CC BY
31
КРАТКОЕ СООБЩЕНИЕ
УДК 617.735-006.487-07
З.С. ИСЛАМОВ, М.С. ГИЛЬДИЕВА, Р.Х. УСМАНОВ
Республиканский онкологический научный центр МЗ РУз, 100174, г. Ташкент, ул. Фараби д. 383
Анализ цитогенетических изменений и их роль в ранней диагностике ретинобластомы
Исламов Зиявуддин Садриддинович — кандидат медицинских наук, руководитель отделения онкоофтальмологии, тел. (+99871) 246-98-86, e-mail: [email protected]
Гильдиева Маргарита Сабировна — доктор биологических наук, руководитель лаборатории генетики опухолей, тел. (+99871) 246-98-74, e-mail: [email protected]
Усманов Рустам Ходжиакбарович — младший научный сотрудник отделения онкоофтальмологии, тел. (+99871) 246-98-86, e-mail: [email protected]
Ретинобластома (Рб) — редкая внутриглазная опухоль, развивающаяся из незрелых клеток сетчатки, обусловлена мутацией онкосупрессорного гена -Rbl, локализованного в проксимальном отделе длинного плеча хромосомы 13. Цитоге-нетические исследования крови у больных с ретинобластомой выявили специфические хромосомные аберрации, уровень которых превышает в несколько раз показатели здоровых (у больных 11,2%; у здоровых 1,2%). У здоровых родственников больных уровень хромосомных аберраций составил 4,6%. Частота специфических аберраций хромосом (13q-) у больных Рб составила 16,7% (5/30), у сибсов — 5,1%. Анализ хромосомных нарушений в лимфоцитах позволяет на этапе доклинического развития опухоли определять риск ее развития, например, у здоровых сибсов больных Рб. Ключевые слова: ретинобластома, генетика, хромосомные абберации.
Z.S. ISLAMOV, M.S. GILDIEVA, R.Kh. USMANOV
Republican Oncology Scientific Center of Ministry of Healthcare of Uzbekistan Republic, 383 Faraby St., Tashkent, Republic of Uzbekistan, 100174
Cytogenetic changes analysis and their role in early diagnosis on retinoblastoma
Islamov Z.S. — MD, PhD, Head of the Department of Onco-Ophthalmology, tel. (+99871) 246-98-86, e-mail: [email protected]
Gildieva M.S. — MD, PhD, Head of the Laboratory of Tumors Genetics, tel. (+99871) 246-98-74, e-mail: [email protected]
Usmanov R.Kh. — Junior Researcher of the Department of Onco-Ophthalmology, tel. (+99871) 246-98-86, e-mail: [email protected]
Retinoblastoma (Rb) is a rare intraocular tumour developing from immature retina cells. It is caused by a mutation oncosupressor gene-Rbl, localised in the proximal sector of a long arm of chromosome 13. Cytogenetic researches of blood in patients with retinoblastoma have revealed the specific chromosomal aberrations which level exceeds several times the indicators of healthy people (11.2% in patients, 1.2% in healthy people). In healthy relatives of patients, the level of chromosomal aberrations was 4.6%. The frequency of occurrence of specific chromosomes aberrations (13q-) in Rb patients was 16.7% (5/30), in their sibs — 5.1%. The analysis of chromosomal infringements in lymphocytes at an earlier stage of tumour development allows to define the risk of its development, for example in healthy sibs of patients with retinoblastoma.
Key words: retinoblastoma, cytogenetics, chromosomal aberration.
Среди всех злокачественных опухолей у детей до 15 лет ретинобластома (Рб) составляет 2,54,5%. Она развивается из эмбриональной сетчатки глаза. Рб может быть односторонней (60-80%) и двусторонней (20-40%), нередко носит семейно-наследственный характер. Частота семейных форм данной опухоли довольно высока — 10-12% [1-3].
Известно, что развитие Рб обусловлено мутацией онкосупрессорного гена -ЯЫ, локализованного в проксимальном отделе длинного плеча хромосо-
мы 13 — (^14.2) [4]. Кнудсон в 1971 г. предложил модель канцерогенеза ретинобластомы, согласно которой для возникновения опухоли необходимо повреждение (мутация) обоих аллелей гена -ЯЬ1 [5, 6].
Частота Рб за последние 50 лет увеличилась почти в два раза [5]. Установлено, что средний уровень частоты РБ в Узбекистане за последние 10 лет составил 1 на 19335 [3]. Изучение исходов лечения ретинобластомы показывает, что 85-90%
138 ПРАКТИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА '2 (87) апрель 2015 г. / Том 1
Таблица. Частота хромосомных аберрации в группах обследованных
Группы обследованных Кол-во обследованных больных Кол-во исследованных метафаз Кол-во аберраций,% (п)
Пробанды 72 1500 11,2 (204)
Сибсы 78 3900 4,6 (178)
Псевдоретинобластома 15 375 2,7 (10)
РБ + ребенок с переломами 1 25 24 (6)
Повторно обратившиеся 48 1200 5,0 (60)
Здоровые добровольцы 30 150 3 (2,0)
больных выздоравливают и достигают репродуктивного возраста [1]. В этой связи медико-генетический прогноз для этих больных приобретает особую важность. Среди исследователей нет единого мнения о факторах, влияющих на развитие, клиническое течение и эффективность лечения Рб.
Цель исследования — изучение возможности ранней диагностики больных с Рб и прогнозирование риска ее развития среди здоровых родственников первой степени родства.
Материал и методы
Обследовано 403 ребенка в возрасте от 1 месяца до 17 лет. Из них первично обратившихся больных с диагнозом «ретинобластома» было 88, остальные 323 — больные, пролеченные в разное время и пришедшие на мониторинг. Проведено культивирование периферической крови 88 больным и 78 сибсам (кровные родственники, родители, бабушки, дедушки, братья, сестры). Кроме того, культивирование крови провели у 48 повторно обратившихся больных после лечения.
Культивирование, обработку и микроскопирова-ние всех образцов крови проводили стандартным цитогенетическим методом. Статистическая обработка результатов осуществлялась с помощью программных пакетов EXEL 2003, Statistica 6.0. Достоверность результатов оценивали по коэффициенту Стьюдента, достоверными считали те результаты, при которых уровень значимости был Р<0,05.
Результаты и обсуждение
После комплексного обследования 88 первичных больных у 73 из них диагноз «Рб» был подтвержден, у 15 обнаружены другие заболевания глаза. С диагнозом «подозрение на ретинобластому» они были взяты под динамический контроль, им проводились офтальмоскопия с расширенным зрачком и УЗИ глаз — 1 раз в 3 месяца в условиях консультативной поликлиники РОНЦ. Среди 73 больных мальчиков было 38, девочек — 35. Из них у 58 была односторонняя, у 15 — двусторонняя Рб.
В семьях больных, у которых был подтвержден диагноз «ретинобластома», проведено медико-генетическое консультирование среди родственни-
ков первой степени родства. В семьях 15 больных с двусторонней РБ были установлены члены с высоким риском развития онкопатологии, им было предложено пройти полное обследование в онко-офтальмологическом отделении РОНЦ, в дальнейшем — наблюдение в условиях консультативной поликлиники МЗ РУз. В одном случае у больного с двусторонней РБ, родители которого были близкими родственниками, выявлен синдром патологической ломкости костей.
При клиническом обследовании и медико-генетическом консультировании больных Рб было выявлено, что кровные родственники в нескольких поколениях имели различные злокачественные заболевания. Поэтому было решено провести цитогенетический анализ наличия хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови как пробандов (больных), так и сибсов (близких родственников).
Анализ полученных данных позволил установить, что в крови больных с ретинобластомой средний уровень хромосомных аберраций составил 11,2%, что в 5,8 раза выше, чем у здоровых детей, и в 2,4 раза выше, чем у здоровых сибсов больных детей. У больных повторно обратившихся через год или больше после лечения (энуклеация, ПХТ, ДТГТ), уровень хромосомных аберраций составил 5,0% (от 0 до 2 аберраций на 1 метафазу). Причиной снижения аберраций хромосом в данной группе больных возможно активную роль сыграл комплекс факторов: лечение, которое привело к устранению опухолевых клеток, и восстановление иммунологической защиты организма.
Частота специфических аберраций хромосом, таких как делеция 13 пары хромосом (l3q-), у больных с РБ составила 16,7% (34/ 204), у сибсов этих больных — 5,1% (9/178). У больных с РБ после лечения частота специфических аберраций хромосом (13q-) составила 11,7% (7/60). Остальная часть выявленных аберраций как у больных РБ (83,3%), так и у сибсов (82,8%) носила неспецифический характер, что расценивается как хромосомная нестабильность.
Таким образом, установлено, что у больных с Рб сохраняется высокий уровень специфических и неспецифических структурных изменений хромо-
сом как до лечения, так и после лечения. Здоровые родственники первой степени родства больных с ретинобластомой, у которых наблюдался повышенный уровень аберраций хромосом, являются лицами высокого риска развития ретинобластомы и/или другой онкопатологии. Уровень структурных изменений хромосом, выявленный у здоровых сиб-сов из семей больных ретинобластомой и составляющий 4,6%, мы приняли за дискриминационный уровень аберраций хромосом при ретинобластоме.
В последние годы на смену безальтернативной энуклеации глаз при ретинобластоме пришли новые органосохраняющие методы лечения, которые тем эффективнее, чем раньше выявляется опухоль. При запущенных случаях по-прежнему приходится прибегать к энуклеации. Прогноз для жизни у таких детей резко ухудшается.
Следовательно, поиск методов ранней диагностики и выделения групп высокого риска особенно важен, а цитогенетическое исследование лимфоцитов периферической крови больных РБ дает возможность выявлять самые ранние признаки развития опухолевого процесса в виде специфических и неспецифических хромосомных нарушений. Анализ хромосомных нарушений в лимфоцитах позволяет на этапе доклинического развития опухоли определять риск ее развития, например, у здоровых сибсов больных РБ. По совокупности специфических и неспецифических хромосомных нарушений цитогенетический метод дает возмож-
ность определять прогноз и исход данного заболевания.
Выводы
1. Результаты проведенных исследований выявили высокий уровень хромосомных аберраций у больных с Рб (11.2% по сравнению с 1.2% у здоровых).
2. У сибсов больных с Рб выявлено достоверное повышение уровня хромосомных аберраций (4.6%; Р<0,05), что способствует своевременному выявлению первичных признаков рака и проведению эффективных мер лечения и профилактики.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бочков Н.П., Гинтер Е.К., Пузырев В.П. Наследственные болезни. Национальное руководство. — Москва, 2012. — 935 с.
2. Бровкина А.Ф. Современная концепция лечения ретинобласто-мы // Вестник офтальмологии. — 2005. — № 2. — C. 48-51
3. Саякян С.В Ретинобластома. — М.: Медицина, 2005. — 199 с.
4. Barbosa R.H., Vargas F.R., Lucena E. et al. Constitutive RB1 mutation in a child conceived by in vitro fertilization: implications for genetic counselling // BMC Med Genet. — 2009. Jul 29;10:75.
5. Ньюссбаум Р.Л., Мак-Иннес Р.Р., Виллард Х.Ф. Медицинская генетика / Перевод английского / А.Ш. Латыпова. — Москва, 2010. — 620 с.
6. Knudson A.G. Mutation and cancer: a statistical study of retinoblastoma // Proc. Natl. с С. 97-99 Acad. Sci. — USA. — 1971. — Vol. 68. — P. 820-823.
7. Abramson D.H. Retinoblastoma in the 20th century: Invest Ophthalmol Vis Sci. — 2005, Aug; 46(8): Р 2683-91.
8. Исламов З.С., Гильдиева М.С., Усманов Р.Х., Вахабов О.У. Частота встречаемости ретинобластомы в областях Республики Узбекистан // Журнал теор. клин. медицины. — Ташкент, 2014. — №2.
