CC BY
36
11. Таточенко В.К. Безопасность вакцинации: современные данные // Педиатрическая фармакология. 2007. Т. 4. № 3. С. 73 - 79.
12. Таточенко В.К., Намазова Л.С., Харит С.М. и др. Реактогенность и безопасность адсорбированных вакцин против коклюша, дифтерии и столбняка: результаты наблюдательного многоцентрового исследования // Вопросы современной педиатрии. 2006. Т. 5. № 4. С. 32 - 38.
13. Таточенко В.К., Федоров А.М., Озерецковский Н.А. Профилактика и мониторинг поствакцинальных осложнений. - М., 2004. - 189 с.
14. Фельдблюм И.В., Николаева А.М., Казьянин А.В. и др. Оценка реакто-генности и иммуногенности комбинированной вакцины Бубо-Кок при иммунизации детей против дифтерии, столбняка, коклюша и вирусного гепатита В // Микробиология. 2004. № 5. С. 58 - 62.
15. Харит С.М. Тройная защита: делаем прививку АКДС // Мама и малыш.
2005. № 4. С. 17 - 21.
16. Харит С.М., Воронина О.Л., Лакоткина Е.А., Черняева Т. В. Специфическая профилактика коклюша: проблемы и перспективы // Вопросы современной педиатрии. 2007. Т. 6. № 2. С. 71 - 77.
17. Чупринина РП. Сравнительная характеристика токсических свойств коклюшных микробов // ЖМЭИ. 1975. № 9. C. 111 - 116.
18. Чупринина Р.П., Перелыгина О.В., Алексеева И.А., Озерецковский Н.А. Сравнительная характеристика отечественных и зарубежных вакцин для профилактики коклюша, дифтерии и столбняка // Биопрепараты.
2006. № 4 (24). С. 27 - 30.
19. Bronne-Shanbury C., Miller D., Standfast A.F.B. The serotypes of Bordetella pertussis isolated in Great Britain between 1941 and 1968 and a comparison with the serotypes observe in other countries over this period // J. Hyg. 1976. V. 76. № 2. P. 265 - 275.
20. Chalvardjian N. The content of antigens 1, 2 and 3 in strain s of Bordetella pertussis and in vaccines // Canad. Med. Assoc. J. 1965. V. 92. May 22. P 1114 - 1116.
21. Gilberg S., Njamkepo E., Parent du Chatelet I. et al. Evidence of Bordetella pertussis infection in adult presenting with persistent cough in a French
area with very high whole-cell vaccine coverage // J. Infect. Dis. 2002. V. 186. P. 415 - 418.
22. Griffin M.R., Ray W.A., Livengood J.R., Schaffner W. Risk of sudden infant death syndrome after immunization with the diphtheria-tetanus-pertussis vaccine // N. Engl. J. Med. 1988. V. 319. P. 618 - 623.
23. Guiso N., Begue P., Cohen R. et al. Comparison of pertussis antibody levels in children up to 5 years of age primed at 2, 3, 4 months and boostered in the second year of life with either DTPa or DTPw based combination vaccines, in France / In: 40th Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy. September 17 - 20. 2000. Toronto. Canada. Abstract. - Washington. DC: American Society for Microbiology, 2000.
24. Immunization Practices Advisory Committee. Mortal. Morbid. // Weekly Rep. 1981. V. 30. P 392 - 407.
25. Mattoo S., Cherry J.D. Molecular pathogenesis, epidemiology and clinical manifestations of respiratory infectious due to Bordetella pertussis and other Bordetella subspecies // Clin. Microbiol. Rev. 2005. V. 18. № 2. P. 326 - 382.
26. Parton R., Wardlaw A.C. Cell-envelope proteins of Bordetella pertussis // J. Med. Microbiol. 1975. № 8. P. 47 - 57.
27. Preston N.W. Type-specific immunity against whooping-cough // Brit. Med. J. 1963. №. 2. P. 724 - 726.
28. Ray P., Hayward J., Michelson D. et al. Encephalopathy after whole-cell pertussis and measles vaccination. Lack of evidence for a causal association in a retrospective case-control study // Pediatr. Infect. Dis. 2006. V. 25. P. 768 - 773.
29. Salmaso S., Mastrantonio P, Tozzi A.E. et al. Sustained efficacy during the first six years of life of three-component acellular pertussis vaccines administered in infancy: the Italian experience // Pediatrics. 2001. V. 108. P e81.
30. Strathdee S.A., Loughlin A.M. Vaccines: past, present, and future / In: Nelson K.E., Williams C.M., Graham N.M.H. (ed). Infectious disease epidemiology. - Gaithersburg (MD): Aspen Publishers, Inc., 2001. P 255 - 280.
31.Weekly epidemiological record // WHO. 2010. V. 85. № 40. P. 385 - 400.
Аттестация новых серий вторичного (рабочего) посевного вируса желтой лихорадки, штамм 17D
И.П. Ладыженская1, М.С. Воробьева1, О.А. Бархалева1, Н.В. Терешкина1, А.А. Синюгина2, Л.В. Гмыль2, В.Г. Козлов2, А.В. Киктенко2
1 ФГБУ «НЦ экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития России, Москва ([email protected])
2 ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова» РАМН, Московская область, Ленинский район, пос. Институт Полиомиелита ([email protected])
Резюме
Международные требования к вакцине против желтой лихорадки, сформулированные в рекомендациях ВОЗ по обеспечению качества, безопасности и эффективности живых вакцин против желтой лихорадки [2], предусматривают строгое соблюдение условий пассирования посевного вируса желтой лихорадки (ЖЛ) - так называемой системы посевных серий. Основное назначение этой системы посевных серий состоит в том, чтобы избежать дополнительных пассажей вируса и таким образом снизить вероятность изменения его иммуногенности и нейротропизма. В соответствии с этими требованиями на предприятиях-изготовителях из прото-типной первичной посевной серии вируса ЖЛ № 213/77, предоставленной ВОЗ, в производственных условиях готовят вторичную посевную серию (первый пассаж), а из серии вторичного посевного вируса готовят вакцину ЖЛ (второй пассаж). Вторичная. или рабочая. посевная серия - это лиофилизированная вирусная суспензия, полученная в ходе
Certification of the New Lots of Yellow Fever Secondary (Working) Seed Virus, 17D Strain
I.P. Ladyzhenskaya1, M.S. Vorobyova1, O.A. Barhaleva1, N.V. Tereshkina1, A.A. Sinyugina2, L.V. Gmyl2, V.G. Kozlov2, A.V. Kiktenko2
1 The Federal Government Budget Institution «Scientific Center of Examination of Medical Means Applications»Ministry
of Health and Social Development of the Russian Federation, Moscow ([email protected])
2 Federal State Unitary Enterprise of M.P. Chumakov Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitides Russian Academy of Medical Sciences, Moscow Region, Leninsky District, pos. Institute of Poliomyelitis ([email protected])
Abstract
International requirements for yellow fever vaccine stated in WHO guidelines to assure the quality, safety and efficacy of live attenuated Yellow Fever (YF) vaccines [2] provide for strict compliance with the passage conditions of YF seed virus (the so-
одного производственного цикла и имеющая однородный состав. Согласно рекомендациям ВОЗ полученная серия рабочего посевного вируса ЖЛ должна пройти обязательную сертификацию в национальном органе контроля и получить одобрение ВОЗ (для преквалифицированных производителей).
На предприятии ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова» РАМН в 2008 - 2009 годах были изготовлены две новые серии вторичного посевного вируса желтой лихорадки, штамм 17D. В мае 2010 года образцы серий были представлены в ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» МЗиСР РФ на аттестацию и сертификацию с целью последующего использования в производстве серий отечественной вакцины желтой лихорадки живой сухой, лиофилизата для приготовления раствора для подкожного введения.
Ключевые слова: желтая лихорадка, вакцина желтой лихорадки, аттенуированный вирус, система посевных вирусов, вторичный посевной вирус, требования ВОЗ
called system of seed lots). The main objective of the above system is to avoid additional passages of the virus and thereby reduce any possibility of change in its immunogenicity and neurotropy. In accordance with these requirements, at the vaccine manufacturing facility the secondary (working) YF virus seed lots are being made of the prototype primary (master) YF seed lot virus № 213/77 obtained directly from WHO/NIBSC (the first passage level). Then the lots of secondary seed virus are being used for YF vaccine production (the second passage level). The secondary (or working) seed lot is a freeze-dried viral suspension being obtained within one production cycle, and having a uniform composition. In accordance with WHO recommendations any newly produced lot of YF working seed virus is a subject of mandatory assessment and certification carried out by the local National Regulatory Authority with subsequent WHO approval (for prequalified manufacturers only).
Federal State Unitary Enterprise of Chumakov Institute of Poliomyelitis and Viral Encephalitides have produced two new secondary seed lots using master seed 17D strain of Yellow Fever virus in 2008 - 2009. The samples of the both lots have been submitted to NRA - «State Research Institute for Standardization and Control of Medical Biological Preparations named after L.A. Tarasevic» of the Russian MOH for assessment and certification with a purpose of further production of the domestic yellow fever vaccine (live, freeze-dried). Key words: yellow fever, yellow fever vaccine, attenuated virus, virus seed lot system, the secondary seed virus, WHO requirements
Введение
Желтая лихорадка (ЖЛ) - острая вирусная инфекция с природной очаговостью из группы вирусных геморрагических лихорадок. Относится к особо опасным инфекциям, распространенным в ряде стран Африки, Центральной и Южной Америки. Болезнь передается от человека к человеку через укус комара (трансмиссивный путь передачи инфекции через комаров HaeTagogus на Американском континенте и Aedes, особенно A. aegypt, в Африке). Наиболее эффективное средство профилактики - вакцинация, которая способна сформировать иммунитет у отдельных лиц и создать иммунную прослойку для предотвращения эпидемии.
Вакцина стимулирует выработку антител (АТ) к вирусу желтой лихорадки и вызывает устойчивый иммунитет, сохраняющийся на протяжении 10 лет и более.
История создания вакцины против желтой лихорадки относится к 30-м годам прошлого века, когда были разработаны два типа вакцин, известные как вакцина Дакар (на основе французского нейротропного штамма, полученного из ткани мозга мышей, инфицированных вирусом) и вакцина 17D (на основе аттенуированного штамма 17D, репродуцируемого в тканях развивающихся куриных эмбрионов).
Штамм 17D был получен путем серийных пассажей дикого штамма Asibi вируса желтой лихорадки: первоначально в культурах тканей эмбрионов мышей, затем более 200 пассажей в культурах тканей куриных эмбрионов. Первичное заражение культуры тканей вирусом из сыворотки крови обезьяны, инфицированной исходным штаммом Asibi, было проведено в 1933 году. В 1937 году M. Theiler и H. Smith сообщили о значительных изменениях висцеротропных и ней-ротропных свойств пассированного штамма по сравнению с исходным [1]. Этот штамм, прошедший сложную систему пассирования в культурах тканей куриных эмбрионов и обозначенный как 17D, послужил основой для разработки варианта вакцины желтой лихорадки на новом клеточном субстрате - тонкоизмельченной ткани куриных эмбрионов.
В настоящее время штамм 17D является фактически единственным штаммом, рекомендуемым ВОЗ для производства живой вакцины против желтой лихорадки. Комитетом экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов (Expert Committee on Biological Standardization) разрабатываются и регулярно пересматриваются, с учетом накопления опыта, «Требования к биологическим препаратам», в том числе к вакцине против желтой лихорад-
ки [2]. ВОЗ предоставляет эталонный материал и прототипные посевные серии вируса для
последующего использования национальными производственными предприятиями.
Таблица 1.
Результаты испытания новых серий вторичного (рабочего) посевного вируса ЖЛ по показателю «стерильность»
наименование показателя Вторичный посевной вирус, серия № 26/10 Вторичный посевной вирус, серия № 32/10
Присутствие агентов, патогенных для птиц* Вирус для приготовления рабочих посевных серий выращивался на тканях куриных эмбрионов, свободных от специфической патогенной микрофлоры Вирус для приготовления рабочих посевных серий выращивался на тканях куриных эмбрионов, свободных от специфической патогенной микрофлоры
Стерильность (не должны содержать бактерий и грибов) Не содержит бактерий, грибов Не содержит бактерий, грибов
Присутствие микоплазм Контаминация микоплазмами не обнаружена Контаминация микоплазмами не обнаружена
Наличие микобактерий туберкулеза Микобактерии туберкулеза не выявлены Микобактерии туберкулеза не выявлены
Примечание: *Анализ сводных протоколов контроля производства.
**В процессе производства партии эмбрионов кур, используемых для приготовления посевного вируса, прошли контроль на присутствие микобактерий туберкулеза, сальмонелл, микоплазм, посторонних вирусных агентов в тест-культуре фибро-бластов куриного эмбриона, диплоидных клетках человека (М 22). Указанные агенты не обнаружены.
Таблица 2.
Результаты испытания новых серий вторичного (рабочего) посевного вируса ЖЛ по показателю «подлинность»
наименование показателя (критерии оценки) Исследуемые серии вторичного посевного вируса Показатели титров вируса в Рн* при тестировании в клеточной культуре PS методом бляшек (1д БоЕ/мл)
в смеси с неиммунной сывороткой в смеси с иммунной сывороткой Дакар индекс нейтрализации**
Подлинность (аттенуированный штамм 17D вируса желтой лихорадки должен нейтрализоваться специфической иммунной сывороткой к штамму Дакар вируса ЖЛ с индексом нейтрализации не менее 1,0 Ш № 26/10 5,54 < 3,0 > 2,54
№ 32/10 6,3 < 3,0 > 3,3
Примечание: * РН - реакция нейтрализации.
** Индекс нейтрализации представляет собой разницу 1д титров вируса с неиммунной и иммунной сыворотками.
Таблица 3.
Результаты испытания новых серий вторичного (рабочего) посевного вируса ЖЛ по показателю «специфическая активность»
наименование показателя (критерии оценки) Исследуемые серии вторичного посевного вируса Показатели титров вируса при тестировании в клеточной культуре PS методом бляшек № бое/мл) Показатели титров вируса при интрацеребральной инокуляции мышей линии СВА 09 ЛД^/мл)
Определение содержания живого вируса титрованием в клеточной культуре PS методом бляшек и при интраце-ребральной инокуляции мышей линии СВА или BALB/c. Показатели титров должны иметь значения не менее 4,0 ^ ЛД50/мл или 4,2 ^ БОЕ/мл* № 26/10 Средний показатель 5,64; 5,81 5,36 5,70 5,67 Средний показатель 4,27; 3,66 4,81 4,34
№ 32/10 Средний показатель 5,89; 6,19 5,90 5,77 5,70 Средний показатель 4,76; 3,95 4,84 5,50
Примечание: * ФСП-42-ЛС-000592-280909
Таблица 4.
Результаты испытания новых серий вторичного (рабочего) посевного вируса ЖЛ по показателю «аномальная токсичность»
наименование показателя Метод (лабораторные животные,объем и способ введения) Вторичный посевной вирус, серия № 26/10 Вторичный посевной вирус, серия № 32/10
Аномальная токсичность (отсутствие неспецифической токсичности)* - Испытание на белых мышах массой 18 - 20 г при введении внутрибрюшинно тест-дозы 0,5 мл - Испытание на морских свинках массой 250 - 350 г при введении подкожно тест-дозы 0,5 мл Срок наблюдения - 7 суток. В течение периода наблюдения все животные остались живы, ни у одного из них не были выявлены видимые признаки заболевания. Масса каждого животного в день окончания наблюдения не уменьшилась по сравнению с исходной. Ни у одной морской свинки, получившей тест-дозу, не развился некроз или абсцесс в месте введения Срок наблюдения - 7 суток. В течение периода наблюдения все животные остались живы, ни у одного из них не были выявлены видимые признаки заболевания. Масса каждого животного в день окончания наблюдения не уменьшилась по сравнению с исходной. Ни у одной морской свинки, получившей тест-дозу, не развился некроз или абсцесс в месте введения
Примечание: *ГФ РФ XII Таблица 5.
Результаты испытания на висцеротропизм новых серий вторичного (рабочего) посевного вируса ЖЛ
Требования Воз и фСП (критерии оценки)
Метод
Материал для исследования
Максимальное количество циркулирующего вируса желтой лихорадки (БоЕ/0,03 мл)
Критерии оценки висцеротропизма:
- количество цир-
кулирующего вируса в сыворотках крови испытуемых обезьян
- в 0,03 мл сыворотки крови обезьяны должно
содержаться не более 100 ЛД50 (или 160 БОЕ) вируса ЖЛ
Определение циркулирующего
вируса ЖЛ на 2-й, 4-й, 6-й день после введения испытуемых доз вторичного посевного вируса и эталонного вируса. Метод - титрование проб сывороток в клеточной культуре PS методом бляшек
Сыворотки крови 10 обезьян, инфицированных эталонным вирусом ЖЛ, серия № 213/77 (испытуемая доза 5500 ЛД)
Количественное содержание циркулирующего вируса в 0,03 мл каждой пробы сыворотки составило от 7,4 до 79,4 БОЕ*
Сыворотки крови 10 обезьян, инфицированных вторичным посевным вирусом, серия № 26/10 (испытуемая доза 5700 ЛД)
Количественное содержание циркулирующего вируса в 0,03 мл каждой пробы сыворотки составило от 10 до 64,6 БОЕ*
Сыворотки крови 10 обезьян, инфицированных вторичным посевным вирусом, серия № 32/10 (испытуемая доза 11 000 ЛД50)
Количественное содержание циркулирующего вируса в 0,03 мл каждой пробы сыворотки составило от 7,9 до 30,2 БОЕ*
Примечание: *Испытуемые посевные вирусы ЖЛ висцеротропны. В сыворотках крови обезьян, инфицированных, как испытуемыми, так и эталонным препаратами, вирус желтой лихорадки содержится в близких по значению количествах.
В Российской Федерации на предприятии ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова» РАМН в настоящее время производится серийный выпуск отечественной вакцины против желтой лихорадки живой сухой, лиофилизата для приготовления раствора для подкожного введения по ФСП-ЛС-000592-280909 [3]. Вакцина представляет собой тонкоизмельченную ткань куриных эмбрионов, свободных от специфической патогенной микрофлоры (SPF), зараженных аттенуиро-ванным вирусом желтой лихорадки, штамм 17D, очищенную центрифугированием и лиофилизи-рованную.
В качестве прототипного посевного вируса при изготовлении вакцины используется штамм 17D первичной посевной серии ВОЗ № 213/77 [5]. Образцы этой серии поступили в 1995 году в страну из референс-лаборатории ВОЗ Института им. Р. Коха, Германия. Первич-
ная посевная серия № 213/77 послужила источником изготовления в 2008 - 2009 годах на предприятии ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова» РАМН вторичного (рабочего) посевного вируса серий № 26/10 и 32/10, образцы которых были представлены на аттестацию в ФГБУ «ГИСК им. Л.А.Тарасевича» МЗиСР РФ.
Информация о серии № 213/77: 237-й пассаж штамма 17D, субштамм 204 вируса ЖЛ. Серия № 213/77 (первичный вирус) и серия № 168/73 (референс) изготовлены в Институте им. Р. Коха из серии № 112-69 (коллекция Института им. Р. Коха).
Испытание вторичных посевных серий вируса желтой лихорадки на соответствие требованиям ВОЗ включает комплекс тестов, в том числе основное испытание безопасности при заражении обезьян (испытание на висцеротропизм, нейротропизм, иммуногенность) в срав-
Таблица 6.
Результаты испытания на иммуногенность новых серий вторичного (рабочего) посевного вируса ЖЛ
Требования ВОЗ и ФСП (критерии оценки)
Метод
Материал для исследования
Титр вируснейтра-лизующих антител в сыворотках крови обезьян до заражения
Титр
вируснейтрализующих антител в сыворотках крови обезьян на 30-й день после заражения
Критерии оценки иммуногенности:
- достаточное количество нейтрализующих вирус антител в сыворотках;
- не менее чем у 90% исследуемых обезьян в течение 30 дней после введения испытуемой дозы должна быть выявлена выработка иммунитета
Определение титра вируснейтрализующих антител в сыворотках крови обезьян после введения вторичного посевного вируса и эталонного вируса. Метод - реакция нейтрализации в клеточной культуре PS методом бляшек со стандартной рабочей
дозой рефе-ренс-вируса ЖЛ 27,5 Б0Е/0,1 мл*
Сыворотки крови 10 обезьян, инфицированных
эталонным вирусом ЖЛ, серия № 213/77 (испытуемая доза 5500 ЛД50)
< 1:10
1:40 - 1:320
1:40 - 3 обезьяны 1:160 - 3 обезьяны 1:320 - 4 обезьяны**
Сыворотки крови 10 обезьян, инфицированных вторичным посевным вирусом, серия № 26/10 (испытуемая доза 5700 ЛД50)
< 1:10
1:40 - 1: 320
1:40 - 1 обезьяна 1:160 - 5 обезьян 1:320 - 4 обезьяны*
Сыворотки крови 10 обезьян, инфицированных вторичным посевным вирусом, серия № 32/10 (испытуемая доза 11 000 ЛД50)
< 1:10
1:40 - 1:320
1:40 - 1 обезьяна 1:160 - 5 обезьян 1:320 - 4 обезьяны*
Примечание: *ОСО 42-28-312-07П - Отраслевой стандартный образец вакцины желтой лихорадки. В реакции нейтрализации была использована стандартная доза вакцинного вируса ЖЛ.
** Испытуемые посевные серии вируса ЖЛ иммуногенны. У всех обезьян, зараженных испытуемыми и эталонным препаратами, выявлены антитела к вирусу желтой лихорадки в титре более чем 1:40.
Таблица 7.
Результаты испытания на нейротропизм новых серий вторичного (рабочего) посевного вируса ЖЛ
Требования Воз и фСП Материал для исследования Клиническая оценка в баллах в тесте нейровирулентности на обезьянах (средний арифметический балл клинических проявлений)* Суммарные гистологические результаты в тесте нейровирулентности на обезьянах (средний балл в группе)*
балл поражения дискриминационной области балл поражения дискриминационной области и области мишени
Клиническая балльная оценка обезьян, инфицированных тестируемым вирусом, не должна превышать клиническую балльную оценку обезьян, инфицированных эталонным вирусом Эталонный вирус ЖЛ, серия № 213/77 0,13 0,37 0,30
Вторичный посевной вирус, серия № 26/10 0,09 0,12 0,11
Вторичный посевной вирус, серия № 32/10 0,01 0,27 0,19
Примечание: * Балльная оценка клинических и гистологических нарушений у обезьян проведена в соответствии с Системой гистологической балльной оценки по Требованиям ВОЗ [2].
нении с прототипной первичной серией ВОЗ № 213/77 [2].
Целью данного исследования явились аттестация и сертификация новых серий вторичного (рабочего) посевного вируса желтой лихорадки, штамм 17D, изготовленных на предприятии ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН» в 2008 - 2009 годах. Данные исследования проводились при совместном участии специали-
стов ФГБУ НЦЭСМП Минздравсоцразвития России (ГИСК им. Л.А. Тарасевича) и ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова» РАМН.
Материалы и методы
1. Вторичный (рабочий) посевной вирус желтой лихорадки, штамм 17D:
• серия № 26/10 (дата лиофилиза-ции - 7 - 10.10.2008 г.);
• серия № 32/10 (дата лиофилиза-ции - 17 - 20.02.2009 г.).
2. Прототипный первичный посевной вирус ВОЗ, серия № 213/77.
3. Перевиваемая клеточная культура PS (почки эмбриона свиньи), 10.Р.З.11.95 ZLL, рекомендованная ВОЗ для оценки специфической активности, подлинности и других характеристик штамма 17D. Линия клеток PS (из лаборатории желтой лихорадки Института им. Р. Коха, Германия) - на уровне 4-го пассажа (хранение в жидком азоте). В работе использовали клеточную культуру на уровне 5 - 25-го пассажа.
4. Лабораторные животные:
• белые мыши линии СВА массой тела 10 - 12 г;
• обезьяны Macaca fascicularis массой тела 3,0 - 3,5 кг.
Применялись следующие методы:
1. Биологический - титрование вируса и реакция нейтрализации в перевиваемой клеточной культуре PS и на мышах линии СВА [2].
2. Определения стерильности (присутствие бактерий, грибов, микоплазм и других контами-нирующих агентов) [3].
3. Определения аномальной токсичности [3].
Проводились испытания на безопасность. Обезьянам вводили во фронтальную часть головного мозга серии № 26/10 и 32/10 вторичного (рабочего) посевного вируса и сравнивали с эталонным вирусом серии № 213/77 [5].
Висцеротропизм выявляли, изучая сыворотки крови обезьян на 2-й, 4-й, 6-й день после введения испытуемой дозы методом тестирования в клеточных культурах [5].
Иммуногенность определяли по наличию ви-руснейтрализующих антител в сыворотках крови обезьян на 30-й день после введения испытуемой дозы в реакции нейтрализации вируса ЖЛ в клеточных культурах [2].
Нейротропизм выявляли у испытуемых обезьян, инфицированных эталонным вирусом и рабочими посевными сериями вируса, через наличие клинических признаков энцефалита и тяжести гистологических поражений нервной системы [5].
Результаты и обсуждение
Требования ВОЗ к вакцине против желтой лихорадки [5, 4], а также разработанные на их основе в РФ Национальные требования [2] регламентируют условия производственного контроля, контроля исходных материалов для приготовления как прототипной, так и вторичной (рабочей) посевных серий. С учетом требований при репродукции вируса особое значение придается использованию в производстве эмбрио-
нов кур, свободных от специфических патогенных агентов (SPF - specific pathogen free). Рабочие посевные серии не должны быть контамини-рованы вирусами птичьего лейкоза и агентами, патогенными для птиц. Анализ данных сводных протоколов контроля производственных серий вторичного посевного вируса и испытаний исходных материалов на предприятии ФГУП «ПИП-ВЭ им. М.П. Чумакова» РАМН показал полное соответствие как требованиям ВОЗ, так и национальным стандартам.
В основу производства серий № 26/10 и 32/10 вторичного (рабочего) посевного вируса положена так называемая система посевных серий. Полученные путем однократного пассирования первичной посевной серии ВОЗ № 213/77 на куриных эмбрионах SPF, обе серии посевного вируса - № 26/10 и 32/10 - в виде тонкоизмельченной ткани куриных эмбрионов были очищены центрифугированием и лиофили-зированы.
После поступления образцов лиофилизиро-ванных серий в ФГБУ НЦЭСМП Минздравсоц-развития России (ГИСК им. Л.А. Тарасевича) проведена аттестация поступивших серий по следующим показателям:
• подлинность;
• стерильность (наличие бактерий, грибов, микоплазм, микобактерий туберкулеза);
• специфическая активность (определение титра вируса при титровании в культуре ткани и при заражении мышей);
• общая безопасность (отсутствие аномальной токсичности) в опытах на мышах и морских свинках.
Проводились испытания на безопасность (висцеротропизм, нейротропизм и иммуноген-ность) в опытах на обезьянах в параллельном тесте с прототипной первичной серией (эталонная серия № 213/77).
Результаты испытаний образцов двух серий - № 26/10 и 32/10 - вторичного (рабочего) посевного вируса желтой лихорадки, штамм 17D, представлены в таблицах 1 - 7.
Выводы
1. Проведены аттестация и сертификация вторичного (рабочего) посевного вируса желтой лихорадки, штамм 17D, производства ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова» РАМН:
• серия № 26/10 (дата лиофилизации: 7.10 - 10.10.2008 г.; дата выпуска: ноябрь 2010 г.).
• серия № 32/10 (дата лиофилизации: 17.02 - 20.02.2009 г.; дата выпуска: ноябрь 2010 г.
2. Результаты аттестации и сертификации подтвердили соответствие серий № 26/10 и 32/10 вторичного (рабочего) посевного вируса желтой лихорадки, штамм 17D, требованиям Фармакопейной статьи предприятия № ЛС-000592-280909, а также международным требованиям,
предъявляемым ВОЗ к условиям производства и качеству вакцин против желтой лихорадки. Серии вторичного посевного вируса № 26/10 и 32/10 могут быть использованы для производства отечественной вакцины против желтой лихорадки живой сухой. Ш
Литература
1. Theiler M., Smith H. Use of yellow fever virus modified by vitro for human immunization // J. Exp. Med. 1937. V. 65. R 782.
2. Фармакопейная статья предприятия ФГУП «ПИПВЭ им. М.П. Чумакова» РАМН. ФСП-42-ЛС-000592-280909.
3. Государственная Фармакопея РФ. XII. Ч. 1.
36-й доклад Комитета экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов (приложение 6) / Серия технических докладов ВОЗ. № 745. - Женева: ВОЗ, 1988.
Recommendation to assure the quality, safety and efficacy of live attenuated yellow fever vaccines (Proposed replacement of TRS 872, annex and Amendment to TRS 872, Annex 2, TRS (in press) (ECBS 2008)) / Expert Committee on Biological Standardization, 18 - 22 october 2010. Technical report series.
ИНФОРМАЦИЯ РОСПОТРЕБНАДЗОРА
О случаях нападения клещей в летних оздоровительных учреждениях
Письмо от 19.06.2012 года № 01/6862-12-32
С начала летнего сезона 2012 года уже зарегистрировано четыре случая нападения клещей на детей в летних загородных оздоровительных учреждениях. В одном случае клещ был инфицирован боррелиями. Пострадавший ребенок проходил лечение амбулаторно по месту жительства под контролем врача-инфекциониста.
Нападения клещей произошли в Красноярском крае (за пределами лагеря) и в Московской области - на огражденной территории учреждения, вблизи жилых корпусов.
По результатам эпидемиологического расследования, причинами нападения клещей явились некачественная акарицидная обработка, проведенная с нарушением сроков и формальным контролем эффективности, отсутствие лесотехнических мероприятий на всей территории лагеря и мониторинговых исследований по заселенности клещами, снижение бдительности администрации летних учреждений.
Кроме того, сырая прохладная погода, установившаяся на центральной территории страны, с одной стороны, способствует продлению периода активности клещей, с другой - снижает продолжительность действия акарицидных препаратов.
В целях недопущения случаев присасывания клещей в детских оздоровительных учреждениях и формирования очагов инфекционных болезней, передающихся клещами, п р е д л а г а ю:
1. Взять на строгий контроль проведение лесотехнических (окос, уборка, расчистка от веток и кустарников) мероприятий и акарицидных обработок летних учреждений отдыха детей перед началом каждой оздоровительной смены на всех территориях, где имеет место распространение клещей, в соответствии с СП 3.1.3.2352-08 «Профилактика клещевого вирусного энцефалита», СанПин 3.5.2.1376-03 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации и проведению дезинсекционных мероприятий против синантропных членистоногих», МУ 3.5.3011-12 «Неспецифическая профилактика клещевого вирусного энцефалита и иксодовых клещевых боррелиозов».
2. Организовать и провести работу с медицинским персоналом летних детских оздоровительных учреждений по оказанию первой помощи пострадавшим детям и немед-
ленному информированию о случаях присасывания клещей территориальных органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор.
3. При регистрации случаев присасывания клещей на территории детских загородных оздоровительных учреждений:
• провести выездную внеплановую проверку с акцентом на условия размещения детей и благоустройство территории;
• администрации летнего загородного учреждения рекомендовать проведение лесотехнических мероприятий с расчисткой территории, ограничение массовых мероприятий с участием детей за пределами лагеря (игры, походы, общение возле костра), предполагающих выход в природный очаг;
• организовать внеплановое энтомологическое обследование территории с лабораторным исследованием найденных на территории клещей с периодичностью через день;
• при нахождении клещей при повторном энтомологическом обследовании или при нахождении клещей, инфицированных вирусом клещевого энцефалита, боррелиями или возбудителями других инфекций, принимать меры по приостановлению эксплуатации объекта для проведения внеплановой акарицидной обработки с последующим контролем ее эффективности;
• обеспечить контроль за организацией медицинского наблюдения за пострадавшими детьми и проведением им экстренной профилактики;
• в отношении организаций, проводящих акарицидные обработки, возбудить административное расследование, в отношении виновных должностных лиц детского учреждения применять меры административного воздействия в соответствии с законодательством.
4. О случаях присасывания клещей в детских оздоровительных учреждениях немедленно информировать Федеральную службу по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
Руководитель Г.Г. Онищенко Источник: http://rospotrebnadzor.ru/
