CC BY
0
Анализ динамики маркеров воспаления и фиброза в слезной жидкости пациентов после пересадки роговицы по поводу кератоконуса
Ситник Г.В., Степанова Ю.И.
Белорусская медицинская академия последипломного образования, Минск, Беларусь
Sitnik H.V., Stepanova J.I.
Belarusian Medical Academy of Postgraduate Education, Minsk, Belarus
Analysis of markers dynamics of inflammation and fibrosis in the tear fluid of patients after corneal transplantation for keratoconus
Резюме. Проведен анализ динамики маркеров воспаления и фиброза в слезной жидкости у 22 пациентов в возрасте 32,1 (30,4-41,1) года после оптической сквозной пересадки роговицы (СКП) по поводу кератоконуса IV стадии. Группу сравнения составили 28 здоровых лиц (23,5 (21,5-31,5) года). Для установления особенностей воспаления и ранозаживления в послеоперационном периоде определяли в слезе уровни С-реактивного белка,, интерлейкинов (ИЛ-1$, ИЛ-17, ИЛ-6, ИЛ-4), фактора некроза опухоли а, коллагена IV типа в контрольных периодах после СКП: 1-3,4-6, 7-12, 13-18, более 19 месяцев. Максимальная активность фиброгенеза наблюдалась в 7-12 месяцев после СКП, когда регистрируются пиковые концентрации коллагена IV и ИЛ-6 в слезной жидкости - 443,3 (291,1-702,5) нг/мл и 107,9 (72,4-127,1) пг/мл соответственно. При этом выявлена высокая положительная корреляционная связь между ними (r=0,703, р=0,017) в этот период. Восстановление гомеостаза глазной поверхности после СКП у пациентов с кератоконусом протекает более 18 месяцев и сопровождается значимым изменением концентрации воспалительных цитокинов и их антагонистов в слезной жидкости. Ключевые слова: кератоконус, пересадка роговицы, слезная жидкость, цитокины, воспаление, ранозаживление.
Медицинские новости. — 2023. — №10. — С. 48-52. Summary. The purpose of the study was to analyze the dynamics of markers of inflammation and fibrosis in the tear fluid of 22 patients aged 32.1 (30.4-41.1) yrs after optical penetrating keratoplasty (PKP) for stage IV keratoconus. The control group consisted of 28 healthy individuals (23.5 (21.5-31.5) yrs. The levels of C-reactive protein, interleukins (È1p, I-17, I-6, I-4), tumor necrosis factor a, and type IV collagen were determined in tears to establish the characteristics of inflammation and wound healing in the postoperative period. Control examinations were carried out 1-3, 4-6, 7-12, 13-18 months, 19 months or more after PKP. The maximum activity of fibrogenesis was observed in 7-12 months after PKI? when peak concentrations of collagen IV and I-6 in the tear fluid were registered - 443.3 (291.1-702.5) ng/ml and 107.9 (72.4-127.1) pg/ml, respectively At the same time, a high positive correlation between them was revealed (r=0.703, p=0.017) during this period. Restoration of ocular surface homeostasis after PKP in patients with keratoconus takes more than 18 months and is accompanied by significant changes in the concentration of inflammatory cytokines and their antagonists in the tear fluid. Keywords: keratoconus, corneal transplantation, tear fluid, cytokines, inflammation, wound healing. Meditsinskie novosti. - 2023. - N10. - P. 48-52.
Пересадка роговицы у пациентов с терминальным кератоконусом относится к одной из наиболее успешных операций данного типа и рассматривается в большинстве случаев как трансплантация с низким риском отторжения [1].
Процесс ранозаживления и формирования роговичного рубца после кератопластики протекает длительно и составляет, по данным литературы, от 6 до 24 месяцев [2]. С учетом прозрачности ткани роговицы и отсутствия сосудов многие этапы могут быть хорошо визуализированы и зарегистрированы при клиническом наблюдении. Однако тонкие механизмы воспаления и фиброгенеза, опосредованные белками-регуляторами, изучены недостаточно.
Слезная жидкость представляет собой многокомпонентный секрет, постоянно увлажняющий глазную поверхность, а также обеспечивающий взаимосвязь и функционирование ее структур с помощью цитокинов [3]. Цитокины оказывают локальное (паракринное) воздействие
и регулируют различные процессы клеточного взаимодействия, роста, диф-ференцировки, апоптоза. Их продукция осуществляется в тканевых структурах, находящихся в анатомической близости друг от друга. Секреция цитокинов является процессом, направленным на решение конкретной биологической задачи [4-6].
Динамика биохимически активных протеинов в слезной жидкости пациентов после пересадки роговицы потенциально несет новую информацию об особенностях воспаления и формирования послеоперационного рубца и представляет практический интерес с точки зрения обоснования местного медикаментозного лечения таких пациентов и его оптимальной продолжительности.
Цель исследования - провести анализ динамики маркеров воспаления и фиброза в слезной жидкости пациентов после пересадки роговицы по поводу кератоконуса для установления особенностей процессов воспаления и ранозаживления на глазной поверхности в послеоперационном периоде.
Материалы и методы
Обследованы 22 пациента с кера-токонусом IV стадии в возрасте 32,1 (30,4-41,1) года, из них 14 мужчин (63,6%) и 8 женщин (36,4%), которым была выполнена оптическая сквозная пересадка роговицы (СКП) в 10-й ГКБ Минска, составивших основную группу. Критериями включения в исследование явились отсутствие сочетанной патологии глаза и осложнений операции, соблюдение рекомендаций по медикаментозному лечению после операции, явка на осмотры и для забора слезной жидкости в контрольные периоды. Возраст пациентов составил 32 (28-42) года. В группу сравнения вошли 28 здоровых добровольцев в возрасте 23,5 (21,5-31,5) года с тестом Ширмера 15 (10,5-15,5) мм.
Определены контрольные периоды исследования: 1-й - 1-3 месяца, 2-й - 4-6 месяцев, 3-й - 7-12 месяцев, 4-й - 13-18 месяцев, 5-й - более 19 месяцев после пересадки роговицы по поводу кератоконуса. Забор образцов слезы выполняли с помощью поло-
сок фильтровальной бумаги для теста Ширмера по известному способу [7]. Для изучения особенностей воспаления и ранозаживления определяли в слезе уровни С-реактивного белка (СРБ), ин-терлейкинов (ИЛ-1 р, ИЛ-17, ИЛ-6, ИЛ-4), фактора некроза опухоли альфа (ФНО-а), коллагена IV типа в контрольные периоды после пересадки роговицы. Содержание биохимических маркеров определяли с использованием иммуноферментного метода исследования на фотометре универсальном Ф300 («Витязь», РБ) с использованием коммерческих диагностических наборов реагентов «Bioassay Technology Laboratory» (Китай), IMTEC (Германия). Итоговую оценку концентрации аналитов в слезе проводили с учетом кратности разведения на преаналитическом этапе по известному методу [7].
Схема местного медикаментозного лечения, которое назначали всем пациентам в послеоперационном периоде, включала левофлоксацин через 2-3 часа в 1-2-е сутки, затем 4 раза в сутки в течение 10 дней, 5% глазной гель с декспантено-лом - не менее 4 раз в сутки - 2 месяца, далее 1 раз перед сном, длительно. Ин-стилляции комбинированных увлажняющих препаратов, содержащих гиалуроновую кислоту и декспантенол без консервантов, рекомендовали, как минимум, в период 18-24 месяцев после операции, 4-5 раз в сутки. Дексаметазон в инстилляциях назначали в течение 6 месяцев с постепенным снижением кратности закапывания: 4 раза в сутки - 1 месяц, 3 раза в сутки - 2
месяца, 2 раза в сутки - 1 месяц, 1 раз в сутки - 1-2 месяца.
Статистическая обработка результатов проведена с использованием статистических пакетов STATISTICA 10 (StatSoft Inc., США) и Microsoft Excel для Windows 10. При распределении, отличном от нормального, данные представляли в виде медианы (Ме) и интервала между 25 и 75 процентилями, использовали методы непараметрической статистики. При множественных сравнениях применяли критерий Фридмана. Затем проводили апостериорные сравнения с использованием парного критерия Вилкоксона с новым уровнем значимости для четырех пар сравнений (р крит. = 0,05/4 = 0,0125). Наличие связи двух случайных величин и оценка существенности этой связи определена с помощью корреляционного анализа Спирмена, где линейный коэффициент корреляции (r) принимает значения от -1 (обратная связь) до +1 (прямая функциональная связь), а при r=0 связь отсутствует. Статистически значимыми являлись результаты при p<0,05.
Результаты и обсуждение
В таблице представлены концентрации изученных маркеров в слезной жидкости в контрольные периоды после пересадки роговицы по поводу керато-конуса. Провоспалительные протеины, которые реагируют увеличением концентрации в самые ранние сроки после травмы, в том числе хирургической, являются СРБ, ФНО-а, ИЛ-^ [8-12].
Локальный воспалительный ответ в ткани роговицы возникает сразу же после гибели клеток in vivo. Он проявляется быстрой миграцией нейтрофилов и макрофагов к пораженной ткани, а также увеличением содержания в слезе и поврежденной ткани белков острой фазы [8-10]. Одним из них является СРБ, гиперэкспрессия которого наблюдается в самые ранние сроки после нарушения нормальной структуры роговицы, при травме. Так, по данным литературы, концентрация СРБ в слезе может увеличиваться в 4 раза при герпетических поражениях [11]. Его основная функция - активация реакций иммунитета, обезвреживание микроорганизмов, продуктов распада поврежденных тканей, разрушение иммунных комплексов, блокада аутоиммунных процессов [11].
ФНО-а - это клеточный сигнальный протеин, вовлеченный в каскад воспалительных реакций, вырабатывается клетками иммунной системы и обладает синергизмом действия с другими цитокинами путем стимуляции секреции интерлейкинов (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8), интер-феронов, хемокинов. Совместно с ИЛ-6 он оказывает провоспалительное действие, а также стимулирует дифференцировку фибробластов, их пролиферацию и миграцию в стромальные ткани, а с ИЛ-1 повышает экспрессию металлопротеиназ и коллагеназ стромальными клетками роговицы через аутокринную петлю, а также регулирует экспрессию ИЛ-1 в эпителиальных клетках роговицы [8, 10, 12, 13].
Табли ц а
Концентрация исследуемых аналитов в слезной жидкости пациентов после пересадки роговицы, Ме (25%-75%)
Параметр Группа здоровых Основная группа в контрольные периоды после пересадки роговицы, n=22
лиц, n=28 0-3 мес 4-6 мес 7-12 мес 13-18 мес 19 мес и более
СРВ, мг/мл 2,9 (2,2-4,7) 16,7 (13,5-25,5) 19,6 (18,5-28,4) 15,1* (10,3-24,0) 9,2* (6,9-10,9) 7,5** (6,9-8,8)
ИЛ-^, пг/мл 20,7 (16,3-31) 76,1* (68,6-99,3) 55,1* (45-77,8) 116,4* (98-145,1) 150* (133,3-167) 91,2** (63,2-103,8)
ИЛ-17, пг/мл 160,5 (149,8-218,5) 241* (203-293,8) 418,5* (294,1-561) 733 (574-962) 867,3 * (622,4-997,8) 343,7** (243,9-398,5)
ФНО-a, пг/мл 126,2 (106,1-169,1) 359,4 * (267,5-489) 917,3 (453,5-1406,9) 681,8 * (443,5-1147,4) 398 * (332,3-620,2) 235,2 ** (210-289,1)
ИЛ-6, пг/мл 31,8 (22,2-35,9) 28,6 * (21-44,8) 54,4 * (32,3-72,4) 107,9 (72,4-127,1) 102,9 * (63,8-118) 54,6 ** (36,7-65,3)
ИЛ-4, пг/мл 16,3 (15,2-25,1) 67,3 * (48,6-68,4) 81,4 * (65,7-89,6) 41 (27,5-50,5) 56 * (42,9-72) 43 ** (39,5-52,5)
Коллаген IV нг/ мл 52,3 (44,9-58,9) 174,1 (141,6-436,8) 185,7 * (144,7-212,6) 443,3 * (291,1-702,5) 162,2 * (132,4-342,7) 139,6 ** (136,6-174)
Примечание при сравнении с
: * - различия статистически достоверны при попарных сравнениях, ' показателями у здоровых лиц.
- различия статистически достоверны
| Динамика содержания СРБ и ФНО-а в слезной I жидкости после пересадки роговицы
| Динамика содержания ИЛ-1р и ИЛ-6 в слезной жидкости после пересадки роговицы
Содержание СРБ в слезе при терминальном кератоконусе составляет 46,4 (31,55-70,8) мг/л, ФНО-а - 205,8 (167,2-286,4) пг/мл, что значительно отличается от их концентрации в слезе в первые 3 месяца после СКП, наблюдается значительное снижение СРБ (p=0,000) на фоне роста ФНО (p=0,000) (см. табл.).
На рисунке 1 представлена диаграмма, отражающая изменения концентрации СРБ и ФНО-а в слезной жидкости после пересадки роговицы. Продемонстрировано синхронное нарастание и достижение максимальных уровней данных маркеров в период 4-6 месяцев после СКП, что отражает сохранение реакций хронического воспаления на глазной поверхности.
В период 7-12 месяцев и далее установлено стабильное уменьшение экспрессии СРБ (T СРБ 7-12 мес vs СРБ 4-6 мес =37,00, p=0,0037) и ФНО-а (T ФНО-а 13-18 мес vs ФНО-а
7-12 мес =34, p=0,003) в слезной жидкости, что свидетельствует о значительном снижении активности воспаления.
Выявленная динамика СРБ и ФНО-а обусловлена как исходными изменениями, характерными для терминального кератоконуса, так и послеоперационным воспалением в ответ на хирургическую травму при пересадке роговицы. Клинически значимые симптомы послеоперационного воспаления наиболее выражены в течение первых 3 месяцев после операции. Однако полученные данные свидетельствуют о сохранении активности медиаторов воспаления на глазной поверхности значительно более длительный период, что обосновывает проведение местного противовоспалительного лечения как минимум до 7 месяцев после неосложненной пересадки роговицы у пациентов с кератоконусом.
Заживление ран роговицы представляет собой сложный и тесно скоординированный физиологический процесс, который модулируется рядом сигнальных путей. Цитокины, высвобождаемые во время повреждения, играют ключевую роль в организации реакции заживления раны, особенно ИЛ-1 и ИЛ-6, влияя на экспрессию факторов роста, в том числе трансформирующий фактор роста р (ТФР-р) [10, 12, 14]. В свою очередь, факторы роста и цитокины совместно регулируют процессы апоптоза, миграции, пролиферации и дифференцировки клеток поврежденных структур. Заживление раны также включает активацию протеаз, изменения белкового состава экстрацел-люлярного матрикса (ЭЦМ) под влиянием нейрогуморальных факторов [15, 16].
ЭЦМ является биологически активной средой и представляет собой внеклеточные тканевые структуры роговицы (базальные мембраны, интерстициаль-ный матрикс), которые обеспечивают механическую поддержку клеток, выполняют сигнальные функции, участвуют в транспорте химических веществ, в реализации межклеточных контактов и в миграции клеток. Получены данные о том, что ЭЦМ является метаболически высоко активной структурой и постоянно реконструируется [4, 15-17].
ИЛ-1а и ИЛ-1 р синтезируются ин-тактным роговичным эпителием и выделяются в строму даже при минимальной механической травме, такой как эрозия роговицы. Фракции ИЛ-1 стимулируют вовлечение Т-клеток в иммунный ответ, участие в контактном взаимодействии между Т-клетками и макрофагами, индукцию пролиферации активированных В-клеток и их дифференцировки в плазматические клетки, антителообразова-
ние, провоспалительный эффект, в том числе за счет повышения продукции белков острой фазы [16]. ИЛ-1 р может проявлять себя и как профиброгенный цитокин, концентрация которого увеличивается при хроническом воспалении, что важно в контексте воспаления после пересадки роговицы. При этом он вызывает пролиферацию фибробластов с трансформацией в миофибробласты и последующим синтезом и депонированием в ткани повышенных количеств компонентов ЭЦМ [10, 12, 15-18]. На рисунке 2 представлена динамика содержания ИЛ-1 р и ИЛ-6 в течение периода наблюдения. Попарные сравнения показали достоверные различия в уровне ИЛ-1 р во всех контрольных точках в течение периода наблюдения (см. табл. 1). Значимое снижение концентрации ИЛ-1 р в период
4-6 месяцев (Т ИЛ-1 р 4-6 мес vs ИЛ-1 в 0-3 мес= 20,
р=0,001) совместно с динамикой СРБ и ФНО-а свидетельствует о завершении острого воспалительного ответа.
С другой стороны, ИЛ-1 р синтезируется активированными моноцитами и макрофагами, является посредником в антигенпрезентировании и, следовательно, ключевым звеном в возможном инициировании иммунного ответа в отношении роговичного трансплантата совместно с ИЛ-17 [8, 19]. Максимальный уровень ИЛ-1 р в слезе установлен в период 13-18 месяцев после пересадки роговицы: 150 (133,3-167) пг/мл (ТИЛ-1р13-
18месvs ИЛ-1р 7-12 мес=40, Р=0,005) (см. рис. 2).
ИЛ-6 регулирует воспалительный ответ, способствует синтезу белков острой фазы воспаления, стимулирует дифференцировку и созревание Т- и В-лимфоцитов, а также увеличивает синтез иммуноглобулинов всех классов и способствует экспрессии тканевого
фактора, молекул адгезии и других хемокинов, препятствует апоптозу ней-трофилов и др. [8, 12]. ИЛ-6 и его растворимый рецептор регулируют воспаление и иммунный ответ, стимулирует миграцию клеток роговичного эпителия in vitro и in vivo, играет значимую роль в раноза-живлении [8, 10, 12, 14]. Эти эффекты ИЛ-6 обусловили непрерывный рост концентрации ИЛ-6 в слезе и достижение максимального уровня в период 7-12
мес. (T ИЛ-6 7-12 мес vs ИЛ-6 4-6 мес 6 p=0,000).
При определенных условиях ИЛ-6 проявляет себя как противовоспалительный цитокин по отношению к дендритным клеткам, фибробластам и макрофагам, препятствуя активации транскрипционного фактора NF -кВ, одного из главных участников классического сигнального каскада, отвечающего за развитие воспалительных реакций [16]. Следовательно, ИЛ-6 оказывает профибротическое действие путем активации пролиферации фибробластов посредством альтернативного транссигналинга и усиления интенсивности синтеза белков ЭЦМ, прежде всего коллагена и фибронектина, что, как следствие, ведет к активизации фиброза [13, 21, 22].
Коллаген IV типа является основным компонентом базальных мембран во всех органах. Он выполняет функции, связанные со структурной организацией базальных мембран, и модулирует прохождение факторов роста из одного ком-партмента ткани в другой. Коллаген IV связывает ТФР-р и, следовательно, является основным модулятором про-фибротических функций этого ростового фактора [16, 17, 22]. Увеличение уровня коллагена IV в слезе отражает процесс формирования роговичного рубца. Оценка корреляции содержания маркера фи-
броза коллагена IV типа и ИЛ-6 в период 4-6 месяцев выявила положительную сильную связь (г=0,967, р=0,000), в период 7-12 месяцев - положительную высокую взаимосвязь (г=0,703, р=0,017).
Установлена стабильно высокая концентрация ИЛ-6 в период с 7 по 18 месяц после пересадки роговицы. В этот же период, с 7-12 месяцев после кератопластики уровень коллагена IV в слезе достиг своего максимального значения: 443,3 (291,1-702,5) нг/мл. Таким образом, содержание ИЛ-1 р в слезной жидкости непрерывно увеличивается, достигая своего максимума в период с 7 по 18 месяц после пересадки роговицы одновременно с ростом уровня ИЛ-6 и коллагена IV типа (рис. 2, 3).
ИЛ-17 представляет собой медиатор иммунного ответа, играет ключевую роль в антигенпрезентировании в норме и в развитии аутоиммунных реакций при различных заболеваниях, синтезируется 17 субклассом Т-лимфоцитов-хелперов (ТМ7) в ответ на стимуляцию их цитокинами ИЛ-1 р, ИЛ-6, ТФР-Р и ИЛ-21. Доказано участие ТМ7 в отторжении трансплантатов при пересадках солидных органов, в реакции «трансплантат против хозяина», а также в раннем отторжении роговичного трансплантата. В эксперименте на мышах было установлено, что нейтрализация ИЛ-17 при помощи анти-ИЛ-17 антител позволяет предотвратить реакцию отторжения рого-вичного трансплантата. Дефицит ИЛ-17 замедляет развитие отторжения и стимулирует экспрессию цитокинов Т1|2-типа -ИЛ-4, ИЛ-5 и ИЛ-13. С другой стороны, было доказано, что ИЛ-17 играет важную роль в обеспечении иммунной привилегии глаза, а выключение ТИ - и ТМ7-путей и нейтрализация ИЛ-17 ведет к переключению на механизм Т1|2-опосредованного
иммунного ответа, который вызывает отторжение роговичного трансплантата. Важную роль в аллотолерантности при пересадке роговицы играют толерогенные антиген-специфичные регуляторные Т-лимфоциты и дендритные клетки, которые вызывают ИЛ-17 опосредованную супрессию эффек-торных Т-клеток [14, 23-27]. ТИ7 являются важными участниками фиброгенеза, что характерно для развития легочного фиброза, фиброза миокарда, печени. Таким образом, ИЛ-17 опосредовано индуцирует фиброз путем усиления воспалительного ответа и активации фибробластов. Важную роль в инициации профиброгенного ТМ7-ответа играют воспалительные цитокины ИЛ-1 р и ИЛ-23 [16].
В период с 7 по 18 месяц после операции, по мере проявления клинических признаков ранозаживления и формирования роговичного рубца, наблюдается значимое нарастание концентрации ИЛ-17 в слезной жидкости и достижение ее максимальных значений в период 13-18 месяцев после операции: 867,3 (622,4-997,8) пг/мл (рис. 4). Через 19 месяцев и более после пересадки роговицы концентрация ИЛ-17 значимо снижается до 343,7 (243,9-398,5) пг/мл, однако остается в 2 раза большей по сравнению с его содержанием в слезе здоровых добровольцев, которое составляет 160,5 (149,8-218,5) п/мл (и=48, р=0,000). С учетом того факта, что в данном исследовании принимали участие только пациенты с неосложненным течением послеоперационного периода и прозрачным состоянием трансплантата, итоговое повышенное содержание ИЛ-17 в слезе может играть именно защитную роль и обеспечивать поддержание иммунной привилегии и сохранение роговичного трансплантата.
| Динамика содержания ИЛ-6 и коллагена IV в слезной жидкости после пересадки роговицы
\ Динамика содержания ИЛ-4, ИЛ-1р, ИЛ-6 и ИЛ-17 в слезной жидкости после пересадки роговицы
ИЛ-4 представляет собой цитокин с широким спектром биологической активности, который влияет на многие типы клеток, участвующие в реакциях врожденного и приобретенного иммунитета [12]. Так, ИЛ-4 является ростовым фактором В-лимфоцитов и фактором пролиферации Т-лимфоцитов (прежде всего Т-киллеров), усиливает выработку иммуноглобулинов классов Е и G, а также оказывает противовоспалительный эффект, подавляя секрецию макрофагами ИЛ-1, ИЛ-5, ИЛ-6, ФНО-а. Таким образом, ИЛ-4 играет важную роль в развитии аллергических и, прежде всего, противовоспалительных реакций (см. рис. 4).
Динамику содержания ИЛ-4 в слезной жидкости пациентов после СКП во взаимосвязи с активностью провоспали-тельных цитокинов (ИЛ-1 р, ИЛ-6, ИЛ-17) можно рассматривать в качестве ограничивающего вектора иммуновоспалитель-ных процессов, протекающих на глазной поверхности после пересадки роговицы.
Наличие донорского роговичного трансплантата стимулирует синтетическую функцию иммунокомпетентных клеток в период с 7 по 18 месяц наблюдения, что проявляется гиперпродукцией про-воспалительных цитокинов ИЛ-1 р, ИЛ-6, ИЛ-17 на фоне депрессии содержания ИЛ-4 в слезе. Это является признаком иммунной реакции на глазной поверхности. Выявлена заметная отрицательная связь изменений концентрации ИЛ-4 и ИЛ-17 в раннем периоде (до 3 месяцев) после СКП (г=-0,484, р=0,017), высокая отрицательная связь в период с 4 до 6 месяцев наблюдения (г=-0,70, р=0,019).
Нарастание активности маркеров иммунных процессов в слезной жидкости наблюдалось в период с 7-12 месяцев, пиковая активность приходилась на срок 13-18 месяцев наблюдения, когда была установлена тесная положительная корреляционная связь между провоспа-лительными маркерами, особенно с ИЛ-17, который, как известно, индуцирует аутоиммунные реакции. Спустя 18 месяцев после операции активность ИЛ-17 снижалась как в ассоциации с ИЛ-6, так и с ИЛ-1 р, что в совокупности с другими результатами, полученными в этом сроке наблюдения, свидетельствует о биохимических признаках завершения формирования роговичного рубца.
Таким образом, в тканевых структурах глазной поверхности наблюдается серия взаимозависимых иммунных реакций, ассоциированных с динамикой послеоперационного воспалительного
процесса, связанного с пересадкой донорской роговицы. Это проявляется существенными изменениями экспрессии цитокинов и медиаторов, регулирующих характер и распространенность воспаления, в том числе уменьшением продукции провоспалительных цитокинов, обеспечивая тем самым контроль за репаративными процессами и ограничивая реакции повреждения и отторжения трансплантата.
Выводы:
1. Восстановление гомеостаза глазной поверхности после пересадки роговицы у пациентов с кератоконусом протекает более 18 месяцев и сопровождается значимым изменением концентрации воспалительных цитокинов и их антагонистов в слезной жидкости. В раннем периоде до 3 месяцев после СКП наблюдается уменьшение концентрации СРБ по сравнению с уровнем при терминальном кератоконусе, что связано с завершением воспалительной реакции, обусловленной непосредственно хирургической травмой. В период с 4 по 18 месяц после пересадки роговицы установлено прогрессирующее увеличение экспрессии ФНО-а, ИЛ-1 ß, ИЛ-6 и ИЛ-17 в слезной жидкости на фоне депрессии ИЛ-4, что является признаком иммунной реакции на глазной поверхности. Выявлена заметная отрицательная связь изменений концентрации ИЛ-4 и ИЛ-17 в раннем периоде до 3 месяцев после СКП (r=-0,484, р=0,017), высокая отрицательной связь в период с 4 до 6 месяцев наблюдения (r=-0,70, р=0,019). Концентрация ИЛ-17, маркера аутоиммунных процессов, в период 13-18 месяцев составила 867,3 (622,4-997,8) пг/мл, по истечении 19 месяцев и более - 343,7 (243,9-398,5) пг/мл, что, однако, было в 2 раза больше по сравнению с его содержанием в слезе здоровых добровольцев. При успешной пересадке роговицы по поводу кератоконуса это отражает развитие состояния аллотолерантности, которое выполняет защитную роль, обеспечивая поддержание иммунной привилегии и сохранение прозрачности роговичного трансплантата.
2. Процесс ранозаживления после пересадки роговицы по поводу кера-токонуса сопровождается значимым изменением содержания коллагена IV в слезной жидкости во взаимосвязи с экспрессией ИЛ-6. Максимальная активность фиброгенеза наблюдается в период 7-12 месяцев после СКП, когда регистрируются пиковые концентрации
коллагена IV и ИЛ-6 в слезной жидкости - 443,3 (291,1-702,5) нг/мл и 107,9 (72,4-127,1) пг/мл соответственно. При этом выявлена сильная положительная корреляционная связь данных маркеров в период 4-6 месяцев (r=0,967, р=0,000), высокая положительная корреляционная связь (r=0,703, р=0,017) в период с 7 по 12 месяц после операции.
Л И Т Е Р А Т У Р А
1. Gomes J. A., Tan D., Rapuano C.J. // Cornea. - 2015. -Vol. 34, № 4. - Р.359-369.
2. Hjortdal J. Corneal transplantation. - Springer Science and Business Media, 2016. - 224 p.
3. Бржеский В.В., Егорова Г.Б., Егоров Е.А. Синдром «сухого глаза» и заболевания глазной поверхности: клиника, диагностика, лечение. - М., 2016. - 464 с.
4. Трошина Е.А. // Проблемы эндокринологии. - 2021. -Т.67, №2. - С.4-9.
5. Bleul T, Schlunck G., Reinhard T, Lapp T // Der Ophthalmologe: Zeitschrift der Deutschen Ophthalmologischen Gesellschaft. - 2018. - Vol.115, N7. -Р.566-572.
6. Еричев В.П., Петров С.Ю., Суббот А.М., Волжанин А.В., Германова В.Н., Карлова Е.В. // Глаукома. - 2017. - Т.16, №1. - С.87-101.
7. Ситник Г.В., Лебедева П.А., Степанова Ю.И., Алехно-вич Л.И. // Лабораторная диагностика. Восточная Европа - 2021. - Т.10, №4. - С.483-492.
8. Ebihara N., Matsuda A., Nakamura S., Matsuda H., Murakami A. // Investigative ophthalmology & visual science. - 2011. - Vol.52, N12. - Р.8549-8557.
9. LaRock C.N., Todd J., LaRock D.L., et al. // Science immunology. - 2016. - Vol.1, N2. - P.3539.
10. Wilson S.E. // Experimental eye research. - 2020. -Vol.197. - Р.1080.
11. Реук С.Э., Терёхина Н.А. // Вестник офтальмологии. -2016 - Т.132, №1. - С.31-35.
12. Yu FS., Yin J., Xu K., Huang J. // Brain research bulletin. -2010. - Vol.81, N2-3. - P.229-235. https://doi.org/10.1016/j. brainresbull.2009.08.024
13. Yoshimoto T, Yoshimoto T Cytokine frontiers: regulation of immune responses in health and disease. - Springer Science and Business Media, 2013. - 389 p.
14. Camporeale A., Poli V // Frontiers in bioscience. - 2012. -Vol.17, N6. - P.2306-2326. https://doi.org/10.2741/4054
15. Torricelli A.A., Singh V, Santhiago M.R., Wilson S.E. // Investigative ophthalmology & visual science. - 2013. -Vol.54, N9. - P.6390-6400. https://doi.org/10.1167/iovs.13-12547.
16. Игнатович Т.В., Зафранская М.М. // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2019. - №1. - C.6-17.
17. Wilson S.E., Torricelli A.A.M., Marino G.K. // Experimental eye research. - 2020. - Vol.194. - P.108002.
18. Sridhar M.S. // Indian journal of ophthalmology. - 2018. -Vol.66, N2. - P.190-194.
19. Chen X., Zhao S., Tang X., Ge H., Liu P. // Molecular vision. - 2011. - Vol.17. - P.2148-2156.
20. Fielding C.A., Jones G.W., McLoughlin R.M., et al. // Immunity. - 2014. - Vol.40, N1. - P.40-50.
21. Tanaka T, Narazaki M., Kishimoto T // Cold Spring Harb Perspect Biol. - 2014. - Vol.6, N10. - a016295.
22. Song Y., Overmass M., Fan J., Hodge C., Sutton G., Lovicu F. J., You J. // Ocular Tissues. Frontiers in surgery. -2021. - Vol.8. - P.639500.
23. Yin XT, Zobell S., Jarosz J.G., Stuart P.M. // Journal of immunology. - 2015. - Vol.194, N8. - P.4029-4038. https:// doi.org/10.4049/jimmunol.1401922.
24. Chen H., Wang W., Xie H., et al. // Transplant immunology. - 2009. - Vol.21, N3. - P.155-161.
25. Cunnusamy K., Chen P.W., Niederkorn JY // Journal of immunology. - 2010. - Vol.185, N8. - P.4651-4658.
26. Tian H., Wu J., Ma M. // Transplant immunology. - 2021. -Vol.64. - P.101353. https://doi.org/10.1016/j.trim.2020.101353
27. Нероев В.В., Балацкая Н.В., Ченцова Е.В., Шамха-лова Х.М. // Медицинская иммунология. - 2020. - Т.22, №1. - С.61-76.
Поступила 22.06.2023 г.
