CC BY
109
8. Самсыгина ГА. Современные муколитические средства: вопросы выбора терапии //Фарматека. 2005. № 2. С. 39-43.
9. Соколов С.Я. Справочник по лекарственным растениям. - М., 2006. - 388 с.
10. Сорока Н.Д., Власова Т.Г. Пероральные цефалоспорины в лечении инфекций нижних дыхательных путей у детей: опыт применения препарата супракс (цефиксим) // Фарматека. 2005.- № 2. - С. 34-38.
11. Чжуд-ши. Т. 3. Тантра наставлений / пер. с тиб. Д.Б. Дашиева. Улан-Удэ, 1991. - 286 с.
12. Collet J.P., Shapiro P., Emst P. Effects of an immunostimulating agent on acute exacerbations and hospitalizations in patients with chronic obstructive pulmonary disease // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1997. Vol. 156. - P. 1719-1724.
13. Seemungal T.A., Donaldson G.C., Paul E.A. Effect of exacerbation on quality of life in patients with chronic obstructive pulmonary disease // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1998. - Vol. 158. - P. 1418-1422.
Ажунова Татьяна Александровна - доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории экспериментальной фармакологии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН. 670047, Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, тел. 8(3012) 433713, е-mail: [email protected].
Ванчикова Аягма Гармаевна - аспирант Института общей и экспериментальной биологии СО РАН. 670047, Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.
Azhunova Tatyana Alexandrovna - dr of biol. sci., leading scientist, Institute of General and Experimental Biology, SB RAS. Ulan-Ude, Sakhyanova str., 6, Institute of General and Experimental Biology, ph. (3012) 433713, e-mail: [email protected].
Vanchikova Ayagma Garmaevna - post-graduate of Institute of General and Experimental Biology, SB RAS. 670047, Ulan-Ude, Sakhyanova str., 6.
УДК 615.017:615.322 Е.А. Ботоева, Д.Н. Оленников,
Л.М. Танхаева, И.П. Убеева АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТЬ СУХИХ ЭКСТРАКТОВ
cacalia hastata, orthilia secunda и panzerina LANATA
Проведено исследование антиоксидантной активности сухих экстрактов Cacalia hastata, Orthilia secunda и Panzerina lanata методами in vitro. Установлено, что данные фитосредства обладают антиоксидантным действием. В результате изучения химического состава показано, что фенольные соединения (флавоноиды, фе-нилпропаноиды, фенольные кислоты) обусловливают наличие данного вида биологической активности.
Ключевые слова: Cacalia hastata, Orthilia secunda, Panzerina lanata, антиоксидантная активность, фенольные соединения, ВЭТСХ.
Е.А. Botoeva, D.N. Olennikov, L.M. Tankhaeva, I.P. Ubeeva ANTIOXIDANT ACTIVITY OF DRY EXTRACTS FROM CACALIA HAsTATA,
orthilia secunda and panzerina lanata
The study of antioxidant activity of dry extracts from Cacalia hastata, Orthilia secunda and Panzerina lanata using methods in vitro is carried out. It was found that the phytoremedies has an antioxidant effect. As a result of studying the chemical composition it was shown that the presence of phenolic compounds (flavonoids, phenylpropanoids, phenolic acids) determines the presence of this type of biological activity.
Key words: Cacalia hastata, Orthilia secunda, Panzerina lanata, antioxidant activity, phenolic compounds, HPTLC.
Актуальность проблемы заболеваний матки и ее придатков определяется их высокой частотой, склонностью к длительному течению, нарушением репродуктивной функции с развитием полисистем-ных расстройств. Научно обоснованная и правильно организованная лечебно-профилактическая помощь больным способствует трудоспособности, улучшает социальные и семейные, бытовые условия жизни женщины. Несвоевременное и неадекватное лечение заболеваний половых органов приводит к хронизации процесса и является причиной бесплодия, внематочных беременностей, тазовых болей, а также инвалидности женщин в возрасте социальной активности. Используемые в настоящее время методы терапии не всегда позволяют добиться полной реабилитации больных и предотвратить рецидивы. Это в определенной степени можно объяснить тем, что при заболеваниях матки и ее придатков в пато-
логический процесс вовлекаются все звенья нейроэндокринной системы, центральная и вегетативная нервная, сердечно-сосудистая, мочевыделительная, иммунная системы, гемостаз и обмен веществ. Все это ведет к нарушению специфических функций женского организма и при определении тактики лечения дает основания для более широкого использования немедикаментозных методов, направленных на повышение собственных защитных сил организма. Многогранность действия лекарственных растительных средств превращает фитотерапию в незаменимый компонент комплексного лечения заболеваний матки и ее придатков. Поэтому, несмотря на то, что современный арсенал лекарственных препаратов достаточно обширен, проблема изыскания новых высокоэффективных, безвредных, удобных в применении средств природного происхождения остается весьма актуальной. Сведения об использовании растений в народной и традиционной медицине являются ориентиром для выбора направления поиска новых видов лекарственного сырья.
В качестве объектов исследования выбраны сухие экстракты трех растительных видов - Cacalia hastata, Orthilia secunda и Panzerina lanata, они применяются в народной медицине в качестве эффективных средств при лечении гинекологических заболеваний. Известно, что включение в комплексную терапию воспалительных процессов матки и ее придатков препаратов, обладающих антиоксидантным и мембраностабилизирующим действием, оказывает положительный эффект. Учитывая важную роль антиоксидантной защиты организма для устранения последствий воспаления, нами проведено исследование антиоксидантной активности указанных фитосредств с применением методов in vitro.
Листья C. hastata и O. secunda были собраны в с. Мухоршибирь (июль 2009 г.), надземная часть P lanata - в с. Ацагат (июль 2009 г.). Видовая принадлежность определена он Т.А. Асеевой (ИОЭБ СО РАН). Образцы сырья хранятся в гербарии Отдела биологически активных соединений ИОЭБ СО
Сухие экстракты (далее СЭ) были получены в лабораторных условиях согласно технологическим схемам, ранее разработанным в ИОЭБ СО РАИ. Фракционирование СЭ проводили методом градиентной жидкофазной экстракции с применением ряда растворителей: СЭ C. hastata - гексан, хлороформ, этилацетат, н-бутанол; СЭ O. secunda - хлороформ, этилацетат, н-бутанол (в ходе фракционирования наблюдалось выпадение межфазного осадка, который также подвергали исследованию); СЭ P lanata -гексан, хлороформ, этилацетат.
Спектрофотометрические исследования проводили на спектрофотометре UV-Vis-mini (Shimadzu). ВЭТСХ анализ проводили на пластинах Сорбфил ПТСХ-АФ-В (Имид Ltd.), хроматографирование проводили в системе растворителей этилацетат-муравьиная кислота-вода-толуол (10:1:1:0.5), проявители - 1%-ный раствор И3ВО3 в 95%-ном этаноле, 0,5%-ный раствор ДФПГ в 95%-ном этаноле. Общие условия ВЭТСХ анализа описаны ранее [1]. ВЭЖХ проводили на микроколоночном жидкостном хроматографе Милихром А-02 (Эконова), колонка Nucleosil 100-5 C18 (5 цм, 75^2 мм), градиентный режим элюирования (А - 0,05 М КН2РО4/МеCN 95:5, В - МеОИ), v = 0,15 мл/мин, Т = 35 °С, УФ-детектор при X = 202, 224, 270, 278 нм. В ходе анализа определялись хроматографическая подвижность, спектр в остановленном потоке растворителя, спектральные соотношения, а также проводились опыты с добавками стандартных соединений.
В работе использовали следующие образцы СОВС: (+)-катехин, (-)-эпигаллокатехин галлат (Chroma Dex), кверцетин, галловая, кофейная, хлорогеновая кислоты (Fluka), рутин, лютеолин-7-глюкозид, ио-нол, линолевая кислота (Sigma), Р-каротин (Acros Organics), 1,1-дифенил-2-пикрилгидразил радикал (ДФПГ, MP Biomedicals Inc.); остальные реактивы имели степень чистоты ч.д.а.
Общую антиоксидантную емкость (TAC) исследуемых средств определяли по методу Preito с соавт. [2], антирадикальную активность (DPPH) - с применением радикала ДФПГ [3], влияние исследуемых средств на динамику перекисной деградации Р-каротина (CBA) - по методу [4]. Вклад фракций в проявление активности (I) рассчитывали по формуле:
РАИ.
Г =
•100%
где IClS0 - показатель 50% связывания (инактивации и т.п.) i-ной фракции, X. - содержание i-ной фракции в суммарном препарате (сухом экстракте) в долях единицы.
Общее содержание фенольных соединений определяли по методу Фолина-Чиокальте в пересчете на галловую кислоту [3], суммарное содержание флавоноидов - с применением дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на рутин [5], суммарное содержание фенилпропаноидов - прямой спектрофотометрии в пересчете на хлорогеновую кислоту [6]. Статистическую обработку проводили согласно рекомендациям [7].
СЭ Cacalia hastata. В результате исследования способности к восстановлению биологического субстрата в условиях in vitro установлено, что общая антиоксидантная емкость СЭ С. hastata составляет 263,72 мг/г (табл. 1). Данное фитосредство обладает выраженной антирадикальной активностью в отношении радикалов ДФПГ (IC50 37,84 мкг/мл).
Таблица 1
Антиоксидантная активность исследуемых средств
Средство TAC, мг/г а DPPH, IC50, мкг/мл CBA, IC50, мкг/мл
СЭ С. hastata 2б3,72±7,89 37,84±1,11 94,54±2,84
СЭ O. secunda 384,5б±11,53 4,79±0,14 172,22±5,17
СЭ P lanata 178,29±5,34 55,71±1,б7 209,8б±б,30
Кверцетин б 1GGG 9,93±0,27 б,02±0,03
а мг кверцетина на 1 г средства; б вещество сравнения.
Таблица 2
Антиоксидантная активность фракций исследуемых средств а
HF CF EF BF WF P
СЭ С. hastata
DPPH б 429,18 319,40 78,39 15,90 б2,38 -
CBA б >500 >500 170,79 120,72 130,53 -
СЭ O. secunda
DPPH - 47,98 4,04 18,31 3б,05 4,52
CBA - 11б,39 202,9б 213,83 28б,85 54,б5
СЭ P lanata
DPPH >500 11б,23 12,92 - 194,57 -
CBA 259,93 220,22 170,88 - 238,09 -
а фракции: HF - гексановая, CF - хлороформная, EF - этилацетатная, BF - н-бутанольная, WF - водная, P -межфазный осадок; б IC50, мкг/мл.
Детальное исследование фракций СЭ показало, что величина радикал-связывающего действия снижается в ряду: н-бутанольная (15,90 мкг/мл)>водная>этилацетатная>хлороформная>гексановая (429,18 мкг/мл) (табл. 2). При определении вкладов фракций в проявление данного вида активности установлено, что более чем на 90% она обусловлена компонентами, присутствующими в бутанольной и водной фракциях (рис. 1). Аналогичная зависимость выявлена при изучении динамики деградации Р-каротина в системе линолевая кислота-ДМСО-Н2О2. Антиоксидантная активность СЭ, определенная методом СВА, составляет 94,54 мкг/мл.
□ РРП
С. \iastata
О. хесшиїа СВА
Р. Іапаїа
■ і
□ С\1
в со
ш 4
в 5
а СО
С. ІгахШіа
О. хесшиїа
Р. Іапаїа
Рис. 1. Вклады фракций в проявление антирадикальной (иРРН) и антиоксидантной видов активности (СВА). Фракции: 1 - гексановая, 2 - хлороформная, 3 - этилацетатная, 4 - н-бутанольная, 5 - водная,
6 - межфазный осадок.
Таблица 3
Содержание и состав фенольных соединений исследуемых средств а
Класс соединений СЭ С. hastata СЭ O. secunda СЭ P. lanata
Флавоноиды 8,21±0,16% (кверцетин, кемпферол, рутин, гиперозид, катехин) 6,64±0,09% (кверцетин, кемпферол) 6,87±0,13% (рутин, гиперозид)
Фенольные кислоты 22,40±0,65% 6 (галловая, кофейная, хлорогеновая) н.о. в (галловая, хлорогеновая) 8,24±0,16% 6 (кофейная, хлорогеновая, неохлорогеновая)
Общие фенолы 32,92±1,29% 45,14±1,35% 16,62±0,50%
а в скобках указаны идентифицированные соединения, шрифтом выделены доминирующие компоненты; 6 суммарное содержание фенилпропаноидов; в показатель не определялся.
В ходе химического анализа (ВЭТСХ, ВЭЖХ) установлено, что в составе СЭ С. hastata присутствуют флавоноиды (8,21%) и фенилпропаноиды (22,40%), обусловливающие наличие выраженной антиоксидантной активности (табл. 3). Данный факт был подтвержден с применением метода ВЭТСХ с постхроматографической дериватизацией радикалом ДФПГ (ВЭТСХ-аутография), использование которого показало, что наибольшая деколоризация хроматограммы наблюдается в местах адсорбции рутина, гиперозида, хлорогеновой и кофейной кислот.
СЭ ОнЫШа secunda. Величина общей антиоксидантной емкости СЭ O. secunda наибольшая из всех исследуемых средств (384,56 мг/г). Антирадикальная активность СЭ составляет 4,79 мкг/мл и превышает таковую стандартного антиоксиданта кверцетина (9,93 мкг/мл). Распределение фракций СЭ согласно их активности следующее: этилацетатная (4,04 мкг/мл)>межфазный осадок>н-бутанольная>водная>хлороформная (47,98 мкг/мл), причем вклад этилацетатной фракции в проявлении данного действия составляет более 80%. Методом СВА установлено, что значение 1С50 СЭ состав-
ляет 172,22 мкг/мл; наиболее активными являются компоненты межфазного осадка (54,65 мкг/мл) и хлороформной фракции (116,39 мкг/мл). Вклад соединений, составляющих хлороформную фракцию, в защиту Р-каротина от перекисного повреждения максимальный. В составе CЭ O. secunda обнаружено присутствие флавоноидов (6,64%) и фенольных кислот; общее содержание фенольных соединений -45,14%. ВЭTCХ-аyтография показала, что к наиболее активным соединениям CЭ O. secunda относятся простые фенольные кислоты (галловая кислота) и танниды (галлоилированные глюкозы).
СЭ Panzerina lanata. Общая антиоксидантная емкость CЭ P lanata - 178,29 мг/г, а величина анти-радикальной активности равна 55,71 мкг/мл. ^иболее активной фракцией CЭ является этилацетная (12,92 мкг/мл), наименее активной - гексановая (> 500 мкг/мл). Aнтиоксидантная активность, определенная с применением CВA-метода, составляет 209,86 мкг/мл. бедует отметить, что если в случае метода DPPH влияние этилацетатной и водной фракций было близким и составило в сумме около 90% от общей активности, то для CВA-метода наиболее активной является водная фракция (около 70%). Исследование химического состава CЭ P lanata показало, что доминирующими соединениями являются фенилпропаноиды (8,24%, в т.ч. неохлорогеновая и кофейная кислоты) и флавоноиды (6,83%, в т.ч. рутин и гиперозид), которые, по данным ВЭTCХ-аyтографии, являются наиболее активными.
Tаким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что сухие экстракты Cacalia hastata, Orthilia secunda и Panzerina lanata обладают потенциалом к восстановлению биологического субстрата, проявляют выраженное антирадикальное действие и ингибируют процесс перекисной деградации Р-каротина. Изучение химического состава и данные ВЭTCХ-аyтографии показали, что наличие фенольных соединений (флавоноидов, фенилпропаноидов, фенольных кислот) обусловливает наличие данного вида биологической активности. Pезyльтаты проведенных исследований дают основание рассматривать исследованные фитосредства в качестве потенциальных антиоксидантных агентов.
Известно, что основным патогенетическим механизмом развития мембранодеструктивных нарушений в клетках ткани матки при остром эндометрите является активация перекисного окисления липидов, не компенсирующаяся антиоксидантной системой организма. Включение в комплексную терапию препаратов, обладающих антиоксидантным и мембраностабилизирующим действием, приводит к ослаблению мембранодеструктивных нарушений в организме больных острым эндометритом, оказывает положительный эффект на течение и исход заболевания. Полученные данные аргументируют целесообразность применения исследованныех фитосредств в гинекологической практике в комплексе с другими лечебно-профилактическими мероприятиями.
Литература
1. Olennikov D.N. Densitometric HPTLC analysis of aloenin in Aloe pharmaceuticals // Journal of Planar Chromatography. -2009. - Vol. 22. - № 5. - P. 359-362.
2. Preito P., Pineda M., Aguilar M. Spectrophotometric quantitation of antioxidant capacity through the formation of a phos-phormolybdenum complex: specific application to the determination of vitamin // Analytical Biochemistry. - 1999. - Vol. 269. - № 2. - P. 337-341.
3. Seyoum A., Asres K., El-Fiky F.K. Structure-radical scavenging relationships of flavonoids // Phytochemistry. - 2006. - Vol. 67. - № 18. - P. 2058-2070.
4. Olennikov D.N., Tankhaeva L.M. Lamiaceae carbohydrates. I. Pectinic substances and hemicelluloses from Mentha piperita // Chemistry of Natural Compounds. - 2007. - Vol. 43. - № 5. - P. 501-507.
5. Cyпильникова AB. Качественный и количественный анализ лекарственного сырья и настойки полыни эстрагон // Фармация. - 2002. - № 3. - C. 11-14.
6. Мжаванадзе В.В., Tаргамадзе И.Л., Драник Л.И. Количественное определение хлорогеновой кислоты в листьях черники кавказской // ^общения AH Грузинской CCP. - 1971. - T. 63. - № 1. - C. 205-207.
7. Дёрффель К. Cтатистика в аналитической химии. - М.: Мир, 1994.
Ботоева Елена Аполлоновна - кандидат медицинских наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии с курсом педиатрии Бурятского государственного университета. 670002, Улан-Удэ, ул. Октябрьская, 36, тел. (3012) 448255, е-mail: [email protected].
Оленников Даниил Николаевич - кандидат фармацевтических наук, старший научный сотрудник лаборатории медико-биологических исследований Института общей и экспериментальной биологии CO PAH. 670047, Улан-Удэ, ул. Cахьяновой, 6, тел.: (3012) 433463, (9021) 600627, е-mail: [email protected].
Танхаева Лариса Максимовна - кандидат фармацевтических наук, старший научный сотрудник лаборатории медико-биологических исследований Института общей и экспериментальной биологии CO PAH. 670047, Улан-Удэ, ул. Cахьяновой, 6, тел.: (3012) 433463, (9021) 600627, е-mail: [email protected].
Убеева Ираида Поликарповна - доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой инфекционных болезней Бурятского государственного университета. 670002, Улан-Удэ, ул. Октябрьская, 36.
Ю.А. Капустина, С.Д. Жамсаранова, Э.Б. Битуева. Влияние биологически активной добавки, содержащей йод, на гистоморфологию тимуса при экспериментальном гипотиреозе
Botoeva Elena Apollonovna - cand. of medical science, assistant professor of department of obstetrics and gynecology with a pediatrics course, Buryat State University. 670002, Ulan-Ude, Oktyabr’skaya str., 36, ph.: (3012) 448255, e-mail: [email protected].
Olennikov Daniil Nikolayevich - cand. of pharmaceutical science, senior scientific researcher of laboratory of medical and biological research, Institute of General and Experimental Biology SB RAS. 670002, Ulan-Ude, Oktyabr’skaya str., 36, ph. (3012) 433463, (9021) 600627, e-mail: [email protected].
Tankhaeva Larisa Maximovna - cand. of pharmaceutical science, senior scientific researcher of laboratory of medical and biological research, Institute of General and Experimental Biology SB RAS. 670002, Ulan-Ude, Oktyabr’skaya str., 36, ph. (3012) 433463, (9021) 600627. E-mail: [email protected].
Ubeeva Iraida Polikarpovna - dr of medical sci., prof., head of department of infectious diseases, Buryat State University. 670002, Ulan-Ude, Oktyabr’skaya str., 36.
УДК 616.441 Ю.А. Капустина,
С.Д. Жамсаранова, Э.Б. Битуева
ВЛИЯНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ, СОДЕРЖАЩЕЙ ЙОД,
НА ГИСТОМОРФОЛОГИЮ ТИМУСА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГИПОТИРЕОЗЕ
Статья посвящена экспериментальному исследованию гистоморфологии тимуса лабораторных животных при введении разработанной нами добавки «Йод-эластин».
В данной работе установлено, что введение йодсодержащей добавки восстанавливает морфофункциональное состояние тимуса на фоне экспериментального гипотиреоза, вызванного введением мерказолила.
Ключевые слова: биологически активная добавка, гормоны щитовидной железы, йодная недостаточность, иммунная система.
Yu.A. Kapustina, S.D. Zhamsaranova, E.B. Bitueva INFLUENCE OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUPPLEMENT, CONTAINING IODINE, ON THE GISTOMORFOLOGY OF TIMUS IN CONDITIONS OF EXPERIMENTAL IODINE INSUFFICIENCY
The ortide is devoted to the experimental studying of the gistomorfology of laboratory animals ’ timus while entering them the additive «lodine-elastin», developed by us.
In the work it was established that the introduction of «lodine-elastin» restores the morphological state of timus on the background of experimental iodine insufficiency, caused by entering of mercazolil.
Key words: biologically active supplement, hormones of the thyroid gland, iodine insufficiency, immune system.
Введение
Одним из наиболее масштабных микроэлементозов на Земле является зобная эндемия, обусловленная, как правило, дефицитом йода. Основными проявлениями йодной недостаточности являются эндемический зоб (диффузный, узловой), явные и субклинические формы гипотиреоза, функциональная автономия щитовидной железы.
Ранняя йодная профилактика предупреждает развитие перечисленных отклонений. Известно, что недостаток йода в организме служит предпосылкой для развития вторичных иммунодефицитных состояний [3]. Многочисленные работы свидетельствуют о тесных функциональных связях иммунной и эндокринной систем организма [4]. При дефиците гормонов щитовидной железы наблюдаются существенные нарушения иммунологических функций. Роль йода в формировании иммунологических процессов до сих пор остаётся малоизученной.
Ранее были представлены данные исследования состояния иммунной системы организма при введении биологически активной добавки к пище «Йод-эластин» в условиях мерказолилового гипотиреоза. Были рассмотрены показатели гуморального звена иммунного ответа и функциональной активности перитонеальных макрофагов. Было установлено позитивное влияние разработанной биологически активной добавки «Йод-эластин» на показатели иммунитета экспериментальных животных [2].
исследованные показатели не всегда являются достаточными для оценки состояния иммунной си-
