CC BY
55
Медицинская Иммунология 2003, Т. 5, № 1-2, стр 149-156 © 2003, СПб РО РААКИ
Краткие сообщения
АКТИВАЦИЯ ЭФФЕКТОРНЫХ ФУНКЦИЙ НЕЙТРОФИЛОВ БИОПОЛИМЕРАМИ МОРСКИХ ГИДРОБИОНТОВ
Запорожец Т.С.*, Макаренкова И.Д.*, Гажа А.К.*, Кузнецова Т.А., Молчанова В.Н.**, Звягинцева Т. Н.**, Беседнова Н.Н.*, Эпштейн Л.М.***
* Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, г. Владивосток ** Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВ О РАН, г. Владивосток ***Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр, г. Владивосток
Резюме. Работа посвящена экспериментальному исследованию способности биополимеров морских гидробионтов оказывать влияние на кислородзависимые и кислороднезависимые механизмы цитотоксичности нейтрофилов. Установлено, что взаимодействие нейтрофилов с биополимерами морских гидробионтов включает внутриклеточные механизмы фагоцитоза, в частности, дозозависимое усиление способности фагоцитов к продукции активных форм кислорода, секреторную дегрануляцию, сопровождающуюся изменением активности кислой фосфатазы, декатионизацией нейтрофилов, выбросом миелопероксидазы в окружающую среду. В условиях циклофосфаниндуцированной депрессии исследуемые биополимеры частично восстанавливают кислородный метаболизм в покоящихся нейтрофилах и модулируют (доводя показатели до уровня фона) оксидазные процессы в стимулированных in vitro зимозаном клетках, обеспечивая нормализацию процессов мобилизации. Использование биополимеров морских гидробионтов для модуляции процесса фагоцитоза делает возможным и достаточно гибким управление внутриклеточными процессами in vivo за счет прямых и конкурентных углеводспецифических взаимодействий модификаторов с мембранными рецепторами, а также образования активных и неактивных лектин-гликолигандных и углевод-угле-водных комплексов.
Ключевые слова: нейтрофилы, активация, иммуномодуляторы, биогликаны, иммунодефицит.
Zaporozhets T.S., Makarenkova I.D., Gazha А.К., Kuznetsova T.A.,
Moltchanova V.N., Zvyagintseva T.N., Besednova N.N., Epstein L.M.
ACTIVATION OF NEUTROPHILS EFFECTOR FUNCTIONS
BY SEA-BORN HYDROBIONTS BIOPOLYMERS
Abstract. The article is devoted to experimental research of the ability of sea-born hydrobionts biopolymers to attack mechanisms of cytotoxicity of neutrophils. It has been revealed, that interaction of neutrophils with seaborn hydrobionts biopolymers includes endocellular mechanisms of phagocytosis, in particular, dose-dependent enhancement of 02 active radicals production, secretory degranulation, alterations in acid phosphatase activity and extracellular secretion of myeloperoxidase. Under cyclophosphan-induced immunodepression the biopolymers partially restore oxygen metabolism of non-stimulated neutrophils and modulate in vitro oxygen-dependent activity in zymosan stimulated cells, providing normal mobilization. The use of sea-born hydrobionts biopolymers for phagocytosis modulation makes it possible to control intracellular processes in vivo by means of direct and competitive interactions of modifiers with membrane receptors. (Med.Immunol., 2003, vol.5, N1-2, pp 149-156)
Адрес для переписки: ВВбДбНИб
Запорожец Татьяна Станиславовна. Целесообразность стимулирования иммунной
690187, г. Владивосток, ул.Селъская, д. 1. системы возникает при развитии вторичных имму-
Тел.: (4232) 44-24-4, (4232) 53-30-64, нодефицитов, вызванных патологическими процес-
факс (4232) 44-14-38. сами, сопровождающимися, в числе прочих наруше-
E-mail: [email protected] ний, дефектами функциональной активности ней-
трофилов (Нф). Разработка средств, направленных на нормализацию функций Нф, диктует необходимость изучения механизмов их действия.
Ранее нами в различных экспериментальных моделях in vitro и in vivo показана способность биополимеров морских гидробионтов активировать клетки фагоцитарной системы, выражающаяся в усилении поглотительной и переваривающей функции [4] и экспрессии СЗЬ и Fcy рецепторов [5], подавлении активности 5-нуклеотидазы [6];
Цель настоящего исследования - получение экспериментальных доказательств способности биополимеров морских гидробионтов оказывать влияние на кислородзависимые и кислороднезависимые механизмы цитотоксичности Нф.
Материалы и методы
В работе использовали биополимеры из объектов морской флоры и фауны Тихого океана: мити-лан - гликопротеин, выделенный из мантии мидии Crenomytilus grayanus, транслам-1,3; 1,6 - Р- D-глю-кан, полученный из морской водоросли Laminaria cichorioides, фукоидан - сульфатированный полисахарид из бурых водорослей Fucus evanescens, зосте-рин - пектин из морских трав семейства Zosteraceae, тинростим - комплекс пептидов, полученных из оптических ганглиев кальмара Berritiuthis magister.
Эксперименты выполнены на мышах-самцах линии (СВА х C57BL)F1, полученных из питомника РАМН “Столбовая”, 18-20 г, находившихся на стандартной диете в боксированных помещениях с соблюдением всех правил и международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных работах. Исследуемые биополимеры вводили мышам подкожно (митилан, транслам, фукоидан и зо-стерин в дозе 5 мг/кг, тинростим - в дозе 0,005 мкг/ кг). Популяции мышиных нейтрофилов получали с помощью внутрибрюшинного введения животным
1 мл стерильного 1% раствора пептона. Через 8 часов путем трехкратного промывания брюшной полости охлажденной до 0°С средой 199 получали клетки перитонеального экссудата. Процентное содержание нейтрофилов среди клеток перитонеального экссудата составляло 94-96%. Выделенные и трижды отмытые в среде 199 нейтрофилы разводили средой 199 до концентрации 2х106 клеток/мл. Оценку цитотоксической активности Нф исследовали с использованием спонтанного и стимулированного (опсонизированным зимозаном) («Sigma», США) вариантов НСТ-теста спектрофотометрическим методом [9]. Для постановки реакции использовали нитросиний тетразолий («Sigma», США). В модельной системе in vitro биополимеры добавляли к клеточной взвеси и инкубировали 30 минут при 37°С в соответствующих концентрациях: митилан,
транслам, зостерин, фукоидан - 10 мкг/мл, 50 мкг/ мл, 100 мкг/мл, тинростим - 0,01 мкг/мл.
При исследовании внутриклеточной и внеклеточной секреции Нф при контакте с биополимерами морских гидробионтов Нф (2х106/мл) инкубировали в силиконированных пластиковых пробирках в присутствии исследуемых биополимеров в конечной концентрации для митилана, транслама, зостерина, фукоидана - 100мкг/мл, тинростима -0,01 мкг/мл в течение 60 минут при 37°С. В части исследований к клеткам добавляли опсонизирован-ный зимозан в конечной концентрации 6,5 мг/мл и продолжали инкубировать еще 30 минут при 37°С. По окончании инкубации пробирки центрифугировали 10 минут при 1000 об/мин, супернатант отделяли от клеточной взвеси. Клетки ресуспендирова-ли в среде 199, доводили до концентрации (2x10е/ мл). Активность миелоперокисдазы (МПО), кислой фосфатазы (КФ) и количество катионных белков (КБ) в Нф и клеточных супернатантах тестировали спектрофотометрическим способом [9].
Экспериментальное иммунодефицитное состояние (ИДС) по системе нейтрофильных гранулоци-тов в модельной системе in vivo у мышей опытных групп индуцировали с помощью циклофосфана (Цф) (Россия), который вводили внутримышечно двукратно (2 мкг/кг). Исследуемые биополимеры вводили мышам однократно в дозе 5 мг/кг, через сутки после последней инъекции Цф, или добавляли к суспензии нейтрофилов в конечной концентрации 10,50,100мкг/мл. ИДС Нф в модельной системе in vitro воспроизводили, инкубируя суспензию нейтрофилов (2х106/мл) мышей с циклофосфаном в конечной концентрации 20 мг/мл) в течение 30 и/ или 60 минут при 37°С с предварительной, одновременной или последующей инкубацией с исследуемыми биополимерами в зависимости от условий опыта.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием t-критерия Стьюдента.
Результаты
На первом этапе было проведено изучение влияния биополимеров из морских гидробионтов на состояние оксидантной системы нейтрофилов. Как видно из таблицы 1, парентеральное введение исследуемых биополимеров в дозе 5 мг/кг обеспечивало усиление способности покоящихся клеток к продукции активных форм кислорода. Резервная мощность Нф, оцениваемая при стимуляции Нф опсонизированным зимозаном, находилась в проти-вофазе с функциональной активностью фагоцитов, выявляемой спонтанно: выраженная активация микробицидных систем Нф исследуемыми биополимерами приводила к истощению мобилизацион-
ных резервов и снижению оксидазных процессов в стимулированных in vitro опсонизированным зимо-заном клетках.
При обработке покоящихся нейтрофилов мышей контрольной группы циклофосфаном способность к продукции активных форм кислорода (АФК) снижалась до 68%, а стимулированных опсонизирован-ных зимозаном - до 62% (по отношению к контролю, принятому за 100%). Исследуемые биополимеры частично восстанавливали кислородный метаболизм в покоящихся Нф и модулировали (доводя показатели до уровня фона) оксидазные процессы в стимулированных in vitro зимозаном Нф, в результате чего нормализовались процессы мобилизации.
В модельной системе in vitro инкубирование Нф с зостерином, фукоиданом и митиланом в течение
30 минут обеспечивало дозозависимое усиление способности к спонтанной продукции свободных радикалов. Интенсивность продукции АФК зависела от используемого препарата, наибольшей активностью в этом случае обладали фукоидан и зосте-рин. Стимуляция активированных биополимерами нейтрофилов опсонизированным зимозаном, как и в модельной системе in vivo, сопровождалась снижением генерации активных форм кислорода по сравнению с контролем (Нф, инкубированные только с зимозаном), наиболее выраженным при использовании дозы 100 мкг/мл (табл.2).
На втором этапе мы исследовали влияние биополимеров морских гидробионтов на активность ферментов миелопероксидазы (МПО) и кислой фосфатазы (КФ) в Нф мышей и изменение количе-
Табл.1. ВЛИЯНИЕ ПАРЕНТЕРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ БИОПОЛИМЕРОВ ИЗ МОРСКИХ ОРГАНИЗМОВ НА АКТИВНОСТЬ КИСЛОРОДЗАВИСИМЫХ МИКРОБИЦИДНЫХ СИСТЕМ НЕЙТРОФИЛОВ МЫШЕЙ
Исследуемый препарат Статистические показатели Интакгные клетки Клетки, обработанные Цф
НСТ-тест спонтанный (ОД х10'3) НСТ-тест стимулированный (ОДхЮ4) НСТ-тест спонтанный (ОД х10'3) НСТ-тест стимулированный (ОД х10'3)
Контроль (0,9% NaCI) М ± m 54 + 4,2 74 ±9,2 37 ±4,4 45 ±6,3
Митилан М ±m 64 ±6,7 52 ±4,9 44 ±6,3 50 ±2,4
Транслам М ±т 88 + 10,0* 37 ±6,6* 42 ± 6,7 59 ± 5,3
Зостерин М ± т 94 ±8,Г* 35 ±7,4** 50 ±4,5 62 ± 3,2*
Фукоидан М ± т 76 ± 8,2* 56 ±9,2** 42 ± 2,0 64 ±6,7*
Тинростим М ± т 138 ±12,0** 70 ± 8,4 40 ±3,5 68 ± 5,5*
Примечание: *, **- показатели достоверности различий по отношению к контролям (р<0,05, р<0,01); п=6
Табл. 2. АКТИВНОСТЬ ОКСИДАЗНЫХ МИКРОБИЦИДНЫХ СИСТЕМ НФ, ИНКУБИРОВАННЫХ С БИОПОЛИМЕРАМИ ИЗ МОРСКИХ ОРГАНИЗМОВ ПРИ СТИМУЛЯЦИИ ОПСОНИЗИРОВАННЫМ ЗИМОЗАНОМ
Исследуемый препарат Интактные клетки
НСТ-тест спонтанный (ОД х10‘3) НСТ-тест стимулированный (ОДхЮ-3)
Контроль (0,9% NaCI) 52 ± 4,6 170,6 ±10,2
Фукоидан 10 мкг/мл 71,8 ±8,8 145,1 ±9,6*
Фукоидан 50 мкг/мл 125,3 ±11,1** 119,6 ±7,9*
Фукоидан 100 мкг/мл 129,5 ±7,5** 85,8 ± 4,4**
Зостерин 10 мкг/мл 71,2 ±6,0* 137,3 ±9,9*
Зостерин 50 мкг/мл 94,6 ± 6,2** 131,1 ±9,9**
Зостерин 100 мкг/мл 111,3± 11,0** 112,8 ±7,8**
Митилан 10 мкг/мл 63,4 ±5.4 95,7 ±5,8**
Митилан 50 мкг/мл 71,8 ±5,2* 73,8 ±4,8**
Митилан 100 мкг/мл 83,7 ±4,0** 51,5 ±6,3**
Транслам 10 мкг/мл 48,9 ±3,9 152,9 ±6,3
Транслам 50 мкг/мл 46,3 ±6,0 154,4 ±10,0
Транслам 100 мкг/мл 54,8 ±4,1 182,1 ± 13,6
Тинростим 0,001 мкг/мл 56 ±4,0 170 ±6,3
Тинростим 0,01 мкг/мл 58 ± 2,0 190 ±8,4
Примечание: *, **- показатели достоверности различий по отношению к контролям (р<0,05, р<0,01); п=6
ства неферментных катионных белков при стимуляции опсонизированным зимозаном in vitro. Было установлено, что в контрольных группах активность фермента преобладает (как без стимуляции, так и при культивировании в присутствии опсонизиро-ванного зимозана). Как видно на рис.1, при контакте Нф с опсонизированным зимозаном МПО - активность фагоцитов снижается по сравнению с контролем (покоящиеся Нф). Внесение в культивируемые клетки любого из исследуемых биополимеров приводило к еще более выраженному снижению активности МПО как в клетках, так и в супернатантах, хотя и в разной степени.
В экспериментах in vivo установлена сходная закономерность в действии исследуемых веществ: через 15 минут после внутрибрюшинного введения биополимеров морских гидробионтов активность МПО повышается (за исключением транслама, где показатели достоверно не отличаются от контроля), а уже через час у мышей, получивших инъекции митилана, транслама, фукоидана и зостерина активность МПО в клетках снижается, у животных, стимулированных тинростимом, продолжает увеличиваться (рис.2). Проведенный нами анализ позволил установить обратную связь между активностью МПО с одной стороны и продукцией активных форм
12 3 4
Рис. 1. Изменение активности миелопероксидазы в нейтрофилах и супернатантах нейтрофилов, стимулированных опсонизированным зимозаном и биополимерами морских гидробионтов. По оси ординат: активность МПО (ОД х 103) в: 1-покоящихся Нф, 2-супернатантах покоящихся Нф, З-Нф, стимулированных зимозаном, 4-супернатантах Нф, стимулированных зимозаном (а - контроль, б - мити-лан, в - транслам, г - фукоидан, д - зостерин, е - тинростим)
Рис.2. АКТИВНОСТЬ миелопероксидазы В нейтрофилах мышей после внутрибрюшинного введения биополимеров морских ГИДРО' бионтов. По оси ординат: активность МПО (ОД х 103) (а - контроль, б - митилан, в - транслам, г - фукоидан, д - зостерин, е - тинростим)
кислорода нейтрофилами, инкубированными с исследуемыми биополимерами.
В следующей серии экспериментов мы установили, что культивирование покоящихся Нф в присутствии митиалан, транслама, зостерина и фукои-дана сопровождается повышением КФ-активности в клетках и снижением в супернатантах. При стимуляции преинкубированных с биополимерами морских гидробионтов Нф опсонизированным зи-
мозаном активность КФ резко снижается в клетках и соответственно возрастает в супернатантах. При внесении в клеточные культуры тинростима закономерность была обратной. В экспериментах in vivo закономерность изменения активности КФ, выявленная in vitro сохранялась (рис.З).
При исследовании влияния биополимеров морских гидробионтов на количество катионных белков в НФ в экспериментах in vitro было установле-
I
II
0,14 i 0,12 -0,1 -0,08 -0,06 -0,04 -0,02 -0 -
III
1
0,6
0,5 -0,4 0,3
0,2 Н
0,1 0
Контроль
Митилан
Транслам Фукоидан Зостерин Тинростим
Контроль
Митилан
Транслам Фукоидан Зостерин Тинростим
Рис.З. Влияние биополимеров морских гидробионтов на активность кислой фосфатазы в нейтрофилах и супернатантах нейтро-филов. По оси ординат: активность МПО (ОД х 103): белые солбики - в Нф, серые столбики - в супернатантах Нф
I - активность КФ в покоящихся Нф и супернатантах покоящихся Нф; белые солбики - в Нф, серые столбики - в супернатантах Нф
II - активность КФ в Нф и супернатантах Нф, стимулированных опсонизированным зимозаном; белые столбики - в Нф, серые столбики -в супернатантах Нф. III - активность КФ в Нф мышей после внутрибрюшинного введения биополимеров морских гидробионтов; белые столбики - через 15 минут, серые столбики - через 60 минут
Рис.4. Влияние биополимеров морских гидробионтов на количество катионных белков в нейтрофилах
По оси ординат: активность МПО (ОД х 103). I - в покоящихся Нф (1), в Нф, стимулированных опсонизированным зимозаном (2)
II - в Нф мышей после внутрибрюшинного введения биополимеров морских гидробионтов (а - контроль, б - митилан, в - транслам, г - фукоидан, д - зостерин, е - тинростим)
но, что инкубирование Нф в течение 60 минут в присутствии исследуемых препаратов приводит к снижению их количества, причем в стимулированных опсонизированным зимозаном клетках в большей степени, чем в покоящихся (рис.4). В модельной системе in vivo, начиная с 15 минут после введения митилана, транслама, зостерина, количество катионных белков снижалось в течение часа. При введении фукоидана и тинростима достоверного снижения количества катионных белков в Нф не отмечено (рис.4).
Обсуждение
Совокупность полученных данных дает основание сделать вывод о том, что исследуемые препараты вызывают разнонаправленные изменения в окислительном метаболизме Нф, зависящие от исходного состояния клетки, дозы активирующего агента и стимулятора. При этом при действии препаратов на покоящиеся Нф биополимеры мор-
ских гидробионтов мобилизуют резервные возможности клеток, при воздействии на Нф с цик-лофосфаниндуцированной депрессией восстанавливают нарушенные функции. Усиление спонтанного НСТ-теста в системе in vitro свидетельствует о прямом стимулирующем действии биополимеров морских гидробионтов на клетку. Ослабление ответа Нф при контакте с трансламом демонстрирует неодинаковость путей для реализации метаболического взрыва при использовании различных стимулов. По мнению [7], снижение метаболического ответа адгезированных Нф при контакте со специфическими рецепторами (в нашем случае при взаимодействии транслама с Р-глюкановыми рецепторами) не является следствием общего подавления различных потенций клеток, в том числе и способности к респираторному взрыву. В таких случаях речь может идти о расщеплении функционального резерва Нф, которое сопровождается изменением профиля их чувствительности к тем или иным стимулам.
Описанные факты указывают на различия в характере ответа клеток при взаимодействии с биополимерами, зависящие от дозы препарата, а также исходного состояния клетки (норма, депрессия, стимуляция). Результатом этих различий является активирующее, ингибирующее или модулирующее (возвращающее показатели до уровня фона) действие биополимеров на Нф.
При исследовании влияния биополимеров на активность ферментных систем установлено снижение МПО - активности фагоцитов при контакте Нф с опсонизированным зимозаном по сравнению с контролем (покоящиеся Нф). Подобные результаты, демонстрирующие снижение зимо-заниндуцированной продукции МПО после инкубирования Нф in vitro показаны в работе [1]. По мнению авторов, при взаимодействии МПО с антигеном происходит либо инактивация фермента, либо расходование эндогенной МПО при активации окислительного метаболизма клетки, в обоих случаях конечным результатом является снижение МПО-активности в супернатантах. Установленная нами закономерность в действии исследуемых биополимеров на Нф (чем интенсивней продукция активных форм кислорода, тем значительнее снижение активности МПО) подтверждает это положение.
Следует отметить, что изменение активности внутриклеточно расположенных ферментов может определяться двумя процессами: синтезом активных форм фермента, происходящего за счет связывания с коферментом внутри клетки, и экскрецией фермента во внеклеточное пространство. В зависимости от преобладания того или другого процесса возможно как усиление, так и снижение активности внутриклеточно расположенных ферментных систем [8]. Учитывая вышесказанное, можно полагать, что добавление исследуемых препаратов в клеточные культуры покоящихся Нф усиливало процессы синтеза КФ, тогда как при стимуляции клеток опсонизированным зимозаном действие биополимеров определялось усилением секреторной дегрануляции, сопровождающейся усилением активности КФ в супернатантах. Тинростим, напротив, стимулируя секреторную дегрануляцию в покоящихся клетках, значительно увеличивал синтез фермента при стимуляции зимозаном.
Полученные результаты интересны с точки зрения возможности использования того или иного препарата в различных ситуациях. В частности, при фагоцитозе живых объектов умерщвление патогенов начинается еще до поглощения за счет выброса во внеклеточную среду бактерицидных систем гранул, а также высокоактивных форм кислорода, являющихся итогом дыхательного взрыва. Внеклеточная атака бактерицидны-
ми системами оправдана и тогда, когда фагоцитоз затруднен из-за размеров объекта или прочной связи антигена с внеклеточными структурами. Этими свойствами в полной мере обладает миелопероксидазная бактерицидная система азу-рофильных гранул Нф, имеющая в своем составе МПО, перекись водорода, галогены, кислую фосфатазу [3] В то же время, когда микроорганизмы расположены внутриклеточно, увеличение активности ферментов внутри клетки, достигаемое воздействием исследуемых препаратов, обеспечивает благоприятные условия для уничтожения патогенов. В этой связи способность исследуемых препаратов модифицировать ферментативные процессы в клетке - в одних случаях увеличивать синтез ферментов, в других -усиливать процесс секреторной дегрануляции обеспечивает определенную возможность управления фагоцитозом.
Важное место среди кислороднезависимых факторов, вызывающих повреждение микробной мембраны, занимает система неферментных катионных белков, содержащихся в азурофильных, и в специфических гранулах нейтрофилов. Катионные белки находятся в синергистическом взаимодействии с системой миелопероксидаза — перекись водорода. Происходящие при фагоцитозе процессы дегрануляции (в данном случае дека-тионизации) имеют важное значение в реализации функций Нф. Задержка декатионизации гра-нулоцитов прямо коррелирует со снижением переваривающей способности Нф [2]. В этой связи способность исследуемых препаратов стимулировать декатионизацию Нф вносит вклад в совокупный эффект, опосредующий в конечном итоге усиление фагоцитоза.
Учитывая данные литературы и собственные результаты, мы можем полагать, что взаимодействие Нф с биополимерами морских гидробион-тов вызывает подготовку (примирование) фагоцитов к более эффективному ответу на последующий активационный сигнал (опсонизирован-ный зимозан). В целом, полученные результаты могут являться следствием ряда событий, развивающихся в момент фагоцитарного акта. Начальная, внеклеточная фаза обусловлена контактом рецепторов Нф (СКЗ^суИ), экспрессия которых усиливается при контакте с исследуемыми биополимерами [6], с фагоцитируемым объектом, активацией мембранных механизмов бактерицидное™ (НАДФ.Н-оксидаз, гексозомонофос-фатного шунта, продукцией супероксиданиона, гидроксильного радикала, синглетного кислорода) (отражением которых является увеличение показателей НСТ-теста при воздействии биополимеров на Нф). Последующие события, включают внутриклеточные механизмы фагоцитоза, в
частности, секреторную дегрануляцию, сопровождающуюся изменением активности Кф, дека-тионизацией Нф, выбросом МПО в окружающую среду, вследствие чего активность МПО как в клетках, активированных исследуемыми веществами, так и в супернатантах снижается.
В целом, можно заключить, что изучаемые нами биополимеры относятся к классу мембраноактивных соединений, оказывающих влияние на функции фагоцитов, связанные с состоянием клеточной мембраны. Использование биополимеров морских гидробионтов делает возможным и достаточно гибким управление внутриклеточными процессами in vivo за счет прямых и конкурентных углеводспецифических взаимодействий модификаторов с мембранными рецепторами, а также образования активных и неактивных лектин-гликолигандных и углевод-углеводных комплексов
Выводы
1. Биополимеры морских гидробионтов относятся к классу мембраноактивных соединений, оказывающих влияние на функции фагоцитов.
2. В системе in vivo и in vitro биополимеры морских гидробионтов вызывают дозозависимое усиление способности Нф к продукции активных форм кислорода.
3. В условиях циклофосфаниндуцированной депрессии исследуемые биополимеры частично восстанавливают кислородный метаболизм в покоящихся Нф и модулируют (доводя показатели до уровня фона) оксидазные процессы в стимулированных in vitro зимозаном Нф, обеспечивая нормализацию процессов мобилизации.
4. Взаимодействие нейтрофилов с биополимерами морских гидробионтов включает внутриклеточные механизмы фагоцитоза, в частности, секреторную дегрануляцию, сопровождающуюся изменением активности кислой фосфотазы, декатионизаци-
ей нейтрофилов, выбросом миелопероксидазы в окружающую среду.
Список литературы
1. Адаменко Г.П. Кооперативное взаимодействие поли- и мононуклеарных фагоцитов крови человека: влияние совместного культивирования клеток на их хемилюминесценцию и секрецию миелопероксидазы // Иммунология,- 1993. -№5.- С. 26-29.)
2. Бабаченко П.В., Кузьмина А.И., Тимченко В.Н. Роль катионных белков нейтрофилов в патогенезе коклюша. // Журн. микробиол.- 1993,- № 6.- С. 107-109.
3. Бакуев М.М., Саидов М.З., Бутаков A.A. Особенности секреции миелопероксидазы и хемилюми-несцентного ответа нейтрофилов человека при контакте со стимуляторами различной природы // Иммунология 1991, №1, С. 15-17]
4. Запорожец Т.С. Иммуностимулирующая активность биогликанов морских беспозвоночных. Автореф. дис.... канд. мед. наук.- М., 1986.
5. Запорожец Т.С., Крылова H.H., Иванушко Л.Ф. Коррекция дефектов фагоцитоза при псевдотуберкулезной инфекции иммуномодуляторами природного происхождения // Журн. эпидемиол. и микробиол,- 1997- №5,- С.55-58.
6. Крылова Н.В. Химиотерапевтические и иммуномодулирующие свойства глюкана из Crenomytilus grayanus при экспериментальных инфекциях. Дис. ...канд.биол.наук. - Москва, 1986.
7. Маянский А.Н., Челышев И.В., Чеботарь И.В. Кондиционирование IgG и связь зависимых реакций нейтрофилов в условиях специфической и неспецифической адгезии. // Иммунология. - 1993,- № 1,- С. 23-25
8. Пинегин Б.В., Бурая Т.Л., Бутаков A.A. Влияние некоторых иммуномодуляторов на функциональную активность полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови здоровых людей in vitro. // Журн. микробиол. - 1994,- №3.- С.79-83]
9. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. М., 1995,- 219с.
поступила в редакцию 06.03.2003 отправлена на доработку 04.04.2003 принята к печати 11.042003
