CC BY
16
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
Цель и задачи. Целью исследования было установить взаимосвязь между особенностями активации и диффе-ренцировки В-лимфоцитов и содержанием аутоантител в периферической крови и перитонеальной жидкости пациенток с эндометриозом различной степени тяжести для уточнения механизмов развития аутоиммунных нарушений при данном заболевании.
Материалы и методы. Было проведено обследование 59 пациенток с эндометриозом и бесплодием (из них 36 женщин с эндометриозом 1-2 степени и 23 женщины с эндометриозом 3-4 степени) и 25 здоровых фертиль-ных женщин (контрольная группа). Материалом для исследования служили периферическая кровь и пери-тонеальная жидкость. Фенотип В-лимфоцитов (CD20+, CD19+, CD19+CD27+, CD19+CD27-, CD19+CD20-CD38+, CD20+CD5+, CD20+CD86+) оценивали методом многоцветной проточной цитометрии. Содержание аутоантител (анти-гистоновых, антилопа РеИишёа ^Р), анти-овариальных, анти-фосфатидил-этаноламин IgG, анти-фосфатидил-холин IgG и анти-Ье1а-2-гликопротеин IgG антител) и sCD30 определяли методом ИФА.
Результаты. У всех пациенток с эндометриозом вне зависимости от степени его тяжести в крови и перитоне-альной жидкости было выявлено снижение количества CD27+ В-клеток памяти и увеличение содержания плазматических CD19+CD20-CD38+ клеток, уровня наивных CD27- и активированных CD86+ клеток в популяции CD19+ лимфоцитов. При этом у женщин с распространенными формами эндометриоза изменения дифферен-цировки В-лимфоцитов на локальном уровне были более выражены, чем при эндометриозе 1-2 степени. Кроме того, у женщин с эндометриозом 3-4 степени в перитоне-альной жидкости отмечалось повышение концентрации растворимой формы молекулы CD30, сдвигающей баланс регуляции ТЫ/ТЪ2 типов иммунного ответа в сторону усиления активности гуморальных реакций. Оценка продукции аутоантител при эндометриозе не выявила увеличения частоты встречаемости диагностически значимых титров антител изученной специфичности. В то же время в крови пациенток с эндометриозом различной степени тяжести было отмечено статистически значимое повышение концентрации анти-овариальных антител, а при эндометриозе 1-2 степени — увеличение содержания ан-ти-гистоновых антител как в крови, так и в перитонеаль-ной жидкости. Проведение корреляционного анализа показало, что при эндометриозе 1-2 степени в крови отмечалась положительная корреляционная взаимосвязь между уровнем анти^Р антител и содержанием В-1 лимфоцитов, а в перитонеальной жидкости уровни анти^Р и анти-овариальных антител прямо коррелировали с количеством наивных CD27-В-лимфоцитов. Кроме того, в перитонеальной жидкости женщин с эндометриозом 1-2 степени была выявлена отрицательная корреляционная связь между содержанием анти^Р антител и уровнем активированных CD20+CD86+ клеток. При эндометриозе 3-4 степени было выявлено меньше, чем при эндометриозе 1-2 степени корреляционных взаимосвязей между содержанием аутоантител и показателями, характеризующими состояние В-лимфоцитов. Как в крови, так и в перитонеальной жидкости при распространенных формах эндометриоза отмечалась отрицательная взаимосвязь между уровнем анти-фосфатидил-холин IgG антител и наивных В-клеток.
Заключение. Таким образом, для пациенток с эндоме-триозом характерен сдвиг системной и локальной диф-
ференцировки В-лимфоцитов в сторону увеличения пула наивных клеток и повышения содержания плазматических клеток. Эти изменения, по-видимому, ведут к изменению репертуара продуцируемых антител, в том числе к выработке аутоантител, способных реагировать с антигенами органов репродуктивной системы, что может способствовать развитию бесплодия при данном гинекологическом заболевании.
АКТИВНОСТЬ ФАГОЦИТОВ В ПЕРИТОНЕАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ У БОЛЬНЫХ НАРУЖНЫМ ГЕНИТАЛЬНЫМ ЭНДОМЕТРИОЗОМ
Арипова Т.У.1, Мусаходжаева Д.А.1, Ешимбетова Г.З.2, Азизова З.Ш.1
1 Республиканский научный центр иммунологии Министерства здравоохранения РУз, Ташкент, Узбекистан
2 Ташкентский институт усовершенствования врачей, Ташкент, Узбекистан
В структуре гинекологических заболеваний эндо-метриоз занимает третье место после воспалительных заболеваний половых органов и миомы матки. Она диагностируется у 2-10% женщин, впервые обратившихся к гинекологу, и у 30% больных, нуждающихся в гинекологических операциях. При применении лапароскопии очаги эндометриоза выявляются у 20-50% женщин, страдающих бесплодием неясного генеза. В настоящее время актуальны методы, позволяющие непосредственно оценить состояние локальных клеточных и метаболических процессов в перитонеальной полости. Показана немаловажная роль активности перитонеальных фагоцитов в патогенезе наружного генитального эндометриоза (НГЭ).
Целью исследования явилось изучение кислородзави-симого метаболизма перитонеальных макрофагов в процессе фагоцитоза в перитонеальной жидкости у больных с различной степенью тяжести наружного генитального эндометриоза.
Было обследовано 37 больных в возрасте от 20 до 45 лет с наружным генитальным эндометриозом (НГЭ), которые составили 3 группы: 1-я группа — 12 больных с легкой степенью тяжести заболевания; 2-я группа — 10 больных с умеренной тяжестью заболевания; 3-я группа — 15 больных с тяжелым течением. Контрольную группу составили 18 здоровых фертильных женщин. Диагноз у всех больных был установлен на основании интраопе-рационного обследования и подтвержден результатами гистологического исследования. Для определения кисло-родзависимой биоцидности перитонеальных макрофагов и нейтрофилов использовали спонтанный и стимулированный НСТ-тест.
Исходные показатели кислородзависимой реактивности макрофагов и нейтрофилов перитонеальной жидкости во всех наблюдаемых подгруппах женщин с НГЭ отражали повышение спонтанной биоцидности по НСТ-тесту по сравнению с группой контроля. В целом, активность спонтанного НСТ-теста, у больных с эндометри-озом была выше, чем у здоровых фертильных женщин (8,3±0,3 и 10,7±0,6 соответственно, р < 0,05). Наиболее значительное увеличение спонтанного НСТ-теста регистрировали у женщин 1-й и 2-й групп (в 1,5 и 1,6 раза соответственно выше контроля). При тяжелом течении НГЭ наблюдалось снижение активности спонтанного НСТ-теста, так что его значения недостоверно превос-
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология репродукции Immunology of reproduction
ходили контроль. Стимулированный НСТ-тест выявляет резервные возможности перитонеальных макрофагов. При стимуляции наблюдалось незначительное, недостоверное, повышение фагоцитарной активности по сравнению с контролем при легком и умеренном течении НГЭ и достоверное снижение активности у больных с тяжелым течением. В целом достоверных различий между контрольной и основной группой не было. При этом достоверно низкие относительно контроля индексы стимуляции в подгруппах основной группы — 2,41, 2,2 и 1,81 соответственно, говорили о склонности к гипореактив-ности и снижении резерва микробицидности по мере утяжеления НГЭ. Выявленная прямая зависимость между показателями метаболической активности макрофагов перитонеальной жидкости и степенью активности НГЭ позволяет использовать спонтанный и стимулированный НСТ-тест как один из диагностических критериев в комплексном обследовании больных с эндометриозом.
Макрофаги составляют более 90 % от всех клеток, находящихся в перитонеальной полости, как у здоровых фертильных женщин, так и при эндометриозе. В норме перитонеальные макрофаги заканчивают жизненный цикл менее зрелыми. У больных НГЭ по сравнению со здоровым контролем выявлено резкое увеличение популяции крупных и активных макрофагов, в которых по сравнению с контрольной группой регистрируется повышенная спонтанная кислородзависимая метаболическая активность (по результатам НСТ-теста), обратно коррелирующая со степенью тяжести заболевания. Уровень же стимулированного фагоцитоза у них достоверно не отличался от контроля. Эти данные свидетельствуют о хронической стимуляции макрофагов в перитонеаль-ной полости при эндометриозе, что приводить к избыточному образованию свободно-радикальных молекул, а это в свою очередь является дополнительным стимулом к накоплению и активации моноцитов крови в перитоне-альной полости.
АНАЛИЗ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ^-ЛИМФОЦИТОВ ПРИ ПРИВЫЧНОМ НЕВЫНАШИВАНИИ БЕРЕМЕННОСТИ
Батурина И.Л., Абрамовских О.С., Логинова Ю.В., Никушкина К.В., Зотова М.А., Никонова Т.И., Емельянов И.В., Новоженина В.С., Кох Е.В.
НИИ иммунологии ФГБОУВПО «Южно-уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Челябинск, Россия
Репродуктивная дисфункция является одной из актуальных проблем практического акушерства и гинекологии. Случаи самопроизвольного прерывания беременности составляют в нашей стране около 20% от общего числа зарегистрированных беременностей — 15% приходится на самопроизвольные выкидыши и 5% — на преждевременные роды. В настоящее время установлено, что иммунные механизмы играют значимую роль при беременности, с одной стороны, защищая мать и плод от инфекционных патогенов, а с другой стороны, обеспечивая толерантность иммунной системы матери в отношении эмбриона и плода. Дисбаланс иммунорегуляторных механизмов приводит к недостаточности репродуктивной функции, в том числе нарушениям имплантации, спорадическому или привычному невынашиванию беременности, неразвивающейся беременности (Михалевич С.И. и соавт., 2012). Исследование данных механизмов в последнее
время активно изучается и имеет противоречивые и разрозненные данные, что требует дальнейшего изучения.
Цель. Изучение Tcyt-лимфоцитов разной стадии диф-ференцировки в периферической крови у пациенток с привычным невынашиванием беременности (ПНБ).
Материалы и методы. На базе НИИ иммунологии ЮУГМУ г. Челябинска в 2015-2017 гг. было проведено комплексное обследование 30 женщин в возрасте от 20 до 36 лет, с диагнозом ПНБ. Диагноз был подтвержден врачами — гинекологами с помощью клинических и инструментальных и молекулярно-генетических методов исследования. Группу контроля составили 30 условно здоровых женщин, имеющих 2-х и более детей от одного мужчины. Все пациентки были разделены на две группы: 1- контроль (А) и 2- женщины с привычным невынашиванием беременности (В) Всем обследуемым было проведено иммунологическое исследование периферической крови методом проточной цитофлюориметрии на аппарате Navios™ (Beckman Coulter, США) с использованием коньюгатов антител: CD45+-PerCP-Cy7 (ВС,США); CD8+-PerCP-Cy5.5 (eBioscience, США), CD45RA АРС (eBioscience, США), CD62L FITC (еВ^шепсе,США). Статистический анализ осуществляли с применением пакета прикладных программ Statistica 9.0. Для сравнения групп использовали непараметрический критерий Манна—Уитни, различия считали достоверными при уровне значимости p < 0,05.
Результаты и обсуждение. При обследовании было установлено достоверное повышение абсолютного количества CD45RA+CD62L+ (Tn) наивных CD8+лимфоцитов при одновременном повышении абсолютного количества CD45RA-CD62L- (Tem) эффекторных клеток памяти CD8+ у пациенток с ПНБ по сравнению с группой контроля. Доказано, что при нормальном течении беременности наивные CD8+ лимфоциты должны увеличиваться, на фоне снижения количества Tem и Temra (Кудряшо-ва А.В., 2014). Однако при ПНБ нами установлено повышение (Tem) эффекторных клеток памяти, которые обладают прямой цитолитической активностью и имеют набор адгезивных и хемотаксических рецепторов, за счет чего эти клетки очень быстро мигрируют, в место имплантации эмбриона, возможно, оказывая негативное действие на аллотрансплантант, вызывая прерывание беременности. Полученные данные требуют дальнейшего изучения и доказывают перспективность данного исследования для более глубокого понимания иммунорегуля-торных механизмов ПНБ.
ИЗУЧЕНИЕ CD4+ ЛИМФОЦИТОВ РАЗНОЙ СТАДИИ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ У ЖЕНЩИН С ПРИВЫЧНЫМ НЕВЫНАШИВАНИЕМ БЕРЕМЕННОСТИ
Батурина И.Л., Логинова Ю.В., Новоженина В.С., Никушкина К.В., Зотова М.А., Никонова Т.И., Емельянов И.В., Кох Е.В.
НИИ иммунологии ФГБОУВПО «Южно-уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Челябинск, Россия
В настоящее время известно, что реакции иммунной системы играют важную роль в процессах оплодотворения, имплантации и развития беременности. Установлено, что изменение функциональной активности и дифференцировки клеток иммунной системы уже на ранних сроках беременности могут определять ее тече-
