CC BY
40
УДК 615,3:547.854.4:542.91:616.984-097-022-085
1-[(3,5-ДИМЕТИЛАРИЛОКСИ)АЛКИЛ]ПРОИЗВОДНЫЕ УРАЦИЛА КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ПРОТИВОВИРУСНЫЕ АГЕНТЫ
М.С. Новиков, А.А. Озеров, Ю.А. Орлова, Р.У. Букхайт*
Лаборатория фармацевтической химии ВНЦ РАМН и Администрации Волгоградской области,
Кафедра фармацевтической химии ВолГМУ, ImQuestBioSciences, Inc. (Мериленд, США)*
Ранее нами были синтезированы и изучены вирусингибиторные свойства 1-[[2-(фенокси)эток-си]метил]производных урацила (1), некоторые из которых проявили заметную активность в отношении вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) in vitro. С целью поиска новых более эффективных ингибиторов ВИЧ-1 нами были синтезированы 1-[(3,5-диметилфенокси- и 3,5-ди-метилбензилокси)алкил]производные урацила, которые отличались от соединений серии 1 длиной мостика, связывающего ароматический фрагмент и остаток урацила.
HN
АЛ
I
R3
О" N R
О
1 (Р = Н, СНз, С2Н5, Вг; К = Н, СНз; К = СНз, С1)
Синтез короткоцепочечных аналогов 1-[2-(3,5-диметилфенокси)-этил]урацила (2), -5-бромурацила (3) и -тимина (4), а также 1-[2-(3,5-диметилбензилокси)этил]урацил (5) был осуществлен в соответствии с ранее описанным методом [2]: триметилсилилпроизводное урацила, тимина или 5-бромурацила конденсировали с 2-(3,5-диметилфенокси)-1-бромэтаном (6) или 2-(3,5-диметилбензилокси)-1-бромэтаном (7) без растворителя при 180-190 °С в течение 3 ч, что привело к соответствующим соединениям 2-5,
выход которых был в пределах от 48 до 63 % (Схема 1).
Алкилирование в условиях реакции Гилберта-Джонсона 6-алкил-замещенных урацилов ал-килирующими агентами с низкой реакционной способностью, как правил о, ведет к образованию смеси продуктов N -, Ы3-моно- и Ы1,Ы3-дизаме-щения. По этой причине синтез 1-[2-(3,5-диме-тилфенокси)этил]-6-метилурацила (8), 1-[2-(3,5-диметилфенокси)этил]-5,6-ди-метилурацила (9), 1-[2-(3,5-диметилбензилокси)этил]-6-метилура-цила (10) и 1-[2-(3,5-диметилбензилокси)этил]-5,6-диметилурацила (11) был осуществлен в соответствии со стандартной методикой [5] путем обработки исходных 6-метилурацила и 5,6-диме-тилурацила бромидом 6 или 7 в растворе ДМФА в присутствии эквимолярного количества карбоната калия. После хроматографического отделения побочных продуктов ^^3-дизамещения целевые соединения были получены с выходом 20-25 % (Схема 1).
Синтез 1-[[2-(3,5-диметилбензилокси)эток-си]метил]производных урацила (12-20), являющихся гомологами соединений серии 1, был осуществлен в условиях реакции Гидберта-Джонсона [3, 6]. Триметил-силилпроизводное соответствующего пиримидинового основания в растворе безводного хлороформа при комнатной температуре обрабатывали эквимолярным количеством 2-(3,5-диметилбензилокси)-этилхлормети-ловым эфиром (21). При этом целевые соединения образовывались с выходом 43 - 79 % (Схема 2).
Me, Sk
^О
N
R
Me0Sk
.А
О N или О
R'
HN " '
А- -
о' N CH3 H 3
6, 7
2-5, 8-11
Схема 1. Синтез 1-[2-(3,5-диметилфенокси)этил]- (2-4, 8, 9) и 1-[2-(3,5-диметилбензилокси)этил]про-
изводных урацила (5, 10, 11):
Ме^
X = связь или СН2; Р1 = Н, СН3 или Вг; Р2 = Н или СН3
Ме^-
Я1
+
^^ ^Я2
СИ,
Я3
21-23
О
О N Я
О
Я3
12-20, 24-29
Схема 2. Синтез 1-[[2-(3,5-диметилбензилокси)этокси]метил]-производных урацила (12-20, 24-29): Р1 = Н, Вг, СН3, С2Н5 или СН2РИ; Р2 = Н, СН3, С3Н7 или СН2РИ; Р'+Р2 = СН2СН2СН2; Р3 = СН3, Вг или 1-Ви
С целью изучения закономерности структура-активность нами были синтезированы аналоги соединений 12-20, содержащие в ароматическом ядре вместо одной из метильных групп атом брома или трет-бутильный заместитель. Исходное триметилсилилпроизводное пиримидино-вого основания в сходных условиях обрабатывали эквимолярным количеством 2-(3-бром-5-ме-тилбензилокси)- (22) или 2-(3-метил-5-трет-бутилбензил-окси)этилхлорметиловым эфиром (23) что привело к соответствующим 1-[[2-(3-бром-5-метилбензилокси)этокси]метил]- (24-27) и 1-[[2-
(3-метил-5-трет-бутилбензилокси)этокси]метил]-производным урацила (28 и 29), выход которых составил 44-51 %. Основная стратегия синтеза ряда соединений 12-20, 24-29 подробно описана нами ранее.
Чистота полученных соединений 2-5, 8-20, 24-29 определялась методом тонкослойной хроматографии, строение - ПМР-спектроско-пией и масс-спектрометрией. Физико-химические свойства соединений 2-5, 8-20, 24-29 представлены в табл. 1, данные ЯМР 1Н спектров приведены в табл.2.
Характеристики синтезированных соединений
Таблица 1
Соединение Р1 Р2 Р3 X Выход, % Т. пл., оС Рf
2 Н Н — связь 59 180—181 0,40
3 Вг Н - связь 53 168—170 0,73
4 СН3 Н — связь 50 139—140 0,47
5 Н Н — СН2 48 106—108 0,41
8 Н СН3 — связь 24 196—197 0,43
9 СН3 СН3 — связь 20 219—221 0,44
10 Н СН3 — СН2 21 125—127 0,46
11 СН3 СН3 — СН2 25 120—122 0,48
12 СН3 Н СН3 — 79 108—110 0,33
13 Вг СН3 СН3 — 56 112—115 0,56
14 СН3 СН3 СН3 — 67 89—91 0,36
15 Н С3Н7 СН3 — 57 94—95 0,43
16 С2Н5 СН3 СН3 — 57 107—108 0,44
17 РИСН2 СН3 СН3 — 67 120—121 0,57
18 Вг С3Н7 СН3 — 48 94—96 0,58
19 Н РИСН2 СН3 — 43 101—103 0,49
20 СН2СН2СН2 СН3 — 61 102—104 0,24
24 Вг Н Вг — 48 121—123 0,61
25 Вг СН3 Вг — 44 90—92 0,58
26 СН3 СН3 Вг — 47 106—108 0,30
27 РИСН2 СН3 Вг — 50 104—106 0,52
28 СН3 Н С(СН3)3 — 61 104—107 0,39
29 Вг СН3 С(СН3)3 — 48 116—118 0,54
Таблица 2 Данные Я1№Р ^ спектров синтезированных соединений
Соединение Химический сдвиг, м.д., мультиплетность (КССВ, Гц)
2 2,21 (6Н, с, СН3); 3,32-4,29 (8Н, м, СН2); 5,53 (1Н, д, и = 8, Н-5); 6,53 (2Н, с, Н-2', Н-6'); 6,59 (1Н, с, Н-4'); 7,63 (1Н, д, J = 8, Н-6); 11,19 (1Н, уш, с, NH)
3 2,21 (6Н, с, СН3); 3,32-4,31 (8Н, м, СН2); 6,53 (2Н, с, Н-2', Н-6'); 6,60 (1Н, с, Н-4'); 7,71 (1Н, с, Н-6); 11,42 (1Н, уш, с, NH)
4 1,87 (3Н, с, СН3); 2,21 (6Н, с, СН3); 3,40-4,32 (8Н, м, СН2); 6,53 (2Н, с, Н-2', Н-6'); 6,59 (1Н, с, Н-4'); 7,50 (1Н, с, Н-6); 11,14 (1Н, уш, с, ЫН)
5 2,20 (6Н, с, СН3); 3,19 (2Н, т, и = 6, СН2О); 3,70 (2Н, т, и = 6, ЫСН2); 4,54 (2Н, с, СН2Аг); 5,68 (1Н, д, и = 8, Н-5); 6,66-6,92 (3Н, м, С6Н3); 7,54 (1Н, д, и = 8, Н-6); 11,15 (1Н, уш, с, NH)
8 2,21 (6Н, с, СН3); 2,32 (3Н, с, 6-СН3); 3,48-4,33 (8Н, м, СН2); 6,53 (2Н, с, Н-2', Н-6'); 6,59 (1Н, с, Н-4'); 7,50 (1Н, с, Н-6); 11,14 (1Н, уш, с, ЫН)
14 2,12 (6Н, с, СН3); 2,26 (3Н, с, 5-СН3); 2,57 (3Н, с, 6-СН3); 3,60-4,08 (4Н, м, СН2СН2); 4,44 (2Н, с, СН2Аг); 5,51 (2Н, с, ЫСН2); 6,71-7,03 (3Н, м, С6Н3); 10,28 (1Н, уш, с, ЫН)
15 0,92 (3Н, т, и = 7, СН3); 1,46 (2Н, м, и = 7, СН2); 2,14 (6Н, с, СН3); 2,30 (2Н, т, и = 7, СН2); 3,50-3,98 (2Н, м, СН2СН2); 4,48 (2Н, с, СН2Аг); 5,57 (2Н, с, ЫСН2); 6,68-6,91 (3Н, м, С6Н3); 7,73 (1Н, с, Н-6); 10,27 (1Н, уш, с, ЫН)
16 1,06 (3Н, т, и = 7, СН3); 2,18 (6Н, с, СН3); 2,50 (3Н, с, 6-СН3); 2,63 (2Н, кв, и = 7, СН2); 3,58-4,05 (2Н, м, СН2СН2); 4,46 (2Н, с, СН2Аг); 5,49 (2Н, с, ЫСН2); 6,65-6,98 (3Н, м, С6Н3); 7,73 (1Н, с, Н-6); 9,97 (1Н, уш, с, ЫН)
17 2,19 (6Н, с, СН3); 2,46 (3Н, с, 6-СН3); 3,53 (2Н, т, и = 6, СН2); 4,07 (2Н, т, и = 6, СН2); 4,48 (2Н, с, СН2Аг); 5,50 (2Н, с, ЫСН2); 6,87-7,54 (8Н, м, С6Н5, С6Н3); 10,34 (1Н, уш, с, ЫН)
18 0,86 (3Н, т, и = 7, СН3); 1,52 (2Н, м, и = 7, СН2); 2,09 (6Н, с, СН3); 2,33 (2Н, т, и = 7, СН2); 3,51-4,03 (2Н, м, СН2СН2); 4,51 (2Н, с, СН2Аг); 5,56 (2Н, с, ЫСН2); 6,65-6,90 (3Н, м, С6Н3); 11,60 (1Н, уш, с, ЫН)
19 2,12 (6Н, с, СН3); 2,56 (3Н, с, 6-СН3); 3,61-3,99 (4Н, м, СН2СН2); 4,42 (2Н, с, С^РИ); 4,48 (2Н, с, СН2Аг); 5,53 (2Н, с, ЫСН2); 6,67-7,57 (8Н, м, С6Н5, С6Н3); 10,09 (1Н, уш, с, ЫН)
20 1,16-1,59 (2Н, м, СН2); 2,02-2,99 (4Н, м, 5-СН2, 6-СН2); 2,16 (6Н, с, СН3); 4,50 (2Н, с, СН2Аг); 5,57 (2Н, с, ЫСН2); 6,70-6,93 (8Н, м, С6Н5, С6Н3); 10,25 (1Н, уш, с, ЫН)
24 2,28 (3Н, с, СН3); 3,52 (2Н, т, и = 6, СН2); 3,87 (2Н, т, и = 6, СН2); 4,52 (2Н, с, СН2Аг); 5,58 (2Н, с, ЫСН2); 6,90-7,22 (3Н, м, С6Н3); 8,08 (1Н, с, Н-6); 11,60 (1Н, уш, с, ЫН)
25 2,30 (3Н, с, СН3); 2,56 (3Н, с, 6-СН3); 3,50-4,14 (4Н, м, СН2СН2); 4,48 (2Н, с, СН2Аг); 5,50 (2Н, с, ЫСН2); 6,96-7,32 (3Н, м, С6Н3); 11,52 (1Н, уш, с, ЫН)
26 2,25 (3Н, с, 5-СН3); 2,30 (3Н, с, СН3); 2,52 (3Н, с, 6-СН3); 3,46-4,08 (4Н, м, СН2СН2); 4,50 (2Н, с, СН2Аг); 5,58 (2Н, с, ЫСН2); 6,96-7,30 (3Н, м, С6Н3); 10,46 (1Н, уш, с, ЫН)
27 2,32 (3Н, с, СН3); 2,55 (3Н, с, 6-СН3); 3,50-4,12 (4Н, м, СН2СН2); 4,32 (2Н, с, СН2РИ); 4,53 (2Н, с, СН2Аг); 5,57 (2Н, с, ЫСН2); 6,90-7,55 (8Н, м, С6Н5, С6Н3); 10,12 (1Н, уш, с, ЫН)
28 1,10 (9Н, с, №и); 1,88 (3Н, с, СН3); 2,12 (3Н, с, СН3); 3,63 (2Н, т, и = 6, СН2); 3,89 (2Н, т, и = 6, СН2); 4,50 (2Н, с, СН2Аг); 5,51 (2Н, с, ЫСН2); 6,98 (3Н, с, С6Н3); 7,58 (1Н, с, Н-6); 10,35 (1Н, уш, с, ЫН)
29 Спектр ЯМР 1Н (ДМСО-06); 5, м,д,, и (Гц): 1,10 (9Н, с, 1-Ви); 2,16 (3Н, с, СН3); 2,56 (3Н, с, 6-СН3); 3,66-4,10 (4Н, м, СН2СН2); 4,50 (2Н, с, СН2Аг); 5,55 (2Н, с, ЫСН2); 6,92 (3Н, с, С6Н3); 11,39 (1Н, уш, с, ЫН)
9 1,82 (3Н, с, СН3); 2,21 (6Н, с, СН3); 2,32 (3Н, с, 6-СН3); 3,48-4,33 (8Н, м, СН2); 6,53 (2Н, с, Н-2', Н-6'); 6,59 (1Н, с, Н-4'); 11,12 (1Н, уш, с, ЫН)
10 2,19 (6Н, с, СН3); 2,26 (3Н, с, СН3); 3,28 (2Н, т, и = 6, СН2); 3,74 (2Н, т, и = 6, ЫСН2); 4,48 (2Н, с, СН2Аг); 5,48 (1Н, с, Н-5); 6,69-6,94 (3Н, м, С6Н3); 11,08 (1Н, уш, с, NH)
11 2,20 (6Н, с, СН3); 2,29 (3Н, с, 5-СН3); 2,35 (3Н, с, 6-СН3); 3,30 (2Н, т, и = 6, СН2); 3,75 (2Н, т, и = 6, ЫСН2); 4,51 (2Н, с, СН2Аг); 6,72-7,06 (3Н, м, С6Н3); 11,32 (1Н, уш, с, NH)
12 1,92 (3Н, с, СН3); 2,12 (6Н, с, СН3); 3,55 (2Н, т, и = 6, СН2); 3,71 (2Н, т, и = 6, СН2); 4,40 (2Н, с, СН2Аг); 5,44 (2Н, с, ЫСН2); 6,66-6,87 (3Н, м, С6Н3); 7,52 (1Н, с, Н-6); 10,31 (1Н, уш, с, ЫН)
13
2,18 (6H, c, CH3); 2,52 (3H, c, 6-CH3); 3,53-4,02 (4H, м, (2H, c, NCH2); 6,69-6,92 (3H, м, C6H3); 11,50 (1H, уш, с, NH)
CH2CH2); 4,48 (2H, c, CH2A1-); 5,49
Противовирусные свойства синтезированных соединений in vitro в отношении ВИЧ-1 были изучены в ImQuest Biosciences, Inc. (Мериленд, США) в соответствии с ранее описанным методом [1]. Исследования показали, что большинство синтезированных соединений проявляют ин-гибиторный эффект. Наиболее высокую активность продемонстрировали 1-[[2-(3,5-диметил-бензилокси)этокси]метил]-5-бром-6-метилурацил (13), -5,6-диметилурацил (14) и 1-[[2-(3-бром-5-метилбензилокси)этокси]метил]-5,6-диметилура-цил (26), которые ингибировали на 50 % (ИК50) репродукцию ВИЧ-1 в концентрации 0,4, 0,9 и 0,8 мкмоль/л. При этом соединения 13 и 26, содержащие в своем составе атом брома, имели на порядок большую цитотоксичность и следствием этого явился низкий их индекс селективности: 35,7 и 11,6 соответственно. Для соединения 14 индекс селективности был значительно выше и составил 125,1 (табл. 3).
Исследование соотношения "структура-активность" показало, что определяющую роль в проявлении противовирусного эффекта играет длина мостика, связывающего остаток урацила и ароматического фрагмента. Было найдено, что соединения 2-4, 8, 9, имеющие в составе мостика 3 элемента, и соединения 5, 10, 11, имеющие в составе мостика 4 элемента, неактивны или показывают слабый вирусингибиторный эффект.
27 >100,0 14,4 -
28 >100,0 22,0 -
29 1,6 10,6 6,7
В то же время, практически все соединения 1220, 24-29, мостик которых состоял из 6 элементов, показали значительный ингибиторный эффект. Также было изучено влияние заместителей на противовирусный эффект. Было показано, что введение в 5 или 6 положение остатка урацила небольших по размеру заместителей (атом брома или СН3-группа) ведет к увеличению противовирусной активности. Синергизм наблюдается при одновременном введении этих заместителей в 5 и 6 положения пиримидинового кольца (соединения 13, 14, 16, 18, 20 и 25). Увеличение размеров заместителей ведет к значительному понижению противовирусных свойств, как это видно на примере производных -5-бром-6-пропилурацила (18, ИК50 2,2 мкмоль/л), -5-этил-6-метилурацила (16, ИК50 6,9 мкмоль/л) и 5,6-триметиленурацила (20, ИК50 11,8 мкмоль/л). При введении ароматических заместителей образовывались полностью неактивные соединения 17 и 19. Было изучено влияние заместителей в ароматическом кольце на противовирусную активность. Обнаружено, что замещение одной из ме-тильных групп атомом брома (соединения 24-27) или трет-бутильной группой (соединения 28 и 29), в целом, незначительно понижает вирусин-гибиторные свойства, однако при этом значительно возрастает цитотоксичность.
Таким образом, обнаружен новый класс высокоэффективных ингибиторов репродукции ВИЧ-1, проявляющих противовирусные свойства в микромолярных концентрациях. Данные скрининга будут использоваться нами для синтеза новых более эффективных ингибиторов ВИЧ-1.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Спектры ЯМР Н регистрировали на спектрометре Bruker DRX-500 (500 МГц) в ДМСО-06, внутренний стандарт ТМС. Интерпретацию спектров осуществляли с помощью лицензионной программы ACD/HNMR Predictor Pro 3,0 фирмы Advanced Chemistry Development (Канада). Масс-спектры электронного удара регистрировали на спектрометре Varian MAT-111 c прямым вводом образцов в ионный источник, энергия ионизирующих электронов 70 эВ. ТСХ выполняли на пластинах Silufol UV-254 в системе этилацетат -метиленхлорид, 1 : 1, проявление в парах йода. Препаративную колоночную хроматографию выполняли на силикагеле марки Kieselgur 60 (Fluka AG). Температуры плавления измерены в стеклянных капиллярах на приборе Mel-Temp 3,0 (Laboratory Devices Inc., США).
1-[2-(3,5-Диметилфенокси)этил]урацил (2). Смесь 2,4-бис-триметилсилилокси)пиримидина,
Таблица 3
Анти-ВИЧ-1 активность синтезированных соединений в культуре СЕМ-SS клеток in vitro
Соеди- Противовирусная активность, ИК50, мкмоль/л Цитотоксичность, ТК50, мкмоль/л Индекс селективности, ТК50 / ИК50
нение
2 72,5 >100,0 > 1,4
3 >100,0 1,9 -
4 >100,0 55,3 -
5 >100,0 >100,0 -
8 > 100,0 > 100,0 -
9 20,0 >100,0 > 5,0
10 81,4 > 100,0 >1,2
11 >100,0 20,6 -
12 86,6 >100,0 >1,2
13 0,4 13,7 35,7
14 0,9 106,0 125,1
15 11,3 135,0 12,0
16 6,9 84,1 12,2
17 >200,0 48,3 -
18 2,2 110,0 50,3
19 >100,0 19,1 -
20 11,8 >100,0 >8,4
24 82,3 >100,0 >1,2
25 3,4 32,3 9,4
26 0,8 9,5 11,6
полученного из 1,7 г (15,17 ммоль) урацила по стандартной методике [2, 3], и 4,05 г (14,83 ммоль) 2-(3,5-диметилфенокси)-1-бромэтана (6) нагревают при 180-190 °С в течение 3 ч, охлаждают до комнатной температуры, растворяют в 20 мл этилацетата и обрабатывают 10 мл этанола. Осадок отфильтровывают, промывают на фильтре этилацетатом (2х10 мл), фильтрат упаривают при пониженном давлении, закристаллизовавшийся остаток дважды перекристаллизовывают из смеси ацетон-петр. эфир (2 : 1). Получили 1,3 г (59 %) соединения 2 в виде белого мелкокристаллического вещества с Т.пл. 180-181 оС и Rf 0,40 (этилацетат - метиленхлорид, 1 : 1). Спектр ЯМР 1Н (ДМСО-06), 5, м.д., J (Гц): 2,21 (6H, c, CH3); 3,324,29 (8H, м, CH2); 5,53 (1H, д, J = 8, H-5); 6,53 (2H, c, H-2', H-6'); 6,59 (1H, c, H-4'); 7,63 (1H, д, J = 8, H-6); 11,19 (1Н, уш. с, NH). Масс-спектр, m/z: 260 [M]+.
1-[2-(3,5-Диметилфенокси)этил]-6-метилу-рацил (б). Суспензию 3,0 г (23,79 ммоль) 6-ме-тилурацила и 3,3 г (23,88 ммоль) карбоната калия в 40 мл ДМФА перемешивают при 80 оС в течение 1 ч, добавляют раствор 6,6 г (24,16 ммоль) 2-(3,5-диметилфенокси)-1-бромэтаном (6) в 20 мл ДМФА и полученную смесь перемешивают при той же температуре еще 10 ч. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, фильтруют, фильтрат упаривают в вакууме, остаток экстрагируют горячим ацетоном (5х20 мл). Экстракт упаривают при пониженном давлении и остаток хроматографируют на колонке с 30 г силикагеля. При элюировании колонки хлороформом вымывают 1,3-дизамещенный продукт. Дальнейшее элюирование смесью хлороформ-метанол (10 : 1) дает 1-замещенный продукт. Фракции, содержащие продукт, объединяют и упаривают в вакууме, кристаллический остаток пе-рекристаллизовывают из смеси ацетон-гексан и получают 1,8 г (24 %) соединения 8 в виде белого мелкокристаллического вещества с Т.пл. 196-197°С и Rf 0,43 (этилацетат - метиленхлорид, 1 : 1). Спектр ЯМР ^Н (ДМСО-06), 5, м.д., J (Гц): 2,21 (6H, c, CH3); 2,32 (3H, c, 6-CH3); 3,48-4,33 (8H, м, CH2); 6,53 (2H, c, H-2', H-6'); 6,59 (1H, c, H-4'); 7,50 (1H, c, H-6); +1,14 (1H, уш. с, NH). Масс-спектр, m/z: 274 [M]+.
1-[[2-(3,5-Диметилбензилокси)этокси]ме-тил]тимин (12). К раствору 2,4-бис(триметил-силилокси)-5-метилпиримидина, полученного из 2,0 г (15,86 ммоль) тимина по стандартной методике [4, 5], в 30 мл безводного хлороформа при перемешивании при комнатной температуре прибавляют раствор 3,65 г (15,96 ммоль) 2-(3,5-
диметилбензилокси)-этилхлорметилового эфира (21) в 30 мл безводного хлороформа. Полученную смесь перемешивают 16 ч, обрабатывают 10 мл этанола, перемешивали еще 1 ч, фильтруют, фильтрат упаривают, остаток дважды перекристаллизовывают из смеси этилацетат-гексан и получают 4,0 г (79 %) соединения 12 в виде белого мелкокристаллического вещества с Т.пл. 108-110 °С и Rf 0,33 (этилацетат - метиленхлорид, 1 : 1). Спектр ЯМР 1Н (ДМСО-й6) 5, м.д., J (Гц): 1.92 (3H, c, CH3); 2.12 (6H, c, CH3) 3.55 (2H, т, J = 6, CH2); 3,71 (2H, т, J = 6, CH2) 4,40 (2H, c, CH2Ar); 5,44 (2H, c, NCH2); 6,66-6,87 (3H, м, C6H3); 7,52 (1H, c, H-6); 10,31 (1H, уш. с, NH). Масс-спектр, m/z: 318 [M]+.
Соединения 3-5, 13-20 и 24-29 получали аналогично (табл. 1 и 2).
Исследование анти-ВИЧ-1 активности in vitro. CEM-SS-клетки суспендировались в культу-ральной среде в количестве 105 клеток/мл и инфицировались ВИЧ-1 (штамм HTLV-IIIB) при мультипликации инфекции 0,2. Немедленно после инфицирования вирусом вносились растворы, содержащие различные концентрации исследуемого вещества в ДМСО, и инкубировались в течение 4-х дней при 37оС. Число живых клеток устанавливалось на 4-й день инкубации при помощи 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий бромида, при этом устанавливалась концентрация вещества, которая на 50 % защищала CEM-SS-клетки от цитопатического эффекта ВИЧ-1 (ИК50).
Цитотоксичность тестируемых соединений проводилась параллельными экспериментами, при этом устанавливалась концентрация вещества, которая на 50 % уменьшала количество CEM-SS-клеток (ТК50). Расчетным путем определяли индекс селективности, являющийся отношением цитотоксической концентрации к ингиби-торной концентрации: ТК50/ИК50 [4].
ЛИТЕРАТУРА
1. Новиков М.С., Озеров А.А., Брель А.К. и др. / ХГС. - 1996. -C. 380-385.
2. Новиков М.С., Тимофеева К.В., Солодунова Г.Н. и др. / Вестн. ВМА. - 2001. - Т. 57, Вып. 7. - С. 60-62.
3. Озеров А.А., Новиков М.С., Брель А.К. и др. / ХГС. - 1998. -C. 691-697.
4. Buckheit R.W., White E.L., Fliakas-Boltz V., et al. / Antimicrob Agents Chemother. - 1999. - Vol. 43. - Р. 18271834.
5. Coutouli-Argyropoulou E., Pilanidou P. // Tetrahedron Lett. - 2003. - Vol. 44. - P. 3755-3758.
6. Wamberg M., Pedersen E.B., El-Brollosy N.R., et al. / Bioorg. Med. Chem. - 2004. - Vol. 12. - P. 11411149.
Novikov M.S., Ozerov A.A., Orlova Yu.A., Buckheit R.W. 1-(3,5-Dimethylaryloxy)alkyl)-derivatives of uracil as potential antiviral agents // Vestnik of Volgograd State Medical University. - 2005. - № 3(15). - P. 27-31.
On inhibitory analysis it was shown for 1-(3,5-dimethylaryloxy)alkyl]-derivatives of uracil to have expressed anti-HIV-1 effect. This activity was revealed in micromolar concentration indicating high efficiency of the new class of antiviral drugs.
