CC BY
26
УДК: 578.832.1
Ключевые слова: грипп птиц, A/H5N1, антигенное родство, РТГА
Key words: avian influenza, A/H5N1, antigenic relationship, HI
Табынов К. К., Мамадалиев С. М., Азанбекова М. А., Мамбеталиев М.
АНТИГЕННЫЕ ВЗАИМОСВЯЗИ ВЫСОКОПАТОГЕННЫХ ШТАММОВ ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ А/Н5Ш, ВЫДЕЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН В 2005-2006 ГОДЫ
ANTIGENIC RELATIONSHIP BETWEEN THE HIGHLY PATHOGENIC STRAINS OF THE AVIAN INFLUENZA VIRUS A/H5N1 ISOLATED ON THE TERRITORY OF THE REPUBLIC OF KAZAKHSTAN IN 2005-2006
ДГП «Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности» (НИИПББ) НЦБ РК КН МОН РК, п.г.т. Гвардейский, Республика Казахстан
DGE «Research Institute for Biological Safety Problems» of the RK NBC/SC ME&S RK, Gvardeiskiy, Republic of Kazakhstan
Табынов Кайрат Казыбаевич, науч. сотрудник лаборатории «Коллекция микроорганизмов». Тел.: +7 (727) 321-10-14 Tabynov Kairat K., Research Scientist of the Labaratory «The collection of Microorganisms». Tel.: +7 727 321-10-14 Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич, директор, докт. вет. наук, проф. Тел.: +7 (727) 321-10-14 Mamadaliyev Seidigapbar M., Director, Doctor of Veterinary Science, Professor. Tel.: +7 72 7 321-10-14 Азанбекова Молдир Абдильдаевна, ст. лаборант лаборатории «Коллекция микроорганизмов». Тел.: +7 (727) 321-10-14 Azanbekova Moldir A., Senior Assistant of the Laboratory «The collection of Microorganisms». Tel.: +7 727 321-10-14 Мамбеталиев Муратбай, зав. лабораторией «Коллекция микроорганизмов», канд. вет. наук. Тел.: +7 (727) 321-10-14 MambetaliyevMuratbay, Head of the Laboratory «The collection of Microorganisms». Tel.: +7 727 321-10-14
Аннотация. Представлены результаты изучения антигенных взаимосвязей штаммов высокопатогенного вируса гриппа птиц A/H5N1, выделенных на территории Республики Казахстан в 2005-2006 гг., в перекрестной реакции торможения гемагглютинации.
Изучение антигенных взаимосвязей высокопатогенных штаммов ВГП A/H5N1, выделенных на территории Казахстана в 2005-2006 гг., в перекрестной РТГА показало, что изолированные штаммы ВГП родственны между собой, но не идентичны.
Summary. The paper presents the results of studying antigenic relationship of the highly pathogenic avian influenza A/H5N1 virus strains isolated on the territory of the Republic of Kazakhstan in 2005-2006 with the help of the cross hemagglutination-inhibition reaction.
The study of antigenic relationship of the highly pathogenic avian influenza A/H5N1 virus strains isolated on the territory of the Republic of Kazakhstan in 2005-2006 with the help of the cross hemagglutination-inhibition reaction showed that isolated strains of avian influenza virus are related but not identical.
Введение
Отличительной особенностью вирусов гриппа является необыкновенно высокая изменчивость их антигенных свойств, связанная в первую очередь с наличием сегментированной одноцепочечной отрицательной РНК. Наибольшей степени изменчивости подвержены поверхностные гликопротеины вируса - гемагглютинин и нейраминидаза [6].
Путем сравнения штаммов вируса гриппа птиц (ВГП) в перекрестной реакции торможения гемагглютинации (РТГА) устанавливается характер их серологических отношений. Эти отношения могут отражать небольшие антигенные различия по белку гемагглюти-нину между сходными штаммами, а также
служить признаком кардинальных различий между группами штаммов [1].
В 2005-2006 гг. на территории Республики Казахстан в популяциях домашних и диких птиц зарегистрированы вспышки высокопатогенного гриппа птиц А/Н5Ш [2]. Сотрудниками ДГП «Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности» НЦБ РК КН МОН РК (НИИПББ) с участием ДГП «Институт микробиологии и вирусологии» ЦБИ МОН РК (ИМВ) из очагов эпизоотии изолированы 6 штаммов ВГП.
Цель настоящих исследований заключалась в изучении антигенных взаимосвязей высокопатогенных штаммов А/домашний гусь/Павлодар/1/05 (Н5Ш), А/дикая утка/Павлодар/2/05 (Н5Ш),
А/курица/Караганда/4/05 (H5N1), А/кури-ца/СКО/5/05 (H5N1), A/chicken/Astana/6/05 (H5N1) и А/лебедь шипун/Мангистау/3/06 (H5N1) вируса гриппа птиц, выделенных на территории Республики Казахстан в 20052006 гг.
Материалы и методы
Вирусы. В работе использовали высокопатогенные штаммы ВГП из Коллекции микроорганизмов НИИПББ (табл. 1). Вирусы культивировали в системе 10-11-суточных куриных эмбрионов согласно рекомендации МЭБ [5].
Для получения иммунных сывороток к высокопатогенным штаммам ВГП использовали по 3 кролика породы шиншилла массой 2,5-3,0 кг, иммунизированных очищенными и концентрированными в градиенте плотности сахарозы 20-40-60 % штаммами ВГП. Антиген в возрастающей дозе дробно вводили кроликам в сочетании с масляным адъю-вантом «Montanide ISA-70» (производства Seppic, France) в соотношении 3:7 и без него, подкожно в область предлопаточных лимфоузлов и подушечек лап.
Степень антигенного родства штаммов ВГП определяли согласно методу Archetti I. and Horsfall F. L. [4] по следующей формуле:
• =Vr
1 2'
где г1 - титр сыворотки с гетерологичным вирусом (вирус 2), разделенный на титр сыворотки с гомологичным вирусом (вирус 1); г2 - титр сыворотки с гетерологичным вирусом (вирус 1), разделенный на титр сыворотки с гомологичным вирусом (вирус 2).
Результаты и обсуждение
Для изучения антигенных взаимосвязей казахстанских штаммов ВГП получены иммунные кроличьи сыворотки к шести штаммам сероподтипа H5N1 (А/домашний гусь/Павлодар/1/05, А/дикая утка/ Павлодар/2/05, А/курица/Караганда/4/05, А/курица/СК0/5/05, A/chicken/Astana/6/05, А/лебедь шипун/Мангистау/3/06) и к эталонному штамму А/крачка/Южная Африка/61 подтипа H5N3. Результаты изучения антигенных взаимоотношений между штаммами ВГП обобщены в таблице 2.
Как видно из данных таблицы 2, односторонние антигенные связи выявлены между вирусом 1/05 и антисыворотками 3/06, ЮА/61; штаммами 2/05, 4/05, 5/05 и антисывороткой ЮА/61; 6/05 и 3/06, ЮА/61; ЮА/61 и 1/05, 2/05, 4/05, 5/05, 3/06. Штаммы 1/05, 2/05, 4/05, 5/05, 6/05 и антисыворотки к ним связаны друг с другом двусторонним антигенным родством.
На основании полученных результатов в РТГА вычислили степень антигенного родства между штаммами ВГП в процентном соотношении по методу Archetti I. and Horsfall F. L. [4]. Результаты исследований представлены в таблице 3.
Из данных таблицы 3 видно, что штаммы сероподтипов H5N1 и H5N3 взаимодействовали как с гомологичными, так и с гетероло-гичными сыворотками, при этом у вариантов 1/05, 2/05, 4/05 отмечено близкое антигенное родство, так как они взаимодействовали друг с другом в титрах от 1/2,8 (40 %) до гомологичного. В случае антисывороток к штаммам 5/05 и 6/05 наблюдалось торможение
Таблица 1.
Штаммы ВГП, использованные в данной работе
Наименование штаммов Сокращенное название Номер депонирования Инфекционная активность, lg ЭИД^/см3
А/дикая утка/Павлодар/2/05 (H5N1) 2/05 М-4-07/Д 8,66±0,08
А/домашний гусь/Павлодар/1/05 (H5N1) 1/05 М-3-07/Д 8,75±0,00
А/курица/СК0/5/05 (H5N1) 5/05 М-3-08/Д 8,00±0,00
А/курица/Караганда/4/05 (H5N1) 4/05 М-4-08/Д 8,00±0,00
A/chicken/Astana/6/05 (H5N1) 6/05 М-2-08/Д 8,16±0,08
А/лебедь шипун/Мангистау/3/06 (H5N1) 3/06 М-1-07/Д 7,75±0,00
А/крачка/Южная Африка/61 (H5N3) ЮА/61 7,50±0,00
Таблица 2.
Антигенные взаимоотношения между штаммами вируса гриппа птиц (перекрестная РТГА с гипериммунными штаммоспецифическими сыворотками)
Сыворотка Штамм вируса гриппа Н5
1/05 2/05 4/05 5/05 6/05 3/06 ЮА/61
Анти-1/05 1 1,58 0,5 0,8 0,63 0,1 0
Анти-2/05 0,63 1 0,35 0,8 0,31 0,07 0
Анти-4/05 0,44 0,7 1 0,16 0,25 0,0625 0
Анти-5/05 0,01 0,63 1 1 0,2 0,03 0
Анти-6/05 0,01 0,2 0,02 0,12 1 0,25 0,02
Анти-3/06 0 0,0625 0,01 0,04 0 1 0
Анти-ЮА/61 0,03 0,02 0,03 0,04 0,5 0,15 1
Примечания: десятичные дроби - отношение гетерологичного титра данной сыворотки к ее гомологичному титру; единица - гомологичный титр сыворотки или отношение, в котором гетерологичный титр равен гомологичному; ноль - отношение титров, составляющее дробь меньше 0,01 или полное отсутствие торможения реакции гемагглютинации гетерологичного вируса в разведении 1:10.
Таблица 3.
Степень антигенного родства штаммов вируса гриппа, выделенных в Казахстане, между собой и с эталонным штаммом вируса гриппа А/крачка/Южная Африка/61 в %
(по титрам гемагглютининов)
Сыворотка Штамм вируса гриппа Н5
1/05 2/05 4/05 5/05 6/05 3/06 ЮА/61
Анти-1/05 100 100 50 87,5 70 11 0
Анти-2/05 70 100 40 87,5 35 7,5 0
Анти-4/05 47,5 80 100 18 25 6,2 0
Анти-5/05 1,2 70 100 100 21,8 3,6 0
Анти-6/05 1,2 21,8 2,7 12,2 100 25 2,7
Анти-3/06 0 6,2 1,2 4,5 0 100 0
Анти-ЮА/61 3,6 2,2 3,6 4,5 50 16,8 100
Заключение
В результате изучения антигенных взаимосвязей высокопатогенных штаммов ВГП А/Н5Ш, выделенных на территории Казахстана в 2005-2006 гг., в перекрестной РТГА установлено, что изолированные нами штаммы ВГП родственны между собой, но не идентичны.
Список литературы
1. Жданов, В. М. Учение о гриппе / В. М. Жданов,
B. Д. Соловьев, Ф. Г. Эпштейн / М. : Медгиз, 1958. -
C. 128.
2. Мамадалиев, С. М. Мониторинг гриппа птиц в Казахстане / С. М. Мамадалиев, Ж. К. Кыдырба-ев, Б. М. Хайруллин // Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных. - Тр. Ульян. гос. с.-х. акад., 2006. -С.311-313.
3. Сандыбаев, Н. Т. Секвенирование и генетический анализ гемагглютинина и нейраминидазы
гемагглютинации штаммов 1/05, 4/05, 5/05, 6/05 и 3/06 в титрах от 1/100 (1,2 %) до гомологичного. Антисыворотка к штамму 3/06 реагировала со штаммами 2/05, 4/05 и 5/05 в титрах от 1/100 (1,2 %) до 1/16 (6,2 %), тогда как со штаммами 1/05 и 6/05 отмечено отсутствие взаимосвязи. Полученные результаты согласуются с данными секвенирования и генетического анализа гемагглютинина этих штаммов, приведенными в работе сотрудников НИИПББ [3].
Все штаммы с антигенной формулой Н5Ш реагировали с сывороткой к вирусу ЮА/61 (Н5Ю) в титрах от 1/50 (2,2 %) до 1/2 (50 %).
Таким образом, несмотря на одинаковую групповую принадлежность гемагглютинина и нейраминидазы (Н5Ш), штаммы, выделенные в период 2005-2006 гг., отличались друг от друга и от эталонного штамма.
штамма А/лебедь шипун/Мангистау/3/06 (Н5Ш) вируса гриппа птиц / Н. Т. Сандыбаев, В. М. Строчков, К. Т. Султанкулова, Е. В. Жолдыбаева, В. Л. Зайцев, С. М. Мамадалиев // Междунар. науч.-практич. конф. «Биотехнология в Казахстане: проблемы и перспективы инновационного развития», 19-21 мая 2008 г., Ал-маты [посвящ. 50-летию НИИ проблем биологической безопасности НЦБ МОН РК : материалы]. - Алматы, 2008. - С. 493-497.
4. Archetti, I. Persistent antigenic variation of influenza A virus after incomplete neutralization in ovo with heterologous immune serum / I. Archetti, F. L. Horsfall // J. exp. Med. - 1950. - V 92. - P. 441.
5. Avian influenza // OIE. Terrestrial Animal Health Code. - 15th ed. - Paris, 2006. - P. 302-309.
6. Menno, D. J. Avian influenza A (H5N1) / D. J. Menno, T. H. Tran // Clinical Virology. - 2006. -V. 35. - P. 3-4.
НОУ ДО «Институт Ветеринарной Биологии» |
Е
приглашает принять участие в семинаре 8.
«Рентгенодиагностика мелких домашних животных»
1 день. Основы рентгенологии. История открытия рентгеновских лучей. Физические аспекты рентгеновского излучения. Рентгенологическая терминология. Технические аспекты рентгеновского излучения. Принципы устройства рентгеновского аппарата. Фотохимия и изготовление рентгеновских снимков. Рентгенологические артефакты. Основные виды рентге-ноконтрастных веществ. Радиационная безопасность. Практическое занятие по самостоятельному изготовлению рентгеновских снимков.
2 день. Общая характеристика рентгенологического исследования костей и суставов. Основные элементы рентгенологической семиотики при патологических изменениях в костях. Переломы. Рентгенологические симптомы. Виды переломов. Заживление переломов. Вывихи. Костно-суставная патология нетравматического генеза. Укладки для рентгенографического исследования отдельных анатомических областей. Картина в норме и при патологии. Возрастные изменения: череп, зубы; позвоночник; грудина, ребра; конечности. Рентгенодиагностика дисплазии тазобедренных суставов собак.
3 день. Рентгенодиагностика органов грудной полости, верхних дыхательных путей и пищевода. Укладки, режимы съемки, норма, патология: пазухи; гортань, трахея; пищевод, съемка пищевода с рентгеноконтрастным веществом; легкие; сердце и сосуды; диафрагма.
4 день. Рентгенодиагностика органов брюшной полости. Укладки, норма, патология: желудок, рентгеноконтрастное исследование желудка; кишечник, рентгеноконтрастное исследование кишечника; печень; поджелудочная железа; селезенка; мочевой пузырь; предстательная железа; матка; почки; надпочечники. Комплексная оценка рентгенограмм брюшной полости.
5 день. Комплексное чтение рентгеновских снимков. Тестовое занятие.
График проведения семинара на I полугодие 2010 учебного года
<♦1
январь февраль март апрель май июнь
25 - 29.01 22 - 26.02 22 - 26.03 19 - 23.04 17 - 21.05 14 - 18.06
Место проведения: Санкт-Петербург, ул. Чапаева, д. 16а. Стоимость участия: 10000 рублей (НДС не облагается); наличный и безналичный расчет.
Предварительная запись на семинар обязательна: по тел./факсу (812) 232-55-92, +7 921 095-89-27, по e-mail: [email protected] или через форму on-line заявки на сайте: http://www.invetbio.spb.ru/form_seminar_Rg.htm
