CC BY
98
ЛЕСНОЕ ХОЗЯЙСТВО
АМИНОКИСЛОТНЫЙ СОСТАВ ХВОИ СЕЯНЦЕВ СОСНЫ ОБЫКНОВЕННОЙ В СВЯЗИ С ОБЕСПЕЧЕННОСТЬЮ БОРОМ
Н.П. ЧЕРНОБРОВКИНА, доц. каф. ботаники и физиологии растений ПетрГУ, д-р биол. наук, О.С. ДОРОФЕЕВА, асп. Института леса КарНЦ РАН,
Е.В. РОБОНЕН, ведущий. физик Института леса КарНЦ РАН
В условиях Северо-Запада России и скандинавских стран отмечается дефицит азота и бора для роста растений, и в частности, - хвойных [1, 16]. У древесных растений дефицит азота и бора отражается на их росте и развитии. Особенно значительно недостаток азота и бора снижает рост сеянцев хвойных пород при выращивании в открытом грунте, поскольку из почвы лесных питомников вместе с посадочным материалом ежегодно изымаются и элементы минерального питания (ЭМП). Для эффективного внесения в почву ЭМП необходимы сведения по диагностике минерального питания растений. Ранее был предложен способ диагностики обеспечения азотом хвойных растений по активности фермента глутамин-синтетазы в хвое и корнях [1]. Способ позволяет определять точную дозу азотной подкормки, обеспечивающую максимальный прирост биомассы растений в период роста в конкретных климатических и экологических условиях. Способ диагностики обеспеченности бором растений в настоящее время не выявлен. Микроэлемент оказывает положительное влияние на рост древесных растений в очень узком диапазоне концентраций в почве [2]. Данные по содержанию бора в органах сеянцев хвойных растений не позволяют диагностировать обеспеченность микроэлементом хвойных растений в период их роста [3]. Необходимо искать качественно новые критерии диагностики обеспечения бором растений. Одним из направлений исследований является изучение физиолого-биохимических показателей растений в связи с различной обеспеченностью бором.
Механизмы использования бора древесными растениями остаются слабо изученными. В растениях бор может находиться в свободной форме - B(OH)3, B(OH)4 - и в виде комплексов с органическими соединениями. В клетке большая его часть представлена комплексными соединениями с полисахаридами клеточной стен-
[email protected], [email protected]
ки. До 80 % бора клеточных стенок связано с пектиновым полисахаридом - рамногалактуро-наном-П [17]. В отличие от микроэлементов-металлов бор не является компонентом или активатором ферментов; тем не менее он оказывает влияние на метаболизм азотных и фенольных соединений, углеводов, липидов, нуклеиновых кислот, ауксинов, на формирование структуры клеточных стенок и регуляцию процессов роста и развития растений [1, 3-8, 17, 18].
В истории исследований функциональной активности бора у растений выдвигались гипотезы, касающиеся роли бора в различных метаболических процессах. Согласно одной из гипотез отмирание точек роста растений при борном голодании происходит в результате отравления тканей накапливающимся аммиаком [4]. Предполагалось, что при дефиците бора у растений происходит снижение интенсивности синтеза аминокислот и белков, вызванного нарушением структуры полисом и деградации рибосом. Исследование аминокислотного состава в связи с обеспеченностью бором хвойных растений ранее не проводилось, в то время как изменение аминокислотного состава в растительных тканях приводит к изменению процессов синтеза белка, функциональной активности ферментов, клеточных мембран и тем самым регулирует рост и развитие растений.
Следует отметить, что в естественных условиях в зависимости от почвообразующих горных пород и климата отмечаются как дефицит, так и избыток бора для роста растений [16, 20].
Целью данной работы было исследование аминокислотного состава хвои сеянцев сосны обыкновенной в связи с их обеспеченностью бором.
Объектом исследования были двухлетние сеянцы сосны обыкновенной (Pirns sylvestris L.) (480 шт. м-2), которые выращивали в лесном питомнике Петрозаводского лесхоза
56
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2009
ЛЕСНОЕ ХОЗЯЙСТВО
в южной части Карелии. Супесчаные почвы питомника характеризовались оптимальной для роста сеянцев хвойных растений кислотностью (pH водн. 5,2), недостаточностью бора (0,0009 % от сухой почвы) и сбалансированным содержанием остальных ЭМП [1].
В мае было заложено 3 варианта опыта, которые отличались обеспеченностью бором сеянцев сосны. Для каждого варианта были выбраны изолированные участки площадью 1,5 м2 в трех повторностях. В первой половине вегетационного периода (5 июня, 24 июня, 15 июля) вносили бор в виде водного раствора борной кислоты в двух дозах - 0,3 и 10 г м-2. За контроль был принят вариант, в котором борную кислоту в почву не вносили. В течение вегетационного периода проводили рыхление и полив почвы, измеряли показатели кислотности почвы, которые были в пределах pH водн. 5.0. Спустя неделю, а также 3 месяца после проведения последней подкормки сеянцы отбирали для определения их сухой массы. Анализ содержания азота, бора и аминокислотного состава хвои проводили в июле. Для фиксации растительного материала использовали метод лиофилизации.
Анализ ЭМП в почве проводили спектрофотометрическим и плазменно-фотометрическим методами [9]. Содержание бора в растительных и почвенных образцах анализировали спектрофотометрически [3]. Общий и белковый азот в хвое определяли общепринятым для хвойных растений методом [10]. Извлечение аминокислот из тканей осуществляли по методу Плешкова [11]. Очистку экстракта от сахаров проводили на колонке с катионитом (смола КУ-2). Аминокислотный состав хвои определяли с помощью автоматического аминокислотного анализатора ААА-339. Перед введением в анализатор упаренный экстракт растворяли в цитрат-литиевом буфере (pH 2,2). Разделение аминокислот проводили в различных системах буферных растворов, состоящих из пяти компонентов. Введенные смеси сорбировали на ионообменной смоле колонки. Затем каждую из аминокислот вымывали буферными растворами в определенной последовательности с последующей обработкой нингидрином и регистрацией спектрофотометрическим детектором в видимой области спектра. Идентифицировали
аминокислоты по времени удерживания аминокислоты на сорбенте. Перед анализом проводили калибровку прибора путем разделения стандартной смеси аминокислот, содержащей по 2,5 мкл каждой их них в 1 мл стандартного раствора. Далее для каждой из аминокислот рассчитывали среднюю (из пяти измерений) площадь регистрируемого сигнала, приходящуюся на 1 нм, и получали константы для количественной оценки содержания аминокислот в опытных образцах. Общее содержание аминокислот высчитывали суммированием. В таблицах и на рисунке приведены средние значения из трех биологических повторностей и их стандартные ошибки. Для определения сухой массы сеянцев использовали по 100 растений в каждом варианте эксперимента.
Результаты исследований показали, что внесение в почву лесного питомника борной кислоты в дозе 0,1 г м-2 повышало сухую массу сеянцев на 25 % по сравнению с контролем (без внесения борной кислоты в почву) (табл. 1). Это свидетельствовало о том, что почва характеризовалась дефицитом микроэлемента для оптимального роста сеянцев. Исследования роста сеянцев сосны обыкновенной в связи с обеспеченностью бором в условиях низкого и высокого фонов минерального питания лесного питомника были проведены ранее [3]. Стимулирующие рост сеянцев дозы борной кислоты были различны в зависимости от фона минерального питания - в условиях низкого фона минерального питания ниже по сравнению с высоким. Большая часть бора локализовалась в хвое, где его содержание изменялось под воздействием обеспеченности бором растений в наибольшей степени по сравнению с другими органами. Внесение в почву азота и других макро- и микроэлементов способствовало снижению поступления бора в хвою. В литературе отмечается, что в обеспечении бором древесных растений большое значение имеют почвенные условия - повышенное содержание в почве ионов NH4+, Fe3+, Al3+ и повышение pH почвы при известковании способствуют закреплению бора почвенными частицами [16]. Пониженный уровень бора в хвое высокообеспеченных ЭМП сеянцев объясняется также повышенной массой растений, у которых отмечается эффект разбавления микроэлемента.
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2009
57
ЛЕСНОЕ ХОЗЯЙСТВО
Таблица 1
Физиолого-биохимические показатели сеянцев сосны обыкновенной в связи с обеспеченностью бором
Доза борной кислоты, г м-2
0 0,1 10
Сухая масса сеянца, мг 814 ± 29 1018 ± 42 349 ± 31
Содержание бора в хвое, мг кг-1 сухого вещества 18,3 ± 1,5 36,4 ± 3,1 152,1 ± 14,6
Содержание общего азота в хвое, % от сухого вещества 1,8 ± 0,1 2,2 ± 0,2 1,6 ± 0,1
Содержание белкового азота в хвое, % от сухого вещества 1,7 ± 0,1 2,0 ± 0,2 1,5 ± 0,1
Содержание небелкового азота в хвое, % от сухого вещества 0,10 ± 0,01 0,20 ± 0,02 0,10 ± 0,01
Таблица 2
Содержание свободных аминокислот в хвое сеянцев сосны обыкновенной в связи с обеспеченностью бором (мкг г-1 сухого вещества)
Аминокислота Содержание бора в хвое, мг кг -1 сухого вещества
18,3 36,4 152,1
(Glu) глутаминовая кислота 125 ± 11 203 ± 18 107 ± 10
( Arg) аргинин 103 ± 9 128 ± 11 27 ± 2
(Lys ) лизин 64 ± 6 40 ± 4 20 ± 2
(OH-Lys) ОН - лизин 56 ± 5 77 ± 7 53 ± 5
(Ala ) аланин 54 ± 5 87 ± 8 42 ± 4
( Phe) фенилаланин 51 ± 4 26 ± 2 24 ± 2
(Asp) аспарагиновая кислота 50 ± 4 89 ± 8 59 ± 5
(Pro) пролин 49 ± 4 47 ± 4 41 ± 3
(Leu)лейцин 47 ± 4 44 ± 4 20 ± 2
(Ser) серин 40 ± 3 53 ± 5 48 ± 5
(Gfy) глицин 34 ± 3 23 ± 2 28 ± 2
(His) гистидин 33 ± 3 25 ± 2 17 ± 2
(Val) валин 31 ± 3 44 ± 4 18 ± 2
( Thr) треонин 23 ± 2 37 ± 4 23 ± 2
(Ile ) изолейцин 19 ± 2 26 ± 2 8,0 ± 0,7
(Cys) цистин 11 ± 1 6,1 ± 0,5 19 ± 2
(EA) этаноламин 11 ± 1 15 ± 1 6,0 ± 0,5
(Tyr) тирозин 9 ± 1 10 ± 1 9 ± 1
( Orn) орнитин 7,2 ± 0,6 7,1 ± 0,6 5,0 ± 0,4
(Met) метионин 1,3 ± 0,1 7,2 ± 0,6 5,2 ± 0,4
Сумма 818 994 579
Внесение в почву борной кислоты повышало содержание бора в хвое в соответствии с величинами доз бора (табл. 1). Судя по массе сеянцев, повышенная интенсивность роста их отмечалась при содержании бора в хвое 36,4 мг кг-1 сухого вещества. В зависимости от условий минерального питания содержание бора в органах сеянцев может варьировать в широком диапазоне (6-461 мг кг-1 сухого вещества) [3]. Содержание бора в хвое - 20-60 мг кг-1 сухого вещества благоприятно для роста хвойных насаждений. Оно не должно превышать 100 мг кг-1 . При содержании бора свыше 200 мг кг-1 сухой хвои отме-
чаются некрозы и хлорозы. Характерное для избытка бора желто-бурое окрашивание хвои при высокой дозе борной кислоты (10 г м-2) в данном эксперименте указывало на ее токсичность для растений. При этом содержание бора в хвое составило 152,1 мг кг-1 сухого вещества. Признаки токсичного влияния бора у сеянцев проявляются особенно значительно в условиях низкого фона минерального питания по сравнению с высоким [3].
При оптимизации борного обеспечения сеянцев сосны происходило повышение содержания общего, белкового, небелкового азота, а также суммы свободных аминокислот
58
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2009
ЛЕСНОЕ ХОЗЯЙСТВО
в хвое соответственно в 1,20, 1,17, 2,0 и 1,21 раз (табл. 1, 2). Поскольку наряду с увеличением содержания суммы свободных аминокислот в хвое отмечалось повышение уровня белкового азота, то можно заключить об интенсификации синтеза белков и аминокислот при оптимизации борного питания растений. При оптимизации борного питания сахарной свеклы отмечалась активация использования аминокислот в процессе синтеза белков и других органических соединений в листьях, а также усиление оттока аминокислот в корни [5]. При недостатке бора у растений отмечается снижение содержания белка, повышение количества небелкового азота, накопление аммиачного азота [4, 5, 18, 19]. В связи с тем, что при дефиците бора у растений отмечались повышение содержания растворимых форм азота и уменьшение уровня белка, авторы предположили, что дефицит бора либо подавляет синтез белка, либо усиливает его распад. Высказывалось также предположение, что точки роста при недостатке бора отмирают из-за отравления тканей накапливающимся аммиаком [19]. При недостатке бора процесс связывания поступившего в растение минерального азота в органические соединения задерживается, вследствие чего в растении накапливается растворимый азот. В клетках корней бор-дефицитных растений практически отсутствовали полисомы и происходила деградация рибосом [4]. Снижение содержания ДНК-подобных РНК и р-РНК, как и разрушение полисом, связано с высокой активностью РНК-азы, наблюдающейся при борной недостаточности. Предполагается, что регуляция активности РНК-азы является одной из важнейших функций бора. Усиление активности РНК-азы у растений при дефиците бора коррелировало со снижением содержания белка и распадом т-РНК. Предположительно, при борной недостаточности происходит не только снижение интенсивности биосинтеза белка, но и нарушение специфики белковых синтезов.
У контрольных сеянцев сосны из всех аминокислот в максимальном количестве содержатся глутаминовая кислота и аргинин (табл. 2). Глутаминовая кислота занимает центральное место в обмене аминокислот
растений, синтезируется активнее, чем другие аминокислоты, и является универсальным донором и акцептором аминогруппы и углеродного скелета в превращениях азотных соединений [12]. Глутамат синтезируется с участием глутаматсинтазы из глутамина и 2-оксоглутарата. Глутамат является также субстратом для синтеза глутамина из аммиака, катализируемого глутаминсинтетазой. Альфа-аминогруппа глутамата может быть перенесена к другим аминокислотам при участии специфических аминотрансфераз. Кроме того, углеродный скелет и альфа-аминогруппа глутамата формируют основу для синтеза у-ами-номасляной кислоты и аргинина. Наконец, глутамат может дезаминироваться глутаматдегидрогеназой с высвобождением аммиака и 2-оксоглутарата. Амид глутамата - глутамин является основной формой азотных соединений, транспортирующих азот из корней в надземные органы у сосны, что объясняется высокими скоростями переноса его по ксилеме и флоэме [1, 12]. Аргинин также является подвижной формой азота, позволяющей регулировать содержание минеральных форм азота. Содержание азота в молекуле аргинина составляет 32,2 %, что значительно больше, чем в любой другой аминокислоте. Известно, что аргинин участвует в орнитиновом цикле, где происходит превращение орнитина в цитрул-лин, а последнего - в аргинин. Гидролитическое расщепление аргинина приводит к образованию карбамида и регенерации орнитина, который снова может вступать в орнитиновый цикл. Аргинин выполняет запасную функцию азота в хвойных растениях [1]. Запасание аргинина в органах хвойных растений обеспечивает азотом процессы их раннего весеннего роста и сезонного развития. В литературе отмечено повышение уровня аргинина в хвое сосны и ели с увеличением дозы внесения азота в почву в виде удобрений [13]. Сеянцы сосны обыкновенной накапливали и запасали до 80 % азота в форме аргинина в случае, если синтез белка был ограничен факторами, отличными от доступности азота [21]. Предполагается, что накопление аргинина у растений - это не специфическая реакция их на избыток ЭМП, а реакция на стресс вследствие ослабления роста. Вместе с тем отмечается, что
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2009
59
ЛЕСНОЕ ХОЗЯЙСТВО
повышение уровня аргинина у растений является отражением благоприятного азотного статуса в растениях [22]. Семена и зимующие почки древесных растений также отличаются высоким уровнем аргинина [1]. Считается, что у зимующих растений аргинин и пролин выполняют функцию не только запасания азота, но и в сочетании с сахарозой защищают клеточные мембраны от повреждения морозом. Аргинин может ингибировать гидролиз белков и таким образом способствовать их стабилизации, повышая морозостойкость растений и сохраняя меристемы почек в период глубокого покоя [18]. В связи с высоким содержанием аргинина у хвойных метаболизм аминокислот у них называют даже условно аргининовым типом обмена и рассматривают его как таксономический признак класса голосеменных [23].
200
150
100
а
§
н
о
'•р
о4-
50
Arg
Ile
Glu
Asp
Ala
OH-Lys
Val
Thr
EA
Tyr
Ser
Met
Lys
Leu
His
Pro
Orn
Phe
Gly
Cys
18,3 36,4 152,1
Содержание бора, мг-кг-1 сухого вещества
0
Рисунок. Влияние обеспеченности бором сеянцев сосны обыкновенной на содержание аминокислот в хвое
При оптимизации борного питания сеянцев сосны содержание большинства аминокислот в хвое увеличивалось (рисунок). Вероятно, происходила интенсификация их синтеза, поскольку содержание белкового азота повышалось. Отмечалась тенденция к снижению содержания пролина, лейцина и орнитина, а уровень лизина, фенилаланина, глицина и гистидина при этом снижался. Снижение уровня 4-х аминокислот в хвое, по-видимому, связано со стимуляцией бором включения их в состав азотсодержащих соединений. Так, можно предположить, что бор стимулировал включение фенилаланина в фенольные соединения, поскольку эта аминокислота является предшественником при биосинтезе фенолов растений [24]. При оптимизации борного питания сеянцев сосны отмечалось повышение уровня фенольных соединений в хвое, а также устойчивости растений к фацидиозу [7]. Следует отметить, что у двудольных растений, в отличие от однодольных, происходит накопление фенолов и ауксинов при дефиците бора, которое затем приводит к нарушению обмена веществ, в том числе нуклеиновых кислот и белков [4, 5].
При токсичной дозе борной кислоты отмечалось снижение уровня исследованных форм азотных соединений в хвое (табл. 1, 2, рис.). При этом сумма свободных аминокислот в хвое сеянцев снижалась в 1,41 раза по сравнению с вариантом низкого обеспечения бором растений и в 1,71 раза по сравнению с вариантом оптимального борного обеспечения. При токсичной дозе борной кислоты по сравнению с вариантом оптимального обеспечения бором сеянцев отмечалось снижение содержания всех свободных аминокислот в хвое за исключением цистеина. Поскольку при токсичной концентрации бора в хвое сеянцев отмечалось понижение содержания исследуемых форм азота и большинства свободных аминокислот, можно предположить, что происходила активация распада аминокислот в хвое и снижение интенсивности их синтеза. Исключением оказался цистеин, уровень которого повышался. Известно, что цистеин входит в состав лигандов - фитохе-латинов и металлотионеинов, участвующих в детоксикации тяжелых металлов в результате образования с ними хелатов [25, 26]. Цистеин
60
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2009
ЛЕСНОЕ ХОЗЯЙСТВО
составляет 30 % от входящих в состав метал-лотионеинов аминокислот [27, 28]. Механизм действия отмеченных лигандов заключается в связывании тяжелых металлов сульфгид-рильными группами цистеина [29, 30]. Цистеин входит в состав пептида - глутатиона, который способен образовывать стабильные комплексы с металлами и является предшественником при биосинтезе фитохелатинов [31, 32]. Наряду с различными способами детоксикации тяжелых металлов растениями [14], связывание металлов фитохелатинами является наиболее важным неспецифичным механизмом их детоксикации [15, 33]. Наши данные позволяют предположить, что накопление цистеина в хвое при высокой концентрации бора в сеянцах сосны является адаптационной реакцией хвойного растения на токсичное влияние бора. Возможно, механизмы детоксикации высокого уровня бора и тяжелых металлов у растений имеют определенную аналогию.
В заключение следует отметить, что оптимизация борного питания сеянцев повышала азотный статус хвойного растения, очевидно, путем стимуляции синтеза аминокислот и белков в хвое, поскольку отмечалось повышение содержание общего, белкового, небелкового азота и суммы свободных аминокислот. При этом содержание большинства свободных аминокислот в хвое увеличивалось. Отмечалась тенденция к снижению уровня пролина, лейцина и орнитина, а содержание лизина, фенилаланина, глицина и гистидина снижалось. Токсичная доза борной кислоты снижала содержание всех форм азота и уровень большинства свободных аминокислот в хвое за исключением цистеина, количество которого при токсичной дозе борной кислоты повышалось, что, возможно, связано с защитной функцией хвойного растения в ответ на токсичное влияние высокой дозы бора.
Библиографический список
1. Чернобровкина, Н.П. Экофизиологическая характеристика использования азота сосной обыкновенной / Н.П. Чернобровкина. - С.Пб.: Наука, 2001. - 174 с.
2. Крамер, П.Д. Физиология древесных растений / П.Д. Крамер, Т.Т. Козловский.// - М.: Лесная пром-сть, 1983. - 464 с.
3. Чернобровкина, Н.П., Робонен Е.В., Иготти С.А., Дорофеева О.С., Шенгелиа И.Д. Влияние обеспеченности бором на рост сеянцев сосны обыкновенной // Лесоведение. - 2007.- № 5. - С. 69-76.
4. Борщенко, Г.П. Метаболическая активность рибосом корней гороха при борной недостаточности / Г.П. Борщенко, Е.А. Шерстнев // Физиология растений. - 1968. - Т. 15.- № 4. -С. 720-728.
5. Школьник, М.Я. Микроэлементы в жизни растений. / М.Я. Школьник, // Л.: Наука, 1974. - 324 с.
6. Чернобровкина, Н. П. Жирнокислотный состав суммарных липидов хвои сеянцев сосны обыкновенной в связи с обеспеченностью бором / Н.П. Чернобровкина, О.С. Дорофеева, М.К. Ильи-нова, Е.В. Робонен, А.Г. Верещагин. // Физиология растений. -2008.- Т. 55. - № 3. - С. 404 - 411.
7. Ялынская, Е.Е., Устойчивость сеянцев сосны обыкновенной к снежному шютте как интегральный показатель функциональной диагностики обеспеченности бором / Е.Е.Ялынская, Н.П.Чернобровкина // Вестник Московского ун-та леса - Лесной вестник. - 2008. - № 6. - С. 16-21.
8. Пузина, Т.И. Влияние сернокислого цинка и борной кислоты на гормональный статус растения картофеля в связи с клубнеобразованием /Т.И. Пузина // Физиология растений. - 2004.- Т. 51.- № 2.-С. 234-240.
9. Аринушкина, С. В. Руководство по химическому анализу почв. / С.В. Аринушкина // - М.: Изд-во Моск. Ун-та, 1970. - 487 с.
10. Чикина, П.Ф. Азотный обмен / / П.Ф. Чикина/ Физиолого-биохимические основы роста и адаптации сосны на Севере. Л.: Наука, 1985. - С. 57-82.
11. Плешков, Б.П. Практикум по биохимии растений. / Б.П. Плешков // М.: Колос, 1976. - 256 с.
12. Измайлов, С.Ф. Азотный обмен в растениях. / С.Ф. Измайлов // М.: Наука, 1986. - 320 с.
13. Новицкая, Ю.Е. Азотный обмен у сосны на Севере. / Ю.Е. Новицкая, П.Ф. Чикина // Л.: Наука, 1980. - 166 с.
14. Титов, А.Ф.Устойчивость растений к тяжелым металлам / А.Ф.Титов, В.В. Таланова, Н.М. Казнина и др. [отв. ред. Н.Н. Немова] // - Петрозаводск:: Карельский научный центр РАН, 2007. - 172 с.
15. Серегин, И.В. Фитохелатины и их роль в детоксикации кадмия у высших растений // Успехи биол. химии. - 2001. - Т. 41. - С. 283-300.
16. Wikner, B. Distribution and mobility of boron in forest ecosystems / В. Wikner // Communications Institution Forestalis Fenniae. -1983. - №.116. - P. 131-141.
17. Matoh, T., (1992) Boron nutrition of cultured tobacco BY-2 cells. 1. Requirement for and intracellular localization of boron and selection of cells that tolerate low levels of boron. / T. Matoh, K. Ishigaki, M. Mizutani, W. Matsunaga, K. Takabe // Plant Cell Physiol.- 1992.- V. 33.- P. 1135-1141.
18. Dugger W.M. Boron in Plant Metabolism / W.M. Dugger // Encyclopedia of Plant Physiology. New Ser.
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 3/2009
61
