антибютиюв е утворення мжрооргашзмами мжробних бюпл1вок. Така оргашзащя забезпечуе ïï ф1зюлопчну i функцюнальну стабшьшсть i, отже, е запорукою конкурентного виживання в еколопчнш Himi [1].
Важливо звернути увагу на те, що у формуванш Bcix ушкальних структур бюпл1вки безпосередня роль належить самому оргашзму. Коли слабшае ¿мунний захист пщ час хвороби, при ¿мунних порушеннях пошкоджуеться i сама бюпл1вка [3,8].
Метою нашо*1 роботи було визначити склад мжрофлори шхви та молочно! залози KopiB у перюд сухостою при застосуванш ¿муностимулюючого препарату "СтоГа" та здатшсть мжрофлори утворювати бюпл1вку на абюгенних поверхнях.
Матер1али i методи. У господарств1 "Агропродсервк 1нвест" Коз1вського району Тернотльсько! област1 були ввдбраш дв1 дослщш i одну контрольну групи (n=10). Коровам nepmoï дослщно! групи випоювали в день отелення "СтоГа" в доз1 500 мл., а коровам друго! вводили його пщшюрно у доз1 10 мл.
У даних тварин вщб1р проб молока i секрету молочно! залози, змиви i3 статевих оргашв кор!в, доставку ïx в лабораторш та мжробюлопчш дослщження проводили згщно з визнаними та ¿снуючими на даний час методичними рекомендациями [6]. Родову щентифжацш видшених культур проводили згщно з дев'ятим виданням визначника бактерш Бердж1 [5].
Для вивчення здатност1 м1крооргашзм1в формувати бюпл1вки та визначення ïx щшьност1 використовували стерильш одноразов! пластиков! чашки Петр1 [1]. Мжроскотчш дослщження сформованих бюпл1вок бактер1ями на мкроскот Micromed XS-4130, фото фжсували на камер1 Micromed 5,0 MegaCmos. Отримаш результата дослщжень обробляли статистично з використанням програм Microsoft Excel I Statistika 99. Р1зницю вважали в!рогщною заР<0,05;Р<0,01 iP<0,001 [4].
Результати дослщжень.
За даними, наведеними у таблиц! 1, видно, що теля застосування ¿муномоделюючого препарату методом випоювання як в секрет! молочно! та у змивах i3 п1хви змши складу мжрофлори були несуттевими, що евщчить про недоцшьшеть застосування препарату таким шляхом. Шсля пщшюрного введения "СтоГа" у мшрофлор1 молочно! залози знизилась кщьккть м!крооргашзм!в Lactobacillusspp. у 1,3 раза (Р<0,05), Enterobacterspp., E. coli у 4,0 раза (Р<0,01), зросла кшьккть бактерш Streptococcusspp, Lactococcusspp., Micrococcusspp. у 1,9 раза (Р<0,01), пор1вняно з введениям препарату, що
408
свщчить про тдвищення захисних властивостей молочно! залози та вщновлення нормально! мшрофлори.
Таблиця 1.
BiviicT мжрофлори в молочнш залоз1 та nixßi Kopie дослвдно! групи
до ташсля застосування препарату "СтоГа", M±m,n=10
Молочна залоза nixBa
Вида до шсля Шсля до теля шсля
м1кроорган13м1в введения випоюван введения введения випоюван введения
% ня % ШДШКфНО % % ня, % ШДШКфНО %
Lactobacillusspp. 52,6 52,8 39,2* 26,9 27,1 54,6**
Enterobacterspp., E. Coli 5,3 5,6 1,2** 34,6 34,8 24,7*
Staphylococcusspp, Micrococcusspp. 23,7 25,6 48,5** 23,9 22,7 15,3*
дpiжджoвi грибки 7,9 3,5* - 3,1 2,9 -
Corynebacteriumspp. 10,5 11,3 11,1 11,5 12,5 5.4**
Примита: *P< 0,05; **P< 0,01 - пор1вняно з введениям препарапв.
У змивах i3 nixBH Kopie зросла кшьккть мшрооргашзм1в Lactobacillusspp. у 1,8 раза (Р<0,01), знизилась кшьккть Enterobacterspp., E. coli у 1,2 раза (Р<0,05), Staphylococcusspp, Micrococcusspp. у 1,4 раза (Р<0,05), Corynebacteriumspp. у 2,1 раза (Р<0,01) пор1вняно з введениям препарату. Даш результати вказують на шдвищення резистентност1 слизово! оболонкн nixBn i вщновлення нормально! мжрофлори та актившший процес утворення бюпл1вки корисною м1крофлорою для захнсту слнзово!.
Для визначення можливост1 м1крооргашзм1в ¿з молочно! залози та п1хви Kopie формуватн бюпл1вки на абюгенних поверхнях, мн теля шкубацп провели мжроскопш чашок ¿з сформованою бюпл1вкою (Рис.1).
Рисунок 1. Lactobacillusspp. у вшьному сташ та у бшпл1вщ(з права)
409
Даш щодо оптично1 цшьносп бюпл1вок видшених культур наведен! в табл. 2.
Таблиця 2
Щшьшсть мжрофлори, видшено! з молочно! залози та тхви Kopie
дослщноУгрупи до та теля застосування препарату "СтоГа", M±m,n=10
Види м1кроорган1зм1в Шдльшсть бюптвки, од
До введеня Шсля введения
Lactobacillusspp. 0,82 0,79
Enterobacterspp., E. Coli 1,24 1,13
Staphylococcusspp, 1,58 1,61
Corynebacteriumspp. 1,22 1,19
Примита: *P< 0,05; **P< 0,01 - пор1вняно з введениям препарапв.
3 л1тературних даних вщомо, що при пщвищенш ¿муштету можливкть нормально! мжрофлори утворювати бюпл!вку на слизових оболонках оргашзму пщвищуеться, про що евщчило, за нашими дослщженнями, зростання р1вня нормально! мшрофлори. Та можливкть утворювати бюпл!вку нормальнш мжрофлор! слизових на абюгенних поверхнях ускладнена. Натомють патогенш та умовно-патогенш мшрооргашзми утворюють щшьну бюпл!вку при будь-яких умовах.
Висновки.
1. Застосування препарату "СтоГа" методом випоювання не впливае на стан мжрофлори молочно! залози та тхви Kopie.
2. Шсля тдшюрному введения ¿муностимулюючого препарату вщбулися змши результати яких вказують на пщвищення захисних властивостей молочно! залози, пщвищення резистентност! слизово! оболонки тхви та вщновлення нормально! м!крофлори.
3. Щшьшсть утворення б!опл!вки м!кроорган!змами, видшеними ¿з слизових оболонок, залежить вщ виду м!кроорган!зму та середовища.
Перспектива подальших дослщжень. З'ясувати особливост! формування б!опл!вок м!кроорган!зм!в на слизових оболонках молочно! залози та тхви кор!в для корекц!! нормально! м!крофлори та запоб!гання акушерсько-г!неколог!чно! патолог!!.
Л1тература
1. Вознесенский И. А. Биопленки - терапевтическая мишень при хронических инфекциях / И. А. Вознесенский // Атмосфера, пульмонология и аллергология. - 2008. - № 3. - С. 15-18.
2. Дубинин A.B. Трофические и регуляторныесвязимакроорганизма и микрофлоры / A.B. Дубинин, В.Н. Бабин, П.М. Раевский // Клин. мед. - 1991.— №7. - С. 24-28.
410
3. Заславская Н. В. Выживаемость бактерий, растущих диффузно и образующих газон, в присутствии гентамицина и ионов металлов / Н. В. Заславская, В. В. Тец // Труды РАЕН. - 2000. - С. 77-82.
4. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин //. - М.: Высшая школа. - 1990. -351 [1] с.
5. Определитель бактерий Берджи / Перевод с английского Ред. Дж. Хоулт. идр. - М.: Мир. - Том2. - 1997. - 537с
6.Рекомендаци щодо саштарно-мжробюлопчного дослщження змив1в з поверхонь тест-об'ект1в та об'ект1в ветеринарного нагляду i контролю методичш рекомендацп / [Якубчак О.М., Хоменко B.I, Мщик C.B. та ш.]. -Ки1в.- 2005. - 18 с.
7. Тец Г. В. Совместное действие антибиотиков и дезоксирибонуклеазы / Г. В. Тец, К. А. Артеменко // Антибиотики и химиотерапия. - 2006. - Т. 51, № 6.
- С. 3-6.
8.Чеботарь И. В. Новый метод количественного учета кокков в надклеточных образованиях - кластерах и биопленках / И. В. Чеботарь, Е. А. Таланин, Е. Д. Кончакова // Современные технологии в медицине. - 2010. - № 3.
- С 14-17.
9.Draiton D.L. Lymphoid organ development: from ontogeny to neogenesis/D.L. Draiton, S.Liao, R.H.Mounzer, N.H.Ruddle // Nature immunology.-2006. - V. 7, N 3. - P. 344-353.
Рецензент - д.вет.н., професор Стефаник В.Ю.
411
