CC BY
33
7. Rui G. C. Advances in pharmacological studies of silimarin / G.C. Rui // Met. Inst. Oswaedo. Crur. - 1991. - № 86. - P. 2205-2211.
8. Доклшчт до^дження ветеринарних лшарських 3aco6ÍB / 1.Я. Коцюмбас i ствавтори. - Львiв: Трiада плюс, 2006. - 360 с.
9. Токсиколопчний контроль нових 3aco6ÍB захисту тварин: Методичнi рекомендацп / Косенко М. В., Малик О. Г., Коцюмбас I. Я., Патерега I. П., Чура Д. О. -К., 1997. - 34 с.
10. Маланин Л. П. Методические указания по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве / Л. П. Маланин, А. П. Морозов, А. С. Селиванова // Ветеринарные препараты: Справочник / Под ред. А. Д. Третьякова. - М.: Агропромиздат, 1988. - С. 239-289.
11. Харiв I. I. До^дження токсичност «Ампролшсилу» / I. I. Харiв //Науково-техшчний бюлетень Ыституту бюлогп тварин i Державного науково-дослвдного контрольного шституту ветпрепарат^в та кормових добавок. - 2013, Вип. 14, № 3. -С.120-124.
Стаття надшшла до редакцИ 23.09.2015
УДК 618.19-002:636.2.034:575
Супрович Т. М., д. с.-г. н., доцент (E-mail: [email protected])© Подшьський державный аграрно-техтчний утверситет, Украгна, м.
Кам'янець-Подшьський - 32316, вул. Шевченка, 13,
АСОЦ1АТИВНИЙ ЗВ'ЯЗОК М1Ж АЛЕЛЯМИ ГЕНА BOLA-DRB3.2 ТА
МАСТИТАМИ
Проведено дослгдження алельного спектру гена BOLA-DRB3.2 двох украгнських молочних чорно-рябог i червоно-рябог поргд з використанням методов полгмеразно-ланцюговог реакцИ (ПЛР-ПДРФ та АС-ПЛР). Встановлено, що алелi *24 i *26у чорно-рябог та *07 i *08 у червоно-рябог nорiд зв'язаш 3i сприйнятливктю до маститiв. Також виявлено по 2 алелi, асоцшованих з резистенттстю до маститiв: *13 i *22 у чорно-рябог та *22 i *24 - червоно-рябог порiд.
Отримаш результати дають можливкть порiвняти втчизняш i свiтовi до^дження для виявлення маркерiв (алелiв), асоцшованих з хворобами вимеш у молочних корiв. Проведено порiвняння результатiв власних до^джень з даними тших наукових публжацш. Встановлено, що для рiзних порiд виявляються розбiжнi, тколи прямо протилежш взаемозв 'язки мiж алелями та станом тварини. Очевидно, не wнуе единих маркерiв асощацп «алель-мастит» для великог рогатог худоби. Кожна порода мае власн маркери iмунног вiдповiдi на захворювання молочног залози. Це пояснюеться широкою етюлогт збудниюв, способами утримання, годiвлi та лжування тварин.
Необхiдно продовжити до^дження у напрямку накопичення тформацИ про алельний спектр тших втчизняних порiд.
Ключов'1 слова: мастит, полiмеразно-ланцюговареакщя, алелi, ген BOLA-DRB3.2, корови, украгнська чорно-ряба молочна порода, украгнська червоно-ряба молочна порода, популя^я, асощащя, молочна залоза.
УДК 618.19-002: 636.2.034: 575
Супрович Т. М., д. с.-х. н., доцент
Подольский государственный аграрно-техническийуниверситет, Украина,.
Каменец-Подольский - 32316, ул. Шевченко, 13
АССОЦИАТИВНАЯ СВЯЗЬ МЕЖДУ АЛЛЕЛЕЙ ГЕНА BOLA-DRB3.2 И
МАСТИТАМИ
Проведено исследование аллельного спектра гена BOLA-DRB3.2 двух украинских молочных черно-пестрой и красно-пестрой пород с использованием методов
© Супрович Т.М., 2015
227
полимеразной цепной реакции (ПЦР-ПДРФ и АС-ПЦР). Установлено, что аллели * 24 и * 26 в черно-пестрой и * 07 и * 08 в красно-пестрой пород связаны с восприимчивостью к маститов. Также выявлено по 2 аллели, ассоциированные с резистентностью к маститам: * 13 и * 22 в черно-пестрой и * 22 и * 24 - красно-пестрой пород.
Полученные результаты дают возможность сравнить отечественные и мировые исследования для выявления маркеров (аллелей) ассоциированных с болезнями вымени у молочных коров. Проведено сравнение результатов собственных исследований с данными других научных публикаций. Установлено, что у разных пород определяются расходящиеся, иногда прямо противоположные, взаимосвязи между аллелями и состоянием животного. Очевидно не существует единых маркеров ассоциации «аллель-мастит» для крупного рогатого скота. Каждая порода имеет собственные маркеры иммунного ответа на заболевание молочной железы. Это объясняется широкой этиологией возбудителей, способами содержания, кормления и лечения животных.
Необходимо продолжить исследования в направлении накопления информации об аллельном спектре других отечественных пород.
Ключевые слова: мастит, полимеразно-цепная реакция, аллели, ген BOLA-DRB3.2, коровы, украинская черно-пестрая молочная порода, украинская красно-пестрая молочная порода, популяция, ассоциация, молочная железа.
UDC 618.19-002: 636.2.034: 575
Suprovych T.
Podolsky State Agricultural and Technical University, Ukraine,. Kamenets -32316, st. Shevchenko, 13, ASSOCIATIVE LINK BETWEEN ALLELES BOLA-DRB3.2 GENE AND
MASTITIS
It was study of spectrum allelic of gene BOLA-DRB3.2 two Ukrainian dairy breeds black-pied and red-pied using polymerase chain reaction (PCR-RFLP and AS-PCR). It was found that the allele *24, *26 of black-pied and *07, *08 of red-pied breeds are associated with susceptibility to mastitis. There are two alleles associated with resistance to mastitis for both breeds: *13 and *22 - black-pied, *22 and *24 - red-pied.
The results make it possible to compare inland and international researches to identify markers (alleles) associated with diseases of the udder of dairy cows. The results of own research was comparison with other scientific publications. It was found that the different breeds have divergent, sometimes diametrically opposed the relationship between alleles and the state of the animal. Obviously, there is no single marker with association «allele-mastitis" for cattle. Each species has its own markers of the immune response to the disease of the mammary gland. This is due to the general etiology of pathogens, living conditions, nutrition and therapy animals.
It is necessary to continue research in the direction of the accumulation of information about the allelic spectrum of other inland breeds.
Key words: mastitis, polymerase chain reaction, allele gene BOLA-DRB3.2, cows, Ukrainian dairy black-pied breed, Ukrainian dairy red-pied breed, population, associations, mammary gland.
Вступ. Проблемi вивчення взаемозв'язку мiж алелями DRB3.2 локусу i маститами присвячено багато робгг [1-15, 17]. Виявлена асощащя обумовлена тим, що продукт гена BoLA-DRB3.2 безпосередньо бере участь у зв'язуванш чужорщних антигешв i обумовлюе специфiчнiсть iмунноl вщповщ. 1нтерес до асощаци «алель - мастит», який виник в 90-i роки минулого столггтя в Сврош, США i Канада набув нового статусу в зв'язку з штенсивним поширенням методик типування ДНК на iншi кра!ни, де молочне скотарство розвиваеться прискореними темпами. Останшм часом з'явилися даш про дослщження даного питання в Пакистану 1ндп, Кита!,
228
Японп i таких екзотичних кра!нах, як Ефюшя, Сгипет, Та!ланд тощо.
Аналогiчнi роботи започатковано в Укра!ш. Зокрема проведено дослiдження алельного спектру двох укра!нських молочних порщ: чорно-рябо! та черво-рябо! в зв'язку i3 резистентнiстю (сприйнятливiстю) до мастита, що дае можливiсть порiвняти отримаш результати з попереднiми свiтовими напрацюваннями напрямку дослiджень «BoLA i хвороби».
Матерiал i методи. Дослiджувалися зразки кровi вiд корiв укра!нсько! чорно-рябо! (n = 162) i червоно-рябо! (n = 117) молочних порщ з племшних i товарних господарств Хмельницько! та Чершвецько! областей. Спектр алелiв гена BoLA-DRB3 вивчали за допомогою ПЛР, яку проводили iз застосуванням готових наборiв «GenPakR PCR Core», ТОВ «Лабораторiя 1зоген». Для амплiфiкацil екзона 2 гени BoLA-DRB3 використовували двохетапний метод проведення ПЛР iз застосуванням праймерiв HLO-30, HLO-31 i HLO-32. Для рестрикцшного аналiзу фрагмента екзона 2 гени BoLA-DRB3 використовували ендонуклеази рестрикцп RsaI, HaeIII, BstYI (XhoII) фiрм «Promega», «NewEnglandBioLabs» i НВО «^бЕнзим». Рестрикцiйнi фрагменти роздiляли за допомогою електрофорезу в 4% агарозному гелi [16].
Результати дослщження. В наукових виданнях постшно з'являються новi даш щодо вивчення асоцiацiй алелiв DRB3.2 локусу з хворобами вименi. Аналiз лiтературних джерел [1-15] показуе, що для рiзних порiд виявляються розбiжнi, iнколи прямо протилежнi, взаемозв'язки мiж алелями та станом тварини.
В оглядi [6] автори вказують, що на розвиток мастита впливають алелi *03, *08, *11, *13, *16, *18, *22, *23 i *24, на стiйкiсть до захворювання - *08 i *22. Невизначенiсть юнуе для алеля *27.
Деякi автори узагальнюють попереднi дослiдження асоцiацiй «алель -мастит» i видiляють ряд «вагомих» алелiв для наступного аналiзу. У роботi [7] з резистентшстю до маститу пов'язуються алелi *07, *11, *13, *18, *27, iз сприйнятливiстю - *16, *23, *26. Алелi *08, *22, *24 мають невизначений статус, тобто для них вiдмiчаеться наявнiсть протилежних асоцiацiй (для одних популяцш вони проявляють себе у зв'язку зi стiйкiстю, в шших - iз захворюванiстю на мастити).
При дослщженш польсько! голштинсько! худоби (n = 525) для встановлення асощацш мiж алелями DRB3.2 локусу i вмiстом соматичних клггин (SCC) в молоцi, автори, опираючись на результати попереднiх наукових робгг, вказують на iнформативнiсть двох алелiв BoLA-DRB3.2*16 i *23 у зв'язку з маститами та проявом !х наслiдкiв для племшно! цiнностi корiв та SCC. Якщо данi алелi вважати генетичними маркерами для встановлення фенотитчно! стiйкостi (сприйнятливостi) до мастита, то аналiз будь-якого стада спрощуеться, тому що достатньо вивчати в популяци всього три генотипи - *16/*А, *23/*А i *16/*23 (де *А -будь-який алель, що типуеться в популяци) [3].
Дослщження 100 корiв з субклшчним маститом голштинсько! породи на египетськш фермi показуе, що 3 алелi DRB3.2*11, *16 i *24 мають генетично обумовлений зв'язок з маститами, причому алель *11 пов'язаний зi сприйнятливiстю, а *16 i *24 зi стшюстю до захворювання [5]. Отриманi результати вказують на те, що визначеш алелi можуть бути рекомендованi як маркери, при вiдборi тварин у молодому вщ до фактичного використання !х у дiйному стадi.
Власними дослщженнями встановлено, що для укра!нсько! чорно-рябо! молочно! породи асоцiйованими з маститами е алелi BoLA-DRB3.2*24 i *26, а укра!нсько! червоно-рябо! молочно! - *07 i *08. Резистентнють до захворювання
229
асощюеться, вщповщно, з алелями *13 i *22 та *22 i *24.
Узагальненi данi про виявлеш асоцiативнi зв'язки м1ж алелями гена BoLA-DRB3 i маститами зведено в табл. 1. У такш ситуацп вiднайти один або декшька маркерiв, пов'язаних з маститами, для вше! популяци молочних корiв неможливо. Очевидно, що аналiз необхiдно вести для окремих популяцш i знаходити та використовувати генетичш маркери на основi алелiв гена BoLA-DRB3.2 винятково iндивiдуально для кожно! вивчено! популяци.
Частина авторiв [2, 3, 14] вказують на те, що визначеш алелi можуть бути рекомендованi як генетичш маркери при формуванш стада, стшкого до маститiв. Однак, в цьому випадку виявляеться ряд сумшвних аспекпв, якi вимагають подальшого вивчення.
Таблиця 1
Порiвняння спектру BoLA-DRB3.2 алелiв, асоцшованнх з маститами
Порода/Джерело Алел^ що обумовлюють: «Чисп» алелi
сприйнятливють резистентнiсть сприйнят-ливiсть резистент-нiсть
Огляд порiд/ [6] *03,*08,*11,*13,*16, *18,*22,*23,*24 *08,*22 - -
Holstein (Япошя)/[14] *08,*16 *22,*23,*24 - -
Holstein (£гипет)/[5] *11 *16,*24 - -
Holstein (1ран)/[1] *08,*23,*24 *03,*11,*16 - -
Holstein (Китай)/ [8] *16 *08,*23 - -
Blanco Orejinegro (Колумбiя/ [9] *08,*14 *33 *14 *33
Огляд порщ/[7] *16,*23,*26 *07,*11,*13,*18,*27 *26 *27
Holstein (США)/[10] *16,*08,*23 *08 - -
Holstein (США)/[11] *03,*08,*16,*24 *11,*23 - -
Holstein (Iowa, США)/[12] *24 *08 - -
Holstein, Jersey (Канада)/[13] *08,*22,*23,*24 - - -
Sistani (1ран)/[17] - *02,*07,*11,*23,*24 - *02
Holstein х Zebu /[2] *01,*52 *10,*15,*22,*51 *01,*52 *10,*15,*51
власш дослщ-ження украшська чорно-ряба молочна *24,*26 *13,*22 *26 -
украшська червоно- ряба молочна *07,*08 *22,*24 - -
Примггка. «Чисп» - алелi, що асоцшються тiльки з резистентнiстю або тшьки 3i
сприйнятлив1стю до мастипв.
1. Виявлеш асощацп «алель - мастит» характерш лише для частини тварин з дослщжено! популяци. Якщо для породи виявлено 2 - 3 алел^ якi мають навггь дуже високу частоту експреси, то загальна кшьюсть тварин, якi е нолями таких маркерiв, складатиме лише незначну частку всього стада. Наприклад, для укра!нсько! чорно-рябо! молочно! породи алелi гена BoLA-DRB3 *24 i *26, якi мають статистично встановлеш асоцiацi! з маститами, мають загальну частоту виявлення 32,1%. Це означае, що нолями даних алелiв е приблизно кожна третя корова в популяци, а якщо врахувати гомозиготи типу *24/*24 (5 випадюв) i *26/*26 (1 випадок) та гетерозиготи *24/*26 (2 випадки), то реальна
230
шформативнють генетичних MapKepiB зменшусться до 27,8%. Встановлеш асощацн е популяцiйною ознакою i можуть використовуватись для селекцшних заходiв щодо покращення стiйкостi породи маститiв в щлому.
2. Iндивiдуальний пiдхiд, який полягае у визначенш генетично схильних до маститу тварин до використання !х у робочому стад^ вимагае бшьш точно! оцiнки стiйкостi корови до захворювання i наявнють маркера (маркерiв) у кожно! тварини.
3. Не враховуеться взаемний вплив комбшацш значимого алеля з шшими, яю в популяци визначалися як нешформативш або проявляли слабку асоцiацiю з хворобою. Власш дослiдження укра!нсько! чорно-рябо! та червоно-рябо! молочних порщ показали, що генотипи типу *Зд/*А, *Хм/*А i *А/*А (алелi: *Зд - асоцшований з резистентнiстю до захворювання, *Хм - асоцiйований iз сприйнятливютю до захворювання, *А - iншi алелi, що виявляються в популяци) зус^чаються як у хворих, так i здорових тварин. При цьому корелюючий вплив нешформативного алеля *А невiдомий. Аналогiчнi висновки зробленi при дослщженш польсько! голштинсько! [3] та популяци iранськоi худоби Сюташ [1]. Вплив комбшацш алелiв на асощащю «генотип - захворювання» зумовлюе необхщнють подальшого поглибленого вивчення саме цього напрямку маркерасоцшовано! селекци [15].
Висновки. Мастити належать до хвороб широко! етюлоги. Вщомо про десятки збудниюв, якi викликають гострi iнтрамамарнi шфекци. В такому випадку необxiдно враховувати великий масив шформаци: данi про наявнють патогенiв, !х видовий склад, особливосп утримання худоби тощо, або проводити комплексш дослiдження з врахуванням вшх можливих збудникiв маститiв. Ощнити складнiсть дослiджень такого комплексу дуже важко, тому що система взаемозв'язюв в ньому практично необмежена, заплутана i досить розгалужена.
Будь-яке дослщження мае межi достовiрностi отримано! шформаци. Певною мiрою саме цим пояснюеться те, що алел^ асоцiйованi зi стшкютю до маститiв, виявляються у хворих тварин i навпаки. Якщо у випадку комбшаци *Зд/*А виявляеться хвора тварина, що можна пояснити впливом нешформативного алеля, то наявнють у хворо! корови генотипу *Зд/*Зд може пояснюватися лише невщомими особливостями впливу гомозиготи на асощащю «генотип-захворювання» або в крайньому випадку помилкою дослщження.
Перспективи подальших дослщжень. В Украш тшьки розпочато вивчення асощацш у парi «алель - мастит». Необхщно нарощувати масив шформаци, як щодо впливу рiзниx факторiв на дану асощащю, так i щодо особливостей !! для рiзниx порщ, поширених в Украш.
Лiтература
1. Allelic polymorphism in exon 2 of the BoLA-DRB3 gene in Iranian Holstein cows / Gh. Nikbakht, M. M. Ranjbar, F. Ghasemi, F. Asadian // Animal Production Research. - 2012. - V.1. - №2. - P.33-41.
2. Detection of bovine leukocyte antigen DRB3 alleles as candidate markers for clinical mastitis resistance in Holstein x Zebu / M. Duangjinda, D. Buayai, V. Pattarajinda [et al.] // J. Anim. Sci. - 2009. - №87. - №2. - Р.469-476.
3. Association of the BoLA-DRB3 alleles with estimated breeding value for somatic cell count in Polish dairy cattle / G. Sender, K. Galal, K. Hameid [et al.] // Archiv fur tierzucht. - 2008. - V.51. - №2. - P.111-119.
4. Rupp R. Association of bovine leukocyte antigen (BoLA) DRB3.2 with immune response, mastitis, and production and type traits in Canadian Holsteins / R. Rupp, A. Hernandez, B.A. Mallard // J. Dairy Sci. - 2007. - V.90 (2). - P.1029-1038.
5. Sequence-Based Typing-Study on the Relationship Between Subclinical Mastitis and BoLA-DRB3.2* Allelic Polymorphism in Egyptian Cows / Ebtihal A. Ibrahim, Nesreen A.T. Allam, Ebtisam E.Z. [et al.] // Global Veterinaria. - 2012. - V.9. - №1. - P.8-22.
6. The Major Histocompatibility Complex in Bovines: A Review / Y.D. Behl, N.K. Verma, N. Tyagi [et al.] // Int. Scholarly Res. Network : ISRN Veterinary Science. - 2012, Article ID 872710. - 12 p.
231
7. Рузина Мария Николаевна. Анализ полиморфизма гена BOLA-DRB3 в связи с генетической устойчивостью крупного рогатого скота к лейкозу и вирусоносительством : дис... канд. биол. наук : 03.02.07/ Рузина Мария Николаевна ; ИОГен РАН им. Н.И. Вавилова. - М.: ИОГен РАН, 2012. - 152 с. - Библ.: с.113-127.
8. Lin Jyun-Hong. Analysis of relationships between BoLA-DRB3.2 alleles, mastitis, and milk traits by noninvasive sampling methods [Електронний ресурс]. - Режим доступу до статп: http://ntur.lib.ntu.edu.tw/handle/246246/253870?Locale =zh-TW.
9. Zambrano J. Alleles of the BoLA DRB3.2 gene are associated with mastitis in dairy cows / Juan C. Zambrano, Julián Echeverri, Albeiro López-Herrera // Rev Colom. Cienc. Pecua. - 2011. - V.24. - №2. - P. 145-156.
10. Bovine lymphocyte antigen class II alleles as risk factors for high somatic cell counts in milk of lactating dairy cows / A.B. Dietz, N.D. Cohen, L. Timms, M.E. Kehrli // J. Dairy Sci. - 1997. - V.80. - P.406-412.
11. Genetic association between parameters of inmate immunity and measures of mastitis in periparturient Holstein cattle / S.C. Kelm, J.C. Dettileux, A.E. Freeman [et al.] // J. Dairy Sci. - 1997. - V.80. - P.1767-1775.
12. Frequencies and effects of alternative DRB3.2 alleles of bovine lymphocyte antigen for Holsteins in milk selection and control lines / R.J. Starkenburg, L.B. Hansen, M.E. Kehrli, H.J. Chester-Jones // Dairy Sci. - 1997. - V.80. - P.3411-3419.
13. Sharif S. Presence of glutamine at position 74 of pocket 4 in the BoLA-DR antigen binding groove is associated with occurrence of clinical mastitis caused by Staphylococcus species / S. Sharif, B.A. Mallard, J.M. Sargeant // Vet. Immunol. Immunopathol. - 2000. - V.31. - №76. - P.231-238.
14. Association of BoLA-DRB3 alleles with mastitis resistance and susceptibility in Japanese Holstein cows / T. Yoshida, H. Furuta, Y. Kondo, H. Mukoyama // Anim. Sci J. -2012. - V.83. - №5. - P.359-366.
15. Study on the association of BoLA-DRB3.2 alleles with clinical mastiitis in Norvegian Red cows / S. Kulberg, B. Heringstad, O.A. Guttersrud, I. Olsaker // J. Anim. Breed. Genet. - 2007. - V.124. - P.201-207.
16. Сулимова Г.Е. Анализ полиморфизма ДНК с использованием метода полимеразной цепной реакции: методическое пособие к практикуму "ДНК-маркеры для генетической паспортизации и улучшения геномов животных хозяйственно ценных видов"/ Г.Е. Сулимова, В.В. Зинченко. - М.: Цифровичок, 2011. - 94 с.
17. Distribution of BoLA-DRB3 Allelic Frequencies and Identification of a New Allele in the Iranian Cattle Breed Sistani (Bos indicus) / A. Mohammadi, M.R. Nassiry, J. Mosafer [et al.] // Genetika. - 2009. - Т.44. - №2. - С.198-202.
Стаття надшшла до редакцИ 18.09.2015
УДК 619:611:636.5
Тибшка А. М., д.вет.н., доцент, ([email protected]) ©
Льегеський нацгональний ушеерситет еетеринарног медицины та б1отехнологт 1мен1 С. З. Гжицького. м. Лье1е. Украта Паладшчук О. Р., к.с.-г.н., доцент, (paladsj chuk@mail. ru)
Втницький нацгональний аграрний утеерситет. м. Ынниця. Украгна
ХАРАКТЕРИСТИКА КРОВОНОСНИХ СУДИН КИШЕЧНИКУ ТА ЙОГО БРИЖ1
Загальний принцип кроеопостачання кишечнику як трубкоподгбного органа. полягае е тому. що паралельно доегш ос1 кишки. з боку прикртлення брижг. тдходять артерп. поперечш гыки яких кыьцепод1бно охоплюють кишку. Вгд них у кишкоеу сттку егдходять прям1 артерп (vasa recta). Вони спочатку проходять тд серозною оболонкою. пот1м проникають через м'язоеу оболонку. егддаючи гыки кожнш з них.
© Тибшка А. М., Паладшчук О. Р., 2015
232
