CC BY
29
ЛИТЕРАТУРА /REFERENCES
1. Боровик A. В., Рудное В. А. II Всстн. интснс. тср. — 1996.— № 2—3. — С. 29—33.
2. Вепцел Р. //.//Внутрибольничная инфекция. — М., 1990.
3. Гсльфапд Б. Р., Гологорский В. А., Алексеева Е. А. // Всстн. интснс. тср. — 1992. — № 1. — С. 52—57.
4. Лебедева Р. H., Полутортва Т. В. II Ансст. и рсаниматол. — 1995. — № 2.— С. 83—88.
5. Макарова Н. П., Коничева И. Н. //Там же. — № 6. — С. 4—8.
6. Bihari D., Semple S. J. H Med. int. — 1987. — Vol. 2. — P. 1586— 1590.
7. Bone R. C. //Crit. Care Med. — 1991. — Vol. 19.—P. 973—976.
8. Bone R. C. //Ann. int. Med. — 1991. — Vol. 115.— P. 457—469.
9. Bone R. C., Balk R. A., Cerra F. B. et al. //Chest. — 1992. — Vol.
101, N 6.— P. 1644—1655.
10. Bone R. C. // Sepsis and septic shock /Ed. F. Hoffman. — Basel, 1992.
11. Cameron J. S. II Int. Care Med. — 1986. — Vol. 12. — P. 64—71.
12. Cerra F. II Surgery. — 1987. — Vol. 101,—P. 1—14.
13. Cotran R. S., Poher J. S. // J. Am. Soc. Ncphr. — 1990. — Vol. 1. — P. 225—235.
14. Dixon R. E. (Ed.) // Amcr. J. Med. — 1981. — Vol. 70.— P. 733— 736.
© Коллектив авторов, 1998 УДК 616-006.81-085.28
M. P. Личиницер, Л. Ю. Дедерер, Т. А. Нахалова,
Л. Б. Горбачева
АКТИВНОСТЬ СУ' -АЛКИЛГУАНИН ДНК-АЛКИЛТРАНСФЕРАЗЫ В ЛИМФОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ С ДИССЕМИНИРОВАННОЙ МЕЛАНОМОЙ КОЖИ И ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ ЭФФЕКТ КОМБИНАЦИИ «ДАКАРБАЗИН, НИДРАН, ЦИСПЛАТИН»*
НИИ клинической онкологии, Институт биохимической фишки РАН, Москва
Резистентность опухолей к цитотоксическому действию противоопухолевых препаратов из класса N-алкил-N-нитрозо мочении (АНМ) на молекулярном уровне определяется активностью Об-алкилгуанин ДНК-алкилтрансферазы (АГТ). АГТ переносит алкильные группы с Ог’-метилгуанина в составе ДНК на свой собственный цистеиновый остаток, выполняя функцию акцепторного белка в необратимой реакции переноса [1, 2]. Эффективность различных цитостатических лекарств из класса AHM (BCNU, CCNU, ACNU, фо-темустин и др.) обусловлена уровнем АГТ в опухолях: высокий уровень определяет устойчивость, а низкий — чувствительность к этим лекарствам [9, 12]. В экспериментах in vitro и с опухолями человека, трансплантированными бестимусиым мышам, было показано, что полная или частичная регрессия опухоли достигается только при низкой активности АГТ [7]. Низкий уровень АГТ редко обнаруживается в опухолях человека.
* Работа поддержана грантом Государственной научно-технической программы России «Национальные приоритеты в медицине и здравоохранении».
15. Franson Т. R., Hierholzer W. J., LaBrecque D. R. //Rev. infect. Dis. — 1985.—Vol. 7.— P. 1—9.
16. Gimson A. E. II Int. Care Med. — 1987. — Vol. 13. — 162—166.
17. Gleckman R., Hilbert D. II J. A. M. A. — 1982. — Vol. 248,— P. 1478—1481.
18. Hall J. B., Schmidt G. A., Wood L. D. (Eds) // Principles of critical carc. — New York, 1993. — P. 110—119.
19. Harris R. L., Musher D. M., Bloom K. et al. II Arch. int. Med. — 1987, — Vol. 147.— P. 1895—1906.
20. Hasselgran P. O., Fischer J. E. /I Int. Carc Med. — 1986. — Vol. 12.— P. 13—16.
21. Hillman K., Bishop G. //Clinical intensive carc. Cambridge University Press, 1996. — P. 135—140.
22. Mainous M. R., Deitch E. A. II J. int. Care Med. — 1992. — Vol. 7, —P. 101—108.
23. Marino P. //The ICU book. — Philadelphia, 1991,—P. 176.
24. Pinsky M. R., Matuschak G. M. // Crit. Carc Clin. — Vol. 5. — P. 195—210.
25. Williams J. G., Maier R. V. Hi. int. Carc Med. — 1992. — Vol. 7, —P. 53—66.
Поступила 21.01.97 / Submitted 21.01.97
M. R. Lichinitser, L. Yu. Dederer, T. A. Nakhalova,
L. B. Gorbacheva
O -ALKYLGUANIN DNA-ALKYLTRANSFERASE ACTIVITY IN PERIPHERAL LYMPHOCYTES FROM PATIENTS WITH DISSEMINATED CUTANEOUS MELANOMA AND ANTITUMOR EFFECT OF DACARBASINE, NIDRAN, CISPLATIN COMBINATION
Research Institute of Clinical Oncology; Institute of Biochemical Physics, RAS, Moscow
Tumor resistance to N-alkyl-N-nitrosourea (ANU) drugs can be measured at molecular level by activity of Ofl-alkylguanin DNA-alkyltransferase (AGT). The AGT transfers alkyl groups from DNA 06-methylguanin onto its own cystein residual thus functioning as an acceptor protein in irreversible transfer reaction [1, 2]. Effect of cytostatics from the ANU class (BCNU, CCNU, ACNU, etc.) depends on tumor AGT content: tumors with high AGT content are resistant and those with low enzyme content are responsive to these drugs [9, 12]. Experiments in vitro on human tumors transplanted to athymic mice demonstrated that complete or partial response may be achieved only in tumors with low AGT activity [7]. Human tumors rarely have low AGT levels. Analysis of tumors from 74 patients failed to discover AGT activity in 6 specimens only (1/24 small-cell lung carcinoma, 3/5 esophageal carcinoma, 1/5 colonic carcinoma, 1/14 brain tumors) [4, 13].
* The study was supported by the Russian State Scicncc and Technology Program “National Priorities in Medicine and Health Carc”.
При анализе опухолей у 74 больных активность АГТ не была обнаружена только в 6 образцах (в 1 из 24 — немелкоклеточный рак легкого, в 3 из 5 — рак пищевода, в 1 из 5 — рак толстой кишки, в 1 из 14 — опухоли мозга) [4, 13].
При меланоме кожи активность АГТ в большинстве случаев достаточно высокая (0,2 пмоль/мг белка) и мало различается в первичной опухоли и метастазах в кожу, лимфоузлы у одного и того же больного [6]. Отмечены значительные различия активности АГТ в меланомах у отдельных больных [4]. Поскольку у большинства больных уровень АГТ достаточно высок, самостоятельное применение препаратов из группы хлорэтилнит-розомочевин в этом случае редко оказывается эффективным (частичная регрессия менее 10%). Вместе с тем препараты этой группы входят в состав высокоэффективных комбинаций при меланоме, мелкоклеточном раке легкого, мозга и др., основанных на сочетании лекарств с различным механизмом действия. Использование препаратов, ингибирующих активность АГТ, приводит к усилению эффективности действия хлор-этилнитрозомочевин. Более или менее избирательное снижение активности АГТ в опухоли достигается при введении дакарбазина, стрептозотоцина, темо-золамида и некоторых других препаратов [1, 2, 8, 10, 14]. Установлено, что после введения дакарбазина через 1—6 ч уровень АГТ снижался на 44—92% в лимфоцитах 13 больных с меланомой кожи [11].
Целью настоящей работы была разработка новой комбинации для лечения больных с метастазами меланомы, которая включала введение дакарбазина (5-(3/,3/-диметил-1 -триазено) имидазол-4-карбоксамид) перед нидраном (ACNU, 1-(4-амино-2-метил-5-пирими-динил) метил-3-(2-хлорэтил)-3-нитрозомочевина), а также цисплатина. Предполагалось определить уровень активности АГТ в лимфоцитах и опухолевой ткани и сопоставить полученные значения с клиническим результатом.
Материалы и методы. Обследовали 8 больных с множественными метастазами меланомы кожи. Клинические характеристики больных приведены в таблице. Больные прежде не получали химиотерапию. Лечебный эффект оценивали после каждого курса химиотерапии по стандартным критериям. Полный эффект — исчезновение всех опухолевых очагов, частичный эффект — регрессия опухолевых очагов на 50% или больше, прогрессирование — увеличение размеров опухоли более чем на 25% и/или появление новых метастазов. Режим лечения: в 1-й день лечения 250 мг/м2 дакарбазина внутривенно (в/в) за 3 ч до введения 1 мг/кг нидрана в/в, во 2-й и 3-й дни — в той же дозе, 80 мг/м2 цисплатина в/в с гидратацией в 3-й день. Интервалы между курсами 4 нед.
До начала лечения отбирали 10—15 мл крови в пробирку с ЭДТА (конечная концентрация 0,2—0,5%.) и выделяли периферические лимфоциты крови по стандартной методике [3]. Удаленные опухолевые узлы помещали в жидкий азот и сохраняли в нем до начала исследования.
Источником АГТ служили лизаты лимфоцитов и опухолевых узлов. Получение лизатов, приготовление рНЩНК-субстрата, содержащего О6-мотилгуанин, и условия определения активности АГГ подробно описаны ранее [5]. Активность АГТ выражали в фмолях метальных групп, перснееснных с субстрата ДНК на 1 мг белка лизата в течение 1 ч. На рисунке представлены характерные кривые зависимости активности АГТ от количества белка лизата в пробах.
Результаты и обсуждение. В таблице представлены результаты определения активности АГТ в лимфоцитах
AGT activity in cutaneous melanoma is rather high in most cases (0.2 pmol per mg protein) and is slightly different in the primary and skin, lymph node métastasés of the same patient [6]. There are significant differences in AGT activity in individual cases [4]. Since most cases present with high AGT levels independent administration of chloroethylnitrosourea drugs is hardly effective (partial response less than 10%). However, these drugs are included in high-potency combinations to be administered in melanoma, small-cell cancer of the lung, brain etc. and having different mechanisms of action. Administration of AGT inhibitors increases chloroethylnitrosourea effectiveness. More or less selective reduction in tumor AGT activity may be achieved by administration of dacarbasine, streptozotocine, temozolamide and some other drugs [1, 2, 8, 10, 14]. Dacarbasine administration resulted at 1-6 hours in a 44-92% AGT reduction in lymphocytes from 13 cutaneous melanoma patients [11].
The purpose of this study was to develop a new drug combination to treat métastasés of cutaneous melanoma consisting of dacarbasine (5-(3’,3’-dimethyl-l-triazeno) imidazole-4-carboxamide) prior to nidran (ACNU, l-(4-amino-2-methyl-5-pyrimidinyl)methyl-3-(2-chloro-ethyl)-3-nitrosourea) and cisplatin. We planned to measure lymphocyte and tumor AGT and compare the findings with clinical response.
Materials and Methods. Eight patients with multiple métastases of cutaneous melanoma were entered into this study. The patients’ clinical characteristics are presented in the table. The patients received no chemotherapy previously. Therapeutic cffcct was evaluated after every chemotherapy cycle using standard criteria. Complete response,
i.e. disappearance of all known disease, partial response, i. c. a 50% or more decrease in tumor load, disease progression, i. c. a 25% or more increase in the size of tumor and/or the appearance of new métastases. Treatment schedule: dacarbasinc, day 1, 250 mg/m2, intravenously (i.v.) at 3 h before nidran at 1 mg/kg, i. v., the same dose on days 2 and 3, cisplatin 80 mg/rn2, i. v., hydration, day 3. The treatment was repeated every 4 weeks.
Before treatment blood (10-15 ml) was harvested in a test tube containing EDTA (end concentration 0.2-0.5%i) to isolate peripheral lymphocytes by standard technique [3]. Dissected lymph nodes were placed into liquid nitrogen to be stored till study beginning.
Lymphocyte and tumor node lysates were used as AGT sources. Preparation of lysates and pHJDNA substrate containing 06-mcthyl-guanin as well as conditions of AGT measurement were described in detail elsewhere [5]. AGT activity was expressed in fmols of methyl groups transferred from the DNA substrate onto mg lysate protein for an hour. The figure presents typical curves of AGT activity with respect to amount of lysate protein in the specimens.
Results and Discussion. The table summarizes AGT measurements in patients’ lymphocytes before treatment. Baseline AGT levels demonstrated a 10-fold and greater difference in individual patients. Four patients presented with a rather low AGT contents (25, 30, 123, 137 fmol per mg protein). There was no relationship between disease advance (metastasis number, size) and AGT activity. A considerable tumor response to the nidran, dacarbasine, cisplatin combination was achieved in 6 of the 8 patients (1 complete and 5 partial responses). The response was the highest in 3 patients with low baseline AGT content.
больных до лечения. Видно, что исходный уровень АГТ может отличаться у отдельных больных в 10 раз и более. У 4 больных отмечен относительно низкий уровень АГТ (25, 30, 123, 137 фмоль/мг белка), у других 4 больных — более высокие уровни (200—320 фмоль/мг белка). Не выявлена зависимость между степенью распространения опухоли (число, размеры метастазов) и активностью АГТ. Значительный противоопухолевый эффект комбинации «нидран, дакарбазин, цисплатин» получен у 6 из 8 больных (1 полная и 5 частичных регрессий опухоли). Наибольший эффект зарегистрирован у 3 больных с исходно низким уровнем АГТ.
Больная И. (№ 1). Метастазы меланомы в подкожную клетчатку (4 х 4,5 см, 2x2 см), лимфоузлы (2x2 см), легкое (2,5 х 3 см). Уровень АГТ в лимфоцитах крови до лечения 30 фмоль/мг белка. После 2 курсов опухолевые узлы уменьшились на 50% и больше, после 4 курсов установлена полная регрессия всех опухолевых очагов. Получила 10 курсов химиотерапии. Срок от начала лечения — 23 мес. В настоящее время пациентка без признаков болезни.
Больной Б. (№ 2). Метастазы меланомы в подкожную клетчатку (11x13, 12x15 см). Уровень АГТ в лимфоцитах крови до лечения 25 фмоль/мг белка. После 2 курсов химиотерапии опухолевые узлы уменьшились до 2 и 3 см. После 5 курсов на месте узлов остались уплотнения ткани. Срок наблюдения от начала лечения — 6 мес.
Больная К. (№ 3). Метастазы меланомы в подкожную клетчатку (2x3 см), легкие (множественные от 0,5 до 1,7 см), головной мозг (множественные от 1 до 3,5 см). Уровень АГТ в лимфоцитах крови до лечения 123 фмоль/мг белка. После 3 курсов химиотерапии исчезли полностью метастазы в легкие и подкожную клетчатку, в головном мозге сохранилась лишь зона отека 1,5 см и один очаг
0,5 см.
Частичная регрессия опухоли получена еще у 3 больных. Интересны наблюдения больной И. (№ 5) и больной К. (№4). Лечение привело к уменьшению только некоторых опухолевых узлов при устойчивости к лечению других метастазов. Уровень АГТ у больной К. был 137 фмоль/мг белка, а у больной И. снизился на фоне эффективного лечения (с 230 до 140 фмоль/мг белка после 3-го курса). В одном случае частичная регрессия всех метастазов получена при относительно высоком уровне АГТ — 250 фмоль/мг белка (бол ь н о й Я., № 6).
При высоком уровне АГТ (200—320 фмоль/мг белка) наблюдалось прогрессирование болезни (больной А., № 7, б о л ь-н о й Т., № 8).
Представленные данные свидетельствуют о том, что определение исходной активности АГТ в лимфоцитах крови больных с метастазами меланомы кожи может быть использовано для предсказания чувствительности к комбинации «дакарбазин, нидран, цисплатин».
Определение активности АГТ в опухолевой ткани проведено у 3 больных. У больной И. (№ 1) активность АГТ не смогли определить (ниже чувствительности метода определения), при этом в лимфоцитах крови был выявлен низкий уровень (30 фмоль/мг белка). У больной Т. уровень АГТ в опухолевой ткани был 69 фмоль/мг белка, а в лимфоцитах— 170 фмоль/мг белка (данные в таблице не приведены). В одном случае (больная И., № 5) были удалены 2 подкожных метастаза меланомы и установлено, что уровни АГТ могут быть разными: 135 и 50 фмоль/мг белка. Различия в активности АГТ в подкожных метастазах у одного и того же больного можно объяснить гетерогенностью популяции метастазирующих клеток первичной меланомы, которые различаются по уровню АГТ [6], что прояв-
Рис. Характерные кривые зависимости активности АГТ от количества белка лизата в пробе.
По оси абсцисс — количество белка, мкг; по оси ординат — активность АГТ, имп/мин/мг белка.
1 — лизат лимфоцитов больной И. (№ 5), 2 — больной Т. (№ 8), и 3 — больной К. (№ 4).
Figure. Typical curves of AGT activity with respect to amount of lysate protein in a sample.
Numbers on the x axis demonstrate meg of protein, numbers on the у axis show AGT activity in pulses per min per mg protein. 1, lymphocyte lysate from Patient No.5; 2, the same from Patient No.8.; and 3, the same from Patient No.4.
Patient I. (No. 1). Métastases of melanoma to subcutaneous cellular tissue (4 x 4.5, 2x3 cm), lymph nodes (2x2 cm), lung (2.5 x 3 cm). Baseline lymphocyte AGT level was 30 fmol per mg protein. After
2 treatment cycles the tumor nodes reduced by 50%> or more, complete response of all disease was achieved after 4 cycles. The patient received 10 chemotherapy cycles. Time from treatment start is 23 months. The patients is alive with no evidence of disease.
Patient B. (No. 2). Métastases of melanoma into subcutaneous cellular tissue (11 x 13, 12 x 15 cm). Baseline lymphocyte AGT content was 25 fmol per mg protein. After 2 chemotherapy cycles the tumors reduced to 2 and 3 cm. Tissue induration was preserved in the place of tumors after 5 cycles. Time from treatment start is 6 months.
Patient К. (No. 3). Métastases of melanoma to subcutaneous cellular tissue (2x3 cm), lungs (multiple 0.5 to 1.7 cm), brain (multiple 1 to 3.5 cm). Baseline lymphocyte AGT level was 123 fmol per mg protein. Complete disappearance of lung and subcutaneous cellular tissue métastases was achieved, edema 1.5 cm and a solitary metastasis were found in the brain after 3 treatment cycles.
Partial tumor response was achieved in another 3 patients. Of note arc cases No. 5 (Patient I.) and 4 (Patient K.). The treatment resulted in reduction of some tumors and no response in the remaining disease. Patient K.’s baseline AGT level was 137 fmol per mg protein, as a result of treatment Patient I. presented with an AGT reduction from 230 to 140 fmol per mg protein. Partial response was achieved in one patient with a rather high baseline AGT level 250 fmol per mg protein (Patient Ya., No. 6).
P a t i с n t A. (No. 7) and P a t i e n t T. (No. 8) with high AGT levels (200-320 fmol per mg protein) presented with progressive disease.
Our findings suggest that measurement of baseline lymphocyte AGT in patients with métastasés of cutaneous melanoma may be predictive of disease response to dacarbasine + nidran + cisplatin combinations.
Tumor AGT measurement was performed in 3 patients. We failed to measure the AGT activity in Patient I.
Таблица Table
Активность АГТ в лимфоцитах крови до лечения и противоопухолевый эффект комбинации «дакарбазин, нидран, цисплатин» при диссеминированной меланоме кожи
Circulation lymphocyte AGT before treatment and tumor response to dacarbasine, nidran, cisplatin combination in disseminated cutaneous melanoma
№ nln Больные Пол/возраст Локализация метастазов Лечебный результат Активность АГТ в лимфоцитах, фмоль/мг белка
1 И./I. Ж/39 / F/39 Подкожная клетчатка, лимфоузлы, легкие Subcutaneous cellular tissue, lymph nodes, lungs ПР/CR 30 ±0,91
2 Б./В. М/46 / М/46 Подкожная клетчатка Subcutaneous cellular tissue 4P/PR 25 ±0,86
3 К./К. Ж/64 / F/64 Головной мозг, легкие, подкожная клетчатка Brain, lungs, subcutaneous cellular tissue ЧР (головной мозг), ПР (легкие) PR (brain) CR (lungs) 123 ±8,91
4 К. / К. Ж/38 / F/38 Подкожная клетчатка, легкие Subcutaneous cellular tissue, lungs ЧР, CT PR, ST 137 ±9,24
5 И. /1. Ж/42 / F/42 Подкожная клетчатка Subcutaneous cellular tissue ЧР, CT PR, ST 230 к 15,21 (после 3-го курса 140 ± 9,61)
6 Я./Ya. М/61 / М/61 Лимфоузлы, кожа / Lymph nodes, skin 4P/PR 250 ±14,72
7 А./А. М/44 / М/44 Лимфоузлы, легкие, печень Lymph nodes, lungs, liver ПрГ /PrG 200 ±16,35
8 Т./Т. М/68 / М/68 Лимфоузлы / Lymph nodes ПрГ / PrG 330 ±22,36
Pa- tients’ Nos. Patients Gender/age Metastasis sites Treatment result Lymphocyte AGT activity, fmol per mg protein
Примечание. ПР — полная регрессия всех метастазов, 4P — уменьшение метастазов не менее чем на 50%, СТ — отсутствие динамики размеров (стабилизация), ПрГ — прогрессирование, 4P, СТ — частичная регрессия и стабилизация в разных очагах.
Note. CR, complete regression of all métastasés; PR, metastasis decrease at least by 50%; ST, no changes in disease size (stable disease); PrG, disease progression; PR, ST, partial response and stabilization of different métastases.
ляется в их неодинаковой чувствительности к химиотерапии.
Перспектива дальнейших исследований состоит в избирательном снижении активности АГТ в опухоли с целью повышения эффективности лечения препаратами из группы АНМ. Для выполнения подобных исследований целесообразно определять активность АГТ в лимфоцитах крови и опухолевой ткани.
ЛИТЕРАТУРА /REFERENCES
1. Горбачева Л. Б., Кукушкина Г. В. II Хим.-фарм. журн. — 1989. — № 4. — С. 389—396.
2. Сыркии А. Б., Горбачева Л. Б. //Экспср. клин. фарм. — 1996. — Т. 59, № 2. — С. 69—75.
3. Боуит А. II Scand. J clin. Lab. Invest. — 1968. — Vol. 21. — P. 77— 89.
4. Chen J., Zhang Y., Wang C. ct al. //Carcinogenesis. — 1992.—Vol. 13.— P. 1503—1507.
5. Declerer L. Yu., Sokolova I. S., Bakhmcdova A. A. ct al. // Biochemistry (Moscow).— 1995.— Vol. 60.—P. 1159—1165.
6. Egyhazi S., Hansson J., Ringhorg U. II Br. J. Cancer. — 1995. — Vol. 71. — P. 37—39.
7. Fujio C., Chang H. R., Tsujimura T. ct al. // Carcinogenesis. — 1989. — Vol. 10.— P. 351—356.
8. Gerson S. II Cancer Res. — 1989. — Vol. 49. — P. 3134—3138.
9. Lee S. М., O’Connor P. J., Thatcher N. et al. // Ibid. — 1994. — Vol. 54.— P. 4072—4076.
(No. 1) because the level was below the assay sensitivity, the patient’s lymphocyte AGT was 30 fmol per mg protein. Patient T. had tumor AGT 69 fmol per mg protein versus lymphocyte AGT 170 fmol per mg protein (not presented in the table). Patient I. (No. 5) had different AGT contents in two dissected subcutaneous métastasés: 135 vs 50 fmol per mg protein. The difference in the subcutaneous metastasis AGT levels in the same patient may be due to heterogeneity of cell populations of the primary which have different AGT contents [6] and therefore respond in different ways to chemotherapy.
Further study should be performed to increase ANU chemotherapy effect by selective reduction in tumor AGT activity. It is recommended to measure AGT in tumors and circulating lymphocytes.
10. Lee S. М., Thatcher N., Crowther D. ct al. // Cancer Chcmothcr. Pharmacol. — 1992. — Vol. 31. — P. 240—246.
11. Lee S. М., Thatcher N., Margison G. P. II Cancer Res. — 1991. — Vol. 51, —P. 619—623.
12. Pegg A. E. II Ibid. — 1990. — Vol. 50. — P. 6119—6129.
13. Preuss I., Eherhagen /., Haas S. et al. // Int. J. Cancer. — 1995. — Vol. 61,—P. 321—326.
14. Willson K. Y., Haaga J. R., Trey J. E. ct al. Hi. clin. Oncol. — 1995.— Vol. 13.—P. 2301—2308.
Поступила 24.04.97 / Submitted 24.04.97
